1、实验研究红花水提物对氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）所致的心肌微血管内皮细胞损伤的影响摘 要：观察红花水提物对血管内皮细胞的保护作用，探求其抗氧化的机制。方法：利用大鼠原代心肌微血管内皮细胞（rCMEC）的培养进行试验，并对获得的数据进行方差分析（ANOVA）及多组间比较等。结果：提示呈现红花水提物具有提高抗氧化酶活性、减少氧化产物生成及减轻ox-LDL 损伤作用的趋势。结论：通过红花水提物预处理，可以减轻 ox-LDL 对内皮细胞的氧化损伤。关键词：红花水提物；心肌微血管内皮细胞；氧化低密度脂蛋白 中药在治疗心血管疾病方面具有明显的功效，本文就红花水提物对氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）所致
2、的心肌微血管内皮细胞损伤的影响机制做一探讨。1 资料与方法1.1 实验药物1.1.1 红花水提物过程：取新疆红花 200 g，加水 2 500 mL，加热到沸腾，然后提取 1.0 h，并进行过滤，最后把滤液浓缩到每毫升相当于3.338 g 生药1。1.2 实验动物：出生 57d 的 Wistar 大鼠乳鼠。1.3 实验试剂：噻唑蓝（MTT，sigma，SP 1 080） 、氧化低密度脂蛋白（ox-LDL） 、超氧化物歧化酶（SOD） 、二甲基亚砜（DMSO） 、丙二醛（MDA） 、一氧化氮合酶（NOS） 、乳酸脱氢酶（LDH） 、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px） 、一氧化氮（NO）和黄嘌呤氧
3、化酶（XOD）测定试剂盒。1.4 实验仪器：超净工作台，MCO-15 AC 型 CO2 培养箱，MK 型倒置显微镜，H2S-H 型恒温水浴振荡器，LDZ 4-0.8 型离心机，550 型酶联免疫检测仪。1.5 红花水提物对 ox-LDL 所致心肌微血管内皮细胞损伤的影响的实验方法1.5.1 培养大鼠原代心肌微血管内皮细胞（rCMEC）：首先进行rCMEC 原代培养，经鉴定为 rCMEC 后，再传代培养，把第 3 代 rCMEC 用于实验2。1.5.2 实验分组：以 1.5105 个/mL 的密度把内皮细胞接种于 96 孔板，每孔 0.1 mL，24 h 细胞贴壁后，分组：空白对照组：每孔加入无
4、血清培养基 100 L；模型对照组：每孔加入剂量为 100 gmL-1的 ox-LDL 的无血清培养基 100 L 作用 24 h；红花水提物 500 gmL-1 组，100 gmL-1，20 gmL-1 组；造模前 24 h 分别加入不同浓度的红花水提物 100 L，然后加入含 ox-LDL 的无血清培养基100 L 作用 24 h3。1.6 形态学观察1.7 指标检测及计算：通过 MTT 法检测，测出活细胞的量与吸光度（A 值）成正比，故用 A 值表示细胞存活率，抑制率=1-（实验孔 A 值-空白孔 A 值）/（对照孔 A 值-空白孔 A 值）100%。在酶联免疫检测仪上进行 MTT 的检
5、测4。1.8 数据分析：以均值标准差形式来表示结果，采用方差分析（ANOVA）进行多组间比较，以 P0.05 为差异有统计学意义。2 结果2.1 形态学观察：在倒置显微镜下观察发现：正常对照组与大、中剂量组细胞呈现相似形态，无显著性变化；模型组细胞出现皱缩，呈现空泡。模型组大部分细胞在 MTT 染色后不着色，少数细胞出现紫色结晶物，其数量随着各个给药组红花水提物浓度的增加而增多。2.2 对内皮细胞存活率的影响：红花水提物 500 g?mL-1，100 g?mL-1，20 g?mL-1 均能明显抑制 ox-LDL 引起的内皮细胞损伤，使细胞存活率明显提高2.3 不同浓度的红花水提物均具有很好的抑
6、制作用，对 ox-LDL 所致的微血管内皮细胞的 NO，SOD，GSH-Px 和 NOS 含量降低，还可以减少细胞上清液中 LDH，XOD 和 MDA 的含量。3 讨论实验发现，生物体内低密度的氧化修饰呈现一个自由基的链式反应过程。利用红花水提物来提高受 ox-LDL 损伤后内皮细胞的超氧化物歧化酶和谷胱甘肽过氧化物酶的活性，以减轻氧化损伤。通过红花水提物的预处理能有效减轻 ox-LDL 对内皮细胞的氧化损伤，抑制丙二醛（MDA）和乳酸脱氢酶（LDH）的生成，提高 NO，SOD，GSH-Px 和 NOS 的活性，保护内皮细胞，抑制其氧化损伤。参考文献：1 陈少刚,李长潮.当归注射液对家兔心肌缺血再灌注损伤的保护作用J.中国中西医结合杂志,1995,10(1):142.2 何煜舟,丁美萍.大豆异黄酮对氧化损伤的血管内皮细胞的保护作用J.浙江中医杂志,2006,13(2):334.3 田晓华,丛建波,施定基,等.褐藻硫酸多糖清除活性氧自由基作用及动力学的 ESR 研究J.营养学报,1997,23(4):274.4 伍 静,姚尚龙,杨 艳,等. 异丙酚对鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤中的保护作用J.中华麻醉学杂志,2002,17(9):312.
