1、中药佳蓉片与雌激素对生殖系统作用的异同作者：陈亚琼，杨海燕，黄艳红，吴曙光，叶雪清 【关键词】 中成药 关键词: 中成药;卵巢切除术;子宫;小鼠;阴道 摘 要:目的 观察复方中药佳蓉片（JRP）与乙烯雌酚（DES）对生殖系统的不同作用. 方法 用 JRP低（JRP-L，6g kg-1 ） 、JRP 中（JRP-M，12g kg-1 ） 、JRP 高（JRP-H，24g kg-1 ）三个不同剂量、DES（0.17mg kg-1 ）和生理盐水（Con-trol0.5mL）每日分别灌胃处理70只未成年（17d）昆明小鼠 3d和 50只去卵巢成年（60d）昆明小鼠28d，成年小鼠实验中另设灌服生理盐水
2、的假去卵巢组（Sham）和去卵巢组（OVX） ，观察对子宫质量/体质量百分比（PUM） 、阴道上皮细胞角化百分比（VKEC） 、血清 17 雌二素（E2）水平的变化. 结果 （1）PUM 值JRP不同剂量处理未成年小鼠 3d后，JRP-M 组的 PUM值高于 Control组（12.52.3，vs8.21.4，P0.01） ，但明显低于 DES组（37.03.8，P0.01）.JRP 处理成年去卵巢小鼠 28d后，OVX+JRP 三个组的 PUM值显著高于 OVX组（分别为10.91.9，11.33.3，14.67.8，vs8.41.4，P0.05） ，但明显低于OVX+DES组（29.511
3、.7，P0.01）和 Sham组（33.612.1P0.01）;（2）VKEC 值 OVX+JRP三个不同剂量组的 VKEC值与 OVX比较明显增加（分别为 7.12.5，11.03.5，9.45.4，vs1.80.8，P0.05） ，但增加值显著低于 DES组（5.71.4，P0.05）;（3）血清 E2值 OVX+JRP组和OVX+DES组的血清 E2水平与 OVX组比较无差异. 结论 JRP 对小鼠子宫、阴道有弱雌激素样作用，但作用强度远低于 DES，这种作用可能不是通过提高内源性 E2水平而实现的. Keywords:Chinese patent drugs;ovariectomy;u
4、terus;mice;vagina Abstract:AIM The investigated was designed to evaluate the different effects of diethylstilbestrol（DES）synthesized estrogen and Jiarongpian（JRP）made from traditional Chi-nese herbal medicines of tonifing the kidney，on reproductive system in female mature ovaritectomized（OVX）and imm
5、a-ture Kunming mice.METHODS Fifty Kunming female im-mature（17d old）mice were dividing into five groups:JRP lower dosage（JRP-L，6g kg-1 d-1 ） ，JRP mediun dosage（JRP-M，12g kg-1 d-1 ） ，JRP higher dosage（JRP-H，24g kg-1 d-1 ） ，DES（0.17mg kg-1 d-1 ）and Control（normal saline NS，0.5mL d-1 ） ，and were fed o.5
6、mL solution in-cluding JRP，DES or normal saline for3d.All immature mice were sacrificed to examine the percentage of uterine mass（PUM）.Sixty Kunming mature（60d old）female mice were divided into six groups:Sham operated（Sham，NS0.5mL d-1 ）;OVX（NS0.5mL d-1 ）;OVX+JRP-L（6g kg-1 d-1 ） ，OVX+JRP-M（12g kg-1
7、d-1 ） ，OVX+JRP-H（24g kg-1 d-1 ） ，OVX+DES（0.17mg kg-1 d） ，and all mature mice were fed0.5mL solution of JRP，DES or NS beginning3d after surgery for28d.All of the animals were sacrificed to measure the percentage of uterine mass（PUM） ，vaginal keratinized epithelial cells（VKEC） ，and serum E2level.RESUL
8、TS PUM of OVX+JRP-M group in imma-ture mice was significantly increased than in control group（12.52.3，vs8.21.4，P0.05） ，but it far from lesser than DES group（12.52.3，vs37.03.8，P0.01）.The PUM of OVX+JRP-L，JRP-M，JRP-H groups in mature mice were significantly higher than in OVX group（10.91.9，11.33.3，14.
9、67.8，vs8.41.4，P0.05） ，P0.01，respectively） ，but they were less markedly than that in DES group（29.511.7，P0.01 ）and Sham group（33.612.1，P0.01）;The VKEC of OVX+JRP-L，JRP-M，JRP-H groups in ma-ture mice were increased significantly than in OVX group（7.12.5，11.03.5，9.45.4vs1.80.8，P0.05，respec-tively） ，but
10、 they less than that in DES group（P0.01）.The serum E2levels were similar in OVX+JRP-L，JRP-M，JRP-H groups and OVX+DES.CONCLUSION Jiarongpi-an，a kidney tonify recipes made from traditional Chinese medicine，may play a weakly estrogen-like role on reproduc-tive system in mature OVX or immature female Ku
11、nming mice，but the effect was significantly less than estrogen. 0 引言 激素替代治疗在治疗更年期综合征，预防绝经后骨质疏松和心血管疾病等方面有很好的疗效，但用药后患者阴道不规则出血、增加患子宫内膜癌和乳腺癌的危险等副作用，使激素替代治疗的可接受性较差1-3 .研究发现中药佳蓉片（JRP）对治疗更年期综合征，防治骨质疏松等疾患有很好的疗效，其临床效果与雌激素相似4，5 .但 JRP是否也具有雌激素样的作用，特别是对生殖系统的副作用值得研究.我们通过观察药物对未成年和成年卵巢摘除小鼠子宫体质量百分比、阴道细胞涂片和血清雌激素等变化，
12、比较了 JRP与合成雌激素乙烯雌酚（diethyl-stilbestrol，DES）对生殖器官的雌激素样作用. 1 材料和方法 1.1 实验药品 DES（diethylstilbestrol）购自 Sigma公司.JRP（由西安博爱制药厂提供）每片含生药 1.0g，临用前用生理盐水配制成所需浓度的混悬液. 1.2 动物饲养条件 雌性昆明小鼠购于本校实验动物中心，饲养温度 22，12h 光照，12h黑暗，容许自由饮水及摄食.未成年雌性昆明小鼠 70只，出生后17d，体质量（152）g.随机分为 7组，每组 10只，立即开始实验.成年雌性昆明小鼠 50只，出生后 60d，体质量（372）g，随机分
13、为 5组，每组 10只，适应性饲养 5d后开始实验. 1.3 未成年雌性小鼠实验 分组及用药剂量:对照组（control，生理盐水 0.5mL d-1 ） ，DES 组（0.17mg kg-1 ） ，JRP 组根据剂量又分为 JRP-L（6g kg-1 ） ，JRP-M（12g kg-1 ） ，JRP-H（24g kg -1 ）等 3个组，共处理 3d. 1.4 成年雌性小鼠实验 1.4.1 模型复制及分组处理 模型复制:全部动物在戊巴比妥钠（10g L-1 ）麻醉下行手术.假手术组仅在开腹后去除卵巢周围的脂肪组织后关腹;其余各组去除双侧卵巢.术后连续观察阴道涂片 4d，去卵巢后小鼠表现为动情
14、间期表现，证实手术成功;分组处理:根据每日药物处理剂量分为 4组:OVX 组（生理盐水 0.5mL d-1 ） ，假手术组（Sham，生理盐水 0.5mL d-1 ） ，OVX+DES 组（0.17mg kg-1 ）和 OVX+JRP组.JRP 根据处理剂量不同又分为 JRP-L（6g kg-1 ） 、JRP-M（12g kg-1 ） 、JRP-H（24g kg-1 ）等 3组.术后第 5d开始药物灌胃，每只 0.5mL，每日 1次，连续 28d. 1.4.2 阴道细胞涂片 成年小鼠灌胃第 14日开始进行阴道涂片观察:以左手背位固定小鼠，右手取一预先吸有生理盐水 0.10.2mL 的钝头吸管，
15、小心插入小鼠阴道内 23cm 反复抽吸 23 次，吸出 1滴液体于载玻片上，均匀涂开，放入 950mL L-1 乙醇中固定 15min，取出晾干，用伊红（5g L-1 ）染色，显微镜下观察并记数阴道上皮角化细胞（VKEC）百分率，每日涂片 1次，连续观察 7d. 1.5 动物处理 未成年和成年小鼠均在最后一次喂药后 24h称体质量，眼球取血0.8mL，然后以颈椎脱臼处死动物，剖腹取出子宫，迅速用电子天平称子宫湿质量，计算子宫质量百分比（PUM，%）.成年小鼠的血清 17 雌二醇水平（E2）用放射免疫法测定.统计学方法:数据采用 x s表示，用t检验比较组间差异. 2 结果 2.1 JRP 对未
16、成熟小鼠体质量和子宫湿质量的影响 与对照组比较，未成年雌性小鼠在 JRP3个不同剂量组灌胃处理 3d后，体质量增加值和子宫湿质量与对照组比较有显著差异（P0.01） ，但增加值显著低于 DES组（P0.01）.JRP-M 组处理 3d后，小鼠体质量和子宫湿质量较其它各 JRP组增加明显（P0.01，Tab1）. 表 1 佳蓉片和雌激素对未成熟雌性小鼠子宫及体质量的影响（略） 2.2 JRP 对成年去卵巢小鼠的影响 去卵巢 4wk后，OVX 组的 PUM明显低于 Sham组（P0.01）;DES组的 PUM与 Sham组无显著差异;与 OVX对照组比较，JRP-L，JRP-M，JRP-H3 个组
17、的 PUM增加（P0.05） ，但显著低于 Sham组与OVX+DES组（P0.05）.小鼠去卵巢后，阴道细胞学检查无动情周期的变化，角化细胞数量极少;OVX+DES 的角化细胞数量显著上升，与 OVX对照组有显著的差异（P0.05）;JRP 各组的阴道角化细胞数量与 OVX组相比较有显著性增加，但远低于 OVX+DES组.OVX 小鼠血清雌激素水平降低，与 Sham组有显著差异（P0.01） ，JRP-L，JRP-M，JRP-H 和OVX+DES与 OVX组的血清 E2水平相似（Tab2）.表 2 佳蓉片对去卵巢小鼠子宫质量百分比、阴道角化上皮细胞、血清 E2水平的影响（略） 3 讨论 更年
18、期综合征和绝经相关疾病的发生与更年期妇女卵巢功能低下、雌激素水平降低密切相关.随着人口老龄化社会的到来，更年期综合征及相关疾病的患者越来越多，由此而引起的家庭和社会双重负担日益加重.目前，激素替代治疗是防治绝经期综合征及绝经相关疾病的主要措施，但长期应用有增加子宫内膜癌和乳腺癌发病率的危险，使绝经后妇女对应用激素替代治疗的顺从性不高6-10 .因此，寻求 副作用小的更有效的治疗方法具有十分重要的意义.我们多年的临床实践和基础研究证明，主要成分为倒卵五叶加、熟地黄、菟丝子、肉苁蓉、女贞子补肾中药复方 JRP具有补肾、滋阴壮阳和扶正固本的功效，对更年期综合征及绝经后骨质疏松等有很好的疗效，临床效果
19、与雌激素类似4，5 .现代研究表明，部分植物药材中包含一类具有雌激素活性的化学物质，统称为植物雌激素（phytoestrogens） ，它们的结构可能与雌激素相似，可能存在与雌激素受体结合的基团，也可能以其他方式与机体作用而表现为雌激素样效应11，12 .植物雌激素有防治绝经期综合征，绝经后骨质疏松的功效7-11 ，而无刺激子宫内膜和乳腺增生的副作用.有学者13-15 提出植物雌激素可作为激素替代治疗的选择之一.植物雌激素的深入研究为补肾中药防治绝经相关疾病提供了强有力的证据.有关 JRP作用机制的研究也表明，JRP 对神经递质和性腺轴激素的调节作用4，5 与雌激素作用类似.因此，证实 JRP
20、是否具有雌激素样作用及对生殖系统的副作用是本实验的重点研究内容. 未成熟雌性小鼠是公认的研究外源性雌激素对生殖器官作用的理想模型，采用子宫湿质量与体质量之比的百分数作为评价雌激素活性指标.该法简便快速，灵敏度高，植物药中的多种化学结构经体内转化后才有雌激素活性的物质和中间代谢产物特别适用于本方法检测.本实验中，用合成雌激素 DES处理未成熟小鼠 3d后体质量和子宫湿质量显著增加，子宫体质量百分比值升高，证实了本模型的可靠性.JRP3 个不同剂量组处理未成年小鼠 3d后，子宫体和体质量显著高于对照组.使去卵巢小鼠子宫体质量百分比值显著增加，并成剂量依赖性关系.结果提示中药 JRP有促进机体合成代
21、谢和弱雌激素样作用.去卵巢小鼠的阴道细胞涂片可作为检测植物雌激素活性的敏感指标.有正常动情周期的小鼠摘除卵巢后，阴道上皮角化细胞率明显减少至 1.8%，而用 DES后阴道上皮细胞率值达到95.7%.在本实验中，JRP3 个剂量组的阴道细胞涂片中角化细胞数量明显高于对照组，但远远低于 DES组对阴道上皮细胞的影响，JRP 的作用仅为DES的九分之一.血清雌激素水平测定发现，去卵巢小鼠雌激素水平低落，用 JRP后雌激素水平无明显变化，间接提示 JRP弱雌激素样作用并不是通过提高内源性雌激素水平而实现的.近年来的研究提示部分中药，包括佳蓉片组方中的中药含有植物雌激素，JRP 的弱雌激素样活性有可能是
22、JRP组方中的植物雌激素发挥的作用，这也为 JRP治疗更年期综合征，绝经后骨质疏松等疾病，提供了药理学证据.中药的药理作用表现为多靶点、多途径的综合效应，这与中药，特别是中药复方中含有众多的化学物质有关.我们的研究仅从一个侧面，一个角度探讨了 JRP与雌激素作用的差异，补肾中药的复杂作用机理还有待于进一步研究. 参考文献: 1Grady D，Rubin SM，Petitti DB.Hormone therapy to prevent disease and prolon life in postmenopausal women J.Ann In-tern Med，1992;117（12）:10
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