1、连环蛋白在原发性肝细胞癌中的表达及其临床意义 【关键词】 ,癌 关键词: 癌，肝细胞;-连环蛋白;免疫组织化学 摘 要:目的 研究 -连环蛋白在原发性肝细胞癌中的表达及其与原发性肝细胞癌分化、侵袭转移和预后的关系. 方法 应用免疫组织化学方法对 63 例原发性肝细胞癌石蜡包埋标本进行 -连环蛋白半定量检测. 结果 有 49 例（78%）原发性肝细胞癌 -连环蛋白阳性表达，低分化癌的 -连环蛋白阳性率明显高于高分化癌（P0.05）.-连环蛋白阳性表达率在 AFP 高表达肝癌组高于 AFP 低表达组（P0.05）.-连环蛋白阳性表达率在有淋巴结转移肝癌组织高于无淋巴结转移组（P0.05）.-连环蛋
2、白阳性表达患者 2a 生存率（11%）显著低于阴性表达者（32%，P0.05）. 结论 -连环蛋白表达与肝癌组织的分化程度、有无淋巴结转移、患者的 AFP 水平呈正相关，-连环蛋白表达与患者预后相关，可以作为判断原发性肝细胞癌预后的生物学指标. Keywords:carcinoma，hepatocellular;-Catenin;immuno-histochemistry Abstract:AIM To investigate the-Catenin expression in primary hepatocellular carcinoma and its relation ship wit
3、h tumor differentiation，AFP level，invasion ，metastasis and prognosis.METHODS -Catenin expression was detected in63cases of primary hepatocellular carcinoma by using im-munohistochemical technique（DAB method）.RESULTS Expression of-Catenin in77.89%cases of primary hepato-cellular carcinoma and15%cases
4、 of liver cirrhosis was stronger than that in the surrounding normal liver tissue.The positivity rate of-Catenin was higher in poorly differen-tiated carcinoma group than that in well differentiated group（P0.001）.The positivity rate of-Catenin was higher in high level AFP group than that in low leve
5、l AFP group（P0.001）.The positivity rate of-Catenin was higher in metastatic carcinoma group than that in nonmetastaatic group（P0.001）.The two-year survival rate was lower in-Catenin positive group（32.5%）than that in negative group（11.3%，P0.05）.CONCLUSION Strong or positive ex-pression of-Catenin is
6、related with differentiation，AFP lev-el and metastasis of primary hepatocellular carcinoma.The expression of-Catenin might have prognostic value. 0 引言 原发性肝细胞肝癌（HCC）是我国最常见的恶性肿瘤之一，其发病机制和发病原因至今未明.已有报道，一些细胞因子在正常细胞中异常表达，或正常细胞内不应出现的某些因子反而出现聚集状态，将启动不同的信号转导途径，直接或间接地影响核内某些基因的表达，导致细胞增殖过度，引发肿瘤1，2 . -连环蛋白（-Cate
7、nin）作为细胞内的一种蛋白质，既是 Wnt 信号传导途径中关键调控因子，又与细胞间粘附作用有关，而这两种作用与肿瘤发生、发展均有密切关系3 .已有报道称在大肠癌、肺癌、肾癌等肿瘤的研究中发现癌细胞胞质内 -Catenin 表达增加4-6 ，但其在肝癌中的表达及其临床意义的报道在国内还很少.我们应用免疫组织化学方法检测 63 例原发性肝细胞癌石蜡包埋标本中 -连环蛋白的表达，并探讨其临床意义，为防治提供依据. 1 材料和方法 1.1 材料 1988/2001 第四军医大学西京医院普外科手术切除的原发性肝细胞癌病例标本 63（男 46，女 17）例，年龄 3672（平均 55）岁.按 1991
8、年 WHO 病理分类标准，肝细胞肝癌 63 例，其中级 14 例，级16 例，级 33 例，其中手术时发现肝外淋巴结转移 16 例.另取肝硬化20 例，正常肝组织 10 例. 1.2 试剂 兔抗人 -catenin 多克隆抗体（附阳性对照片） 、SABC试剂盒、DAB 显色试剂盒均为武汉博士德生物制品公司产品. 1.3 方法 标本均经 40gL-1 多聚甲醛固定，常规石蜡包埋，5m 连续切片，分别进行 HE 染色及免疫组化染色，切片常规脱蜡至水，H2 O 2 灭活内源性过氧化物酶，微波修复抗原，正常山羊血清封闭，分别滴加 -catenin 一抗，4C 过夜，滴加生物素化二抗，DAB 显色，苏木
9、精复染，脱水透明封片，将 -catenin 染色阳性的肝癌组织作为阳性对照，空白对照选择 PBS 代替一抗. 1.4 Catenin 染色结果判定标准 按肿瘤细胞着色强度及阳性细胞分布范围分为 3 个等级:全片未见着色或极少量细胞散在着色为（-） ，胞质和胞膜棕黄色着色为阳性，10%30%细胞着色但镜下易观察到为（+） ，大于 30%细胞清晰着色为（）. 统计学方法:免疫反应结果及其临床病理参数的关系采用 2 检验，生存率计采用寿命表法，不同分组间生存率差异使用时序检验. 2 结果 2.1 Catenin 在 HCC 中表达的临床病理学特点 -Catenin 以膜定位为主，在 10 例正常肝组
10、织中无 1 例阳性表达;20 例肝硬化组织中仅 3 例（15%）呈（+） ，且主要定位于肝细胞膜的接触面和胆小管面，未见肝细胞的血窦面和胞质着色;而 63 例 HCC 中有 49 例（78%）标本 -Catenin 呈阳性表达，且 36 例为（）表达，主要定位于肝癌细胞的外周胞质、血窦面、接触面和腺腔面.胞质 -Catenin 阳性着色为点状着色或片状浅着色，胞膜 -Catenin 阳性着色为不规则线状或颗粒状着色.在靠近毛细胞胆管腔面和小胆管腔面常见肝癌细胞阳性深着色.-Catenin 的分布呈异质性:有大片细胞广泛表达，小片细胞区域表达，散在表达或大片细胞中仅数个细胞表达（Fig1，2）.
11、肝癌组织和非肝癌组织的 -Catenin 表达亦呈异质性:肝癌组织 -Catenin 表达为外周胞质点状或片状浅着色，粗大的胞膜不规则线状、点状着色，偶见胞核深染;而非肝癌组织大都阴性表达，或少量的胞膜线状、点状着色.-Catenin的表达与肿瘤的分化程度呈反比，即分化差时 -Catenin 的表达趋于增多.级中（-）8 例、 （+）表达 1 例、 （）表达 5 例;级中（-）2 例、（+）表达 5 例、 （）表达 9 例;级中（-）4 例、 （+）表达 7 例、 （）表达 22 例.3 组比较，差异有显著性（P0.05）.此外，-Catenin 的表达与 HCC 有无淋巴结转移呈正相关性，在
12、淋巴结转移组 -Catenin（-） 、 （+） 、 （）表达的例数分别为 1，7，8;在无转移组分别为13，6，28 例;两组比较，差异有显著性（P0.05）.瘤体大小不影响-Catenin 的定位、分布和表达. 图 1 图 2 略 2.2 Catenin 与患者 AFP 水平及预后的关系 -Catenin 的阳性表达与 HCC 患者 AFP 水平呈正比，即 AFP 水平越高者 -Catenin 阳性表达越强，AFP400gL-1 组 -Catenin（-） 、 （+） 、 （）表达例数分别为 11，5，13;AFP400gL-1 组分别为3，8，23 例.二组之间存在显著性差异（P0.00
13、1）.63 例 HCC 患者中有 45 人获得术后随访，随访率为 71%，患者生存时间为 3mo6a，除去由于术后并发症生存少于 6mo 的病例，-Catenin 阳性表达组平均生存期 7mo，而无表达组 17mo，Logrank 检验显示两者的生存率差异有显著性（P0.05）. 3 讨论 HCC 的发生、发展是一个多基因参与、多因素影响、牵涉多条信号传导途径的复杂过程.Wnt 信号转导途径异常是目前研究肿瘤发生机制的一个热点.而 -Catenin 正是这一传导通路的关键调控点7 .本实验结果显示，49/63 的 HCC 标本中 -Catenin 呈阳性表达，且表达程度与HCC 的病理分级、术
14、后存活时间呈负相关，与患者 AFP 水平，有无淋巴结转移呈正相关.表明 -Catenin 在 HCC 发生、发展过程中的作用不容忽视.-Catenin 被发现是一种与跨膜粘附分子钙粘着素（Cadherin）相连的胞内特异蛋白，以复合体形式存在于各类上皮和某些实质细胞中，介导细胞间连接，近几年研究发现，-Catenin 作为一种关键 Wnt 蛋白，与 APC，GSK-3 复合、解离、胞质积累、入核，作用于核内转录因子TCF/LEF 家族，促进基因转录8-11 ，或刺激增殖，或抑制凋亡，从而认为 -Catenin 是一种癌基因12 .其致癌机制可能是发生在氨基端的突变使变异的 -Catenin 大
15、量积累而激活了转录因子.Yi 等13 报道 -Catenin/APC 介导的 Wnt 途径的突变占肝癌发生的 30%.关于癌细胞胞质内 -Catenin 表达增加的原因，目前的看法主要是其降解减缓，而非生成增加.影响 -Catenin 降解的因素有 Wnt 信号的增强，APC 的突变以及 -Catenin 本身的突变等.在 Rubinfeld 等14 对黑色素瘤细胞系的研究中，发现 -Ccatenin 的增加主要与其本身的突变有关，-Catenin 突变后可增加其稳定性，使其不被降解.Wnt 信号的增强可以抑制 APC 对 -Catenin 的降解作用.此外，也有报道发现，3 个大肠癌细胞系中
16、均有 -Catenin 表达的增强，认为大肠癌癌细胞的增殖与转化与-Catenin 靶基因的持续转录关系密切，-Catenin 的靶基因可能就是大肠癌的癌基因 15 . 本研究结果显示，-Catenin 在肿瘤较靠近血窦、毛细胆管处表达较强，同时与肿瘤病理分级负相关，提示可以将 -Catenin 作为分化差、易浸润转移的标志物;-Catenin 表达与 AFP 表达相关，可以协同原发性肝癌的临床诊断;手术标本中 -Catenin 的表达情况可以作为判断患者预后的一个指标. 参考文献: 1Yang LJ，Wang WL.Expression of Bcl-2and Bax proteins in
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