1、补肾活血中药对子宫内膜异位症的影响作者：沈洪沁，洪波，张薇，邹移海，关慧云，魏龙星 【关键词】 补肾调经汤 摘要：【目的】观察补肾调经汤内服加活血散结栓塞肛对子宫内膜异位症(简称内异症)体液免疫及异位子宫内膜的影响。 【方法】SD大鼠 130 只，随机分为 10 组，分别为正常对照组、模型组、丹那唑阳性对照组及不同剂量补肾调经汤灌胃或加用和单独使用活血散结栓塞肛治疗 7 个组。除正常对照组外，其他组均复制大鼠子宫内膜异位症模型，然后分别给药，治疗 4 周后检测血清 IgG、IgM、IgA 抗体和补体C、及谷丙转氨酶(LT)水平，进行胸腺、卵巢、子宫、异位移植物及肝、肾组织的病理学检查。 【结果
2、】大鼠内异症模型手术 4 周后，异位的子宫内膜生长良好，IgG、C水平升高，IgM 下降，子宫、卵巢增大；中药及丹那唑治疗后均可使异位的内膜萎缩，3 倍人用剂量中药灌胃加塞肛或 5 倍量组 IgG 值下降，5 倍量中药塞肛或加灌胃组值下降，5 倍量中药灌胃加塞肛组子宫和卵巢缩小；丹那唑对模型动物的性周期有抑制作用，而中药组均无此作用；各给药组均对大鼠的 ALT 无明显影响。【结论】补肾调经汤内服加活血散结栓塞肛可使内异症模型大鼠的子宫内膜萎缩，改善其体液免疫功能。 关键词：子宫内膜异位症中药疗法；子宫内膜异位症免疫学； 子宫内膜异位症病理学；补肾养血；活血祛瘀；免疫，体液；疾病模型，动物 子宫
3、内膜异位症(简称内异症)是指具有生长功能的子宫内膜组织出现在子宫腔以外的部位所引起的疾病。近年来本病的发病率不断上升，在临床上，用丹那唑治疗出现闭经、肝功能异常等副反应。我们用补肾调经汤内服加活血散结栓塞肛治疗内异症，取得了较好的疗效。为观察这些中药对体液免疫及异位子宫内膜的作用，我们进行了补肾调经汤灌胃加活血散结栓塞肛治疗内异症模型动物的实验研究，现将结果报道如下。 1 材料和方法 11 动物 普通级 SD 雌性成熟大鼠 130 只，体重 250300*!g，合格证号2001A056，由广州中医药大学实验动物中心提供(粤检证字 2002B001)，每日观察阴道细胞共 4 周，证实均有正常的排
4、卵周期。 12 药物、试剂与仪器 灌胃用补肾调经汤组成：熟地黄、菟丝子、桑寄生、淮山药、鸡血藤、川楝子、淮牛膝等，以上中药煎成浓缩液，含生药 5*!kgL；塞肛用活血散结栓组成：丹参、赤芍、三棱、莪术、蒲黄、五灵脂、大黄等，制成塞肛栓，每枚相当于生药 42*!g，均由广州市中医院制剂室提供；丹那唑溶解为混悬液，由江苏联环药业股份有限公司生产，批号：20011020；IgG、IgM、IgA 抗体和补体、试剂盒由上海基因公司提供，批号：20010507；谷丙转氨酶(ALT)检测试剂由中科院中生生物工程公司提供，批号：20010109；OLYMPUS AU400 全自动生化分析仪(日本)。13 检测
5、指标和方法 131 检测血清 IgG、IgM、IgA 抗体和补体、水平 采大鼠血 2*!mL 置玻璃试管内，4000*!r/min 离心 5*!min，取血清，在全自动生化分析仪上，采用透射比浊法检测。 132 检测血清 ALT 水平 取血清，在全自动生化分析仪上，用速率法检测。 133 组织学检查 取动物标本用体积分数为 10%福尔马林液固定后，常规包埋，切片厚4*!m，用苏木素伊红(HE)染色，在光学显微镜下观察。 134 大鼠性周期的观察 每天用 1*!mL 注射器取生理盐水 005*!mL，注入大鼠阴道内，回抽液体滴在玻片上，稍干后在光学显微镜下观察，满视野角化细胞或大量有核上皮细胞并
6、少量角化细胞为动情期。 14 实验方法 141 分组 130 只大鼠除空白对照组 12 只外，其他均复制成子宫内膜异位症模型。将内异症模型大鼠随机分为 9 组，每组 12 只。根据剂量估换公式计算并分为：相当于人的等效剂量(正常量)147*!gkgd塞肛组、正常量中药132*!gkgd灌胃加147*!gkgd塞肛组；人用剂量的 3 倍(3 倍量)中药 396*!gkgd灌胃组、396*!gkgd灌胃加 3 倍量441*!gkgd塞肛组；人用剂量的 5 倍(5 倍量)中药 66*!gkgd灌胃组、5 倍量735*!gkgd塞肛组和66*!gkgd灌胃加735*!gkgd塞肛组，阳性对照用丹那唑4
7、667*!gkgd灌胃组和模型对照组。 142 、造模方法 参考 Do Won Hahn 等的造模方法 ，大鼠用 100*!g/L 的水合氯醛液，按 033*!mLkg腹腔注射麻醉后，常规消毒开腹，暴露子宫，切除右侧子宫 1*!cm，作为移植物，纵向剖开该段宫腔，暴露子宫内膜，将内膜面贴于直肠侧的子宫体上，用吸收线固定，逐层缝合腹壁。术后用抗菌素预防感染，并注意伤口护理，术后 4 周随机取 6只处死，开腹见有少量腹水和部分肠管粘连，取出异位移植的组织，肉眼见形成水泡样，表面见新生的小血管；组织学检查见异位种植物中有子宫内膜上皮细胞层，证实大鼠内异症模型复制成功。 143 治疗方法 于治疗前，每
8、日取阴道细胞涂片后，按治疗组分别灌胃和(或)塞肛，各组治疗时间均为 4 周。治疗结束后，分别称体重、采血，分离血清，查 IgG、IgM、IgA 抗体和补体、ALT；处死后取出异位移植的组织做病理学检查，各组大鼠的胸腺、卵巢、子宫、肝、肾分别称重，并做病理学检查。 144 统计方法 应用 SPSS 软件进行处理，计量数据用 t 检验，计数资料用 Ridit 分析和 检验。 2 结果 21 各组大鼠治疗后体液免疫的改变 表 1 结果显示：大鼠内异症模型手术 4 周后，血清 IgG 上升，IgA和 C改变不明显，IgM 下降，C上升；3 倍量灌胃加塞肛或 5 倍量中药治疗后，IgG 下降，而丹那唑治
9、疗后 IgG 改变不明显，IgA、IgM 经中西药治疗后各组改变均不明显；用 5 倍量中药塞肛或加灌胃治疗后下降，正常量中药治疗后仍然上升，丹那唑治疗后上升明显；模型组 C水平无明显改变，经 5 倍量、3 倍量中药灌胃或丹那唑治疗后均有所下降。表 1 各组大鼠血清 IgG、IgM、IgA 抗体和补体、测定结果（略）22 各组大鼠治疗后胸腺、子宫、卵巢质量和异位移植的子宫内膜生长情况 表 2 结果显示：大鼠在内异症造模术后，与正常对照组比较，胸腺无明显改变，子宫、卵巢显著增大，部分大鼠卵巢出现囊肿。经 3 倍量灌胃加塞肛和 5 倍量中药灌胃或塞肛治疗后，与模型组比较胸腺显著缩小；用丹那唑治疗后胸
10、腺显著增大。模型组经中药 5 倍量灌胃加塞肛治疗后，子宫缩小，接近正常值；用 5 倍量灌胃或加塞肛治疗后，卵巢缩小，接近正常值。表 2 各组大鼠胸腺、子宫、卵巢、异位移植的子宫内膜生长情况（略） 异位移植子宫内膜生长的评价，按异位移植腔内上皮细胞是否存在、上皮细胞是否连续及上皮层厚薄、与在位的子宫内膜是否相似，分为好(上皮细胞层厚、连续、与在位子宫内膜相似)、差(上皮细胞层薄、不连续)和消失(未见上皮细胞或移植物消失)(见图 1)。Ridit 分析：各组中好与消失两种情况有差异；各组中差与消失无差异。经 检验：各治疗组与模型组比较均有显著性差异，其中中药 3 倍量灌胃加塞肛、5倍量灌胃加塞肛与
11、模型组比较差异有非常显著性意义；丹那唑组与中药各组间比较无显著性差异。 23 各组大鼠治疗后性周期的比较 表 3 结果显示，大鼠内异症模型中药治疗后性周期虽有缩短，但均在正常范围内波动；而丹那唑治疗后性周期明显延长。 24 毒副作用 治疗后各组血清谷丙转氨酶均无明显改变。在光学显微镜下，丹那唑组中有 7 例出现肝细胞肿胀，细胞间隙变窄；中药 5 倍量灌胃塞肛组有 2 例出现肝细胞间隙变宽，白细胞增多；中药其他剂量组未见明显改变。各组大鼠治疗后肾组织细胞未见明显改变。 表 3 各组大鼠性周期的比较（略） 3 讨论 子宫内膜异位症的病因中，经血返流致病学说被广泛接受。目前认为，随经血反流的内膜之所
12、以能在腹腔种植，可能与患者的免疫机制存在某些缺陷有关 。 本实验中大鼠内异症模型手术后，血清 IgG 水平上升的情况与 Subbi Mathur 等人所报道的内异症患者血清 IgG 反应明显，IgA 反应不明显的情况相符 ，但内异症模型大鼠 IgM 下降，可能与本实验观察时间较短，不能全面反映其病理变化有关。 有研究表明：用原位杂交的方法检测补体的 RNA 和用免疫组化与 West Blot 的方法检测补体的蛋白质，结果发现在异位组织中补体3 的表达显著升高 。在本实验中，大鼠内异症模型手术后血中补体3 水平升高，亦表明内异症模型有免疫机制的改变。 中医根据子宫内膜异位症的临床症状，可以把它列
13、入“血瘀证”范畴。近年来研究表明，经用活血化瘀方法治疗后，能改善盆腔微循环，抑制异位内膜增生、分泌和出血，促进血肿吸收，软化粘连，修复瘢痕而改善症状 。另有研究认为：生殖内分泌系统失调与免疫功能异常是肾虚的表现，补肾能增强机体免疫力及调节内分泌功能，符合中医肾主生殖的理论，并认为内异症肾虚为本，血瘀为标，属本虚标实之证。用补肾药内服，在临床观察中发现，基本上不干扰患者的月经周期；相反有调整作用，使其月经周期恢复正常5 。长期内服活血化瘀药，有伐胃伤正之虞，中药栓剂塞肛可使有效成分通过肠壁吸收而直达病所，避免口服药物经过肝脏的首过效应，提高盆腔局部的药物浓度，发挥其活血化瘀散结之功，并可避免伐胃
14、之过。栓剂对肠道刺激较少，病人容易接受；动物实验时，能够在大鼠肠道内保留 2*!h 以上，使药物充分吸收而发挥作用。 内服的补肾调经方中熟地黄、菟丝子填肾精、益肾气，为君药；桑寄生、淮山药补肝脾，旨在补后天以养先天，为臣药；鸡血藤、川楝子活血养血，理气行滞，为佐药；淮牛膝补肾活血，引药入经，为使药。经临床观察，本方内服对肾虚型内异症有较好的调经和止痛效果5 。活血散结栓是根据血证论 “瘀血在下焦，则季肋少腹胀满刺痛，大便黑色，失笑散加醋军桃仁治之。 ”用失笑散加大黄活血止痛行滞，加丹参、赤芍活血化瘀，三棱、莪术散结消，诸药共起活血化瘀、散结止痛作用。本实验结果表明：大鼠内异症模型手术后，异位种
15、植的子宫内膜上皮生长良好，周围有新生血管，同时出现腔内积液、肠管粘连的现象；血清 IgG 和补体升高，表明内异症模型有体液免疫机制的改变。以上情况与人的子宫内膜异位症相似，证明该动物模型是成功的；与模型组比较，各给药组治疗后均可使异位移植的内膜萎缩，尤其中药 3 倍和 5 倍量灌胃加塞肛治疗后，异位种植的内膜萎缩显著。在治疗中，丹那唑对模型动物的性周期有抑制作用，而中药治疗后模型动物的性周期虽然短于模型组和正常对照组，但均在正常范围内6 ；中药对模型动物体液免疫有调节作用，可降低因内异症引起的血清 IgG、的上升，5 倍量的中药疗效比 3 倍量的作用显著。在大鼠内异症模型用中、西药治疗后，对肾
16、组织细胞无明显的影响；各给药组的血清谷丙转氨酶均无显著改变；丹那唑可引起模型动物的肝细胞肿胀，5 倍量中药内服加塞肛治疗后个别动物的肝细胞间隙变宽，白细胞增多；大剂量中药组可使胸腺缩小。5 倍量中药对模型动物的子宫和卵巢质量有减轻作用。提示在增大中药剂量以提高疗效的同时，应注意药物的毒副反应。大剂量中药降低水平的原因和补肾活血中药对细胞免疫及性激素水平等的影响有待进一步研究。 参考文献： 1Do Won Hahn,Robert P Carraher,Robin G Foldesy.Development of an animal model for quantitatively evaluat
17、ing effects of drugs on endometriosis Fertility and Sterility,1985,44(3):410. 2石一复子宫内膜异位症，现代医学研修系列 上海：上海科学技术出版社，200218 3Subbi Mathur,David E Garza,Lea F Smith. Endometrial autoantigens eliciting immunoglobulin IgG,IgA,and IgM responses in endometriosis Fertility and Sterility,1991,44(1):56. 4黄崇巧活血化瘀法治疗子宫内膜异位症概述 中医药信息，1993，10(3)：13 5沈洪沁补肾活血法治疗子宫内膜异位症的临床观察 福建中医药，1998；29(2)：5 6施新猷医用实验动物学 西安：陕西科学技术出版社，198937
