1、扶正培本系列方药在胃癌综合治疗中的临床与机理研究作者：孙桂芝 余桂清 张培彤 吴志奎 李杰 卢文屏【摘要】 目的探索扶正培本系列方药在胃癌综合治疗中的临床疗效。 方法针对胃癌患者不同阶段临床特点和治疗的主要环节，在扶正培本治则指导下的系列治法与方药的临床作用的研究，有针对化疗毒付反应的健脾益肾冲剂、预防转移复发的扶正防癌口服液和针对晚期带瘤患者提高生活质量的养胃抗瘤冲剂。 结果扶正培本系列方药对化疗药物具有明显的增效减毒作用，提高机体免疫功能，清除有害自由基，提高 SOD 活性，降低术后复发与转移，提高带瘤患者的生活质量延长生存期等作用。 结论扶正培本系列方药防治复发转移作用的可能分子机制在于
2、：可以促进肿瘤细胞凋亡信号转导基因 Fas 蛋白和 mRNA 表达，降低FasL 蛋白和 mRNA 表达；进而提高起始型 Caspase8 的活性；同时提高凋亡调控基因 Bax 蛋白和 mRNA 表达，降低 Bcl2/Bax 比例，从而减弱Bcl2 蛋白和 mRNA 表达抑制细胞凋亡的作用，降低肿瘤细胞线粒体膜电位m 和降低细胞内 PH 值，使细胞酸化，通过线粒体途径有效地放大了凋亡信号；最终活化 Caspase3 导致细胞凋亡。 【关键词】 胃癌；抗癌机理；扶正培本目前，胃癌的主要治疗方法是手术与化疗，但术后 23 年极易复发与转移，而且一些患者就诊时已经失去手术机会，化疗的毒副作用常常使患
3、者难以接受和由于严重的血象下降和消化道反应使患者中断化疗。为此，我们自 20 世纪 70 年代初，针对胃癌患者不同阶段临床特点和治疗的主要环节，开展了扶正培本治则指导下的系列治法，研制出系列方药：针对化疗毒付反应的健脾益肾冲剂12 、预防转移复发的扶正防癌口服液和针对晚期带瘤患者提高生活质量的养胃抗瘤冲剂。现就扶正培本法系列方药的临床与机理研究结果（方法略）报告如下。1 临床研究 健脾益肾冲剂共观察中晚期胃癌（术后）669 例，治疗组为 414 例（治疗组） 、对照组 255 例；扶正防癌口服液观察 277 例胃肠癌术后患者，治疗组为 207 例，对照组 70 例；养胃抗瘤冲剂共观察 123
4、例，治疗组 77 例，对照组 46 例。均经病理学确诊随机分为治疗组（化疗+中药） ，对照组（单纯化疗） 。治疗结果如下：1.1 近期疗效111 扶正培本系列制剂对化疗药物的减毒增效作用观察 （1）治疗组与对照组完成化疗疗程比较，从表 1 可看出健脾益肾冲剂合并化疗组（治疗组） ，扶正防癌合并化疗组，养胃抗瘤合并化疗组其化疗完成率与对照组比较有显著差异 P0.05。 （2）化疗中全身反应情况比较，见表 2；（3）消化道反应情况，治疗组和对照组均有不同程度的食欲下降，恶性，呕吐，腹泻。对照组反应较治疗组明显且重，与对照组比较差异显著，P0.05，见表 3。 （4）外周血象变化比较，经化疗后，白细
5、胞4000 个/mm2 为正常，4000 个/mm2 为下降，血小板低于 8 万/mm2 为下降。可看出治疗组白细胞、血小板在治疗后两组差异非常显著P0.050.001。提示健脾益肾和扶正防癌养胃抗瘤冲剂具有良好的保护骨髓、减轻化疗对骨髓的抑制的作用，见表 4。表 1 治疗组与对照组完成化疗疗程比较（略）*为完成化疗率比较表 2 化疗中全身反应情况比较（略）表 3 化疗中消化道反应情况比较（略）与治疗组比较，*P0.05表 4 外周血象变化比较（略）与治疗组比较，*P0.05;*P0.0011.1.2 养胃抗瘤冲剂对进展期胃癌带瘤患者生存质量的影响采用EORTC QLQC30 核心量表测评养胃
6、抗瘤冲剂对 46 例进展期胃癌术后患者治疗前后 QOL 的影响。按治疗前后各领域标准化得分计算，进展期胃癌患者经历化疗后，应用养胃抗瘤冲剂治疗 36 个月，不但可以明显提高总体健康和生存质量，而且在生存质量量表的多个领域均有显著改善，突出表现在物理症状、角色功能、情绪功能、社会功能和身体功能方面。以上几个领域通过主成分分析正是此量表中第一主成分，从而更加说明该治法在改善生存质量方面的积极贡献，如图 1。11.3 扶正培本法对免疫功能的影响表 5 晚期胃癌化疗中合并健脾益肾冲剂 E 玫瑰花结形成率比较（略）与对照组比较，*P0.05图 1 养胃抗抗瘤冲剂对进展期胃癌术后患者生存质量的影响（略）表
7、 6 晚期胃癌(术后)化疗中合并健脾益肾冲剂巨噬细胞吞噬功能治疗后比较（略）与化疗前比较，*P0.05表 7 对淋巴细胞转化率的影响（略）与化疗前比较，*P0.05；*P0.001表 8 对自然杀伤细胞（NK 细胞）活性的影响（略）与化疗前比较，*P0.05表 9 养胃抗瘤冲剂合并化疗与对照组治疗前、后 T 细胞亚群变化的比较（略）与对照组比较，*P0.05，*P0.005 从表 5、6、7、8、9 可看出治疗前后两组所进行的 E 玫瑰花结形成、淋巴细胞转化、巨噬细胞吞噬功能 NK 细胞活性检查结果可看出：治疗组各项指标均有不同程度的提高，对照组不仅无明显提高反而有的指标显著下降，下降最明显的
8、是淋巴细胞转化，T 细胞亚群的检查结果显示治疗组 CD8 明显下降，CD4/CD8 比值显著上升。健脾益肾冲剂、养胃抗瘤冲剂合并化疗与对照组比较，两组比较差异显著（P0.050.01） 。11.4 扶正防癌口服对患者血清内 SOD 和自由基水平的影响 见表 1012。表 10 胃肠道癌患者与正常人 SOD 活力比较（略）与正常人比较，*P0.05表 11 治疗组患者治疗后 SOD 活力及与 guZn 正常人比较（略）与正常人比较，*P0.05；与治疗前比较，*P0.005表 12 对照组患者治疗前后 SOD 活力及与正常人比较（略）与正常人比较，*P0.05，*P0.01，*P0.0051.5
9、 正常人与胃肠道癌患者血清抗坏血酸自由基峰高比较 见表13。表 13 正常人与胃肠道癌患者血清抗坏血酸自由基峰高比较（略）与正常人比较，*P0.0011.6 两组胃肠道癌患者治疗前后血清抗坏血酸自由基水平及与正常人的比较 见表 14。表 14 治疗前后血清抗坏血酸自由基水平及与正常人的比较（略）与正常人比较，*P0.01;*P0.005;与治疗前比较;P0.0051.7 超氧化物歧化酶(SOD)活性的变化 见表 15。表 15 超氧化物歧化酶(SOD)活性的变化（略）从表 15 治疗组疗后超氧化物歧化酶活性明显提高，疗前疗后差异非常显着，对照组呈下降表现。组间比较差异显着 P0.01。2 远期
10、疗效2.1 健脾益肾方配合化疗远期疗效观察 重点随访期胃癌（术后）治疗 1 年以上患者，共观察 303 例，存活 300 例，一年生存率为99.01%，治疗三年以上者 238 例，存活 184 例，三年存活率为 77.31%，治疗五年以上者 191 例，存活 102 例，五年生存率 53.40%，治疗十年以上者 76 例，存活 76 例，十年存活率为 47.37%。在随访的 56 例患者的中位生存期为 36 个月，平均生存期为 38.32 个月。2.2 扶正防癌口服液合并化疗远期疗效观察： 随访结果：胃癌五年生存率为 52.5%（21/40） ，其中期胃癌五年生存率为 62.5%，与健脾益肾冲
11、剂比较五年生存率提高了 9.10%，大肠癌五年生存率为72.73%（16/22）其中期五年生存率为 76.92%（10/13） 。2.3 养胃抗瘤冲剂合并化疗远期疗效 随访结果：对两组各 16例患者进行了 1、2、3 年的随访，治疗组分别为 87.5%、37.5%、6.3%，生存期 410 天;对照组分别为 56.3%、6.3%、0%，对照组中位生存期 306天，生存率比较,组间差异非常显着，P0.01。3 机理研究通过临床研究可看出健脾益肾冲剂、扶正防癌口服液、养胃抗瘤冲剂均具有保护骨髓、提高机体免疫功能、抑瘤和抗转移的作用。为此我们对其作用机理进行了如下的探讨。3.1 养胃抗瘤冲剂不同剂量
12、合并化疗对荷瘤骨髓有核细胞GMCSF Mrna 表达的影响。表 16 不同剂量合并化疗对荷瘤骨髓有核细胞 GMCSF Mrna 表达（略）*每一样品均为三只鼠左侧股骨骨髓混合样从表中显示单纯 CTX 组，骨髓中 GMCSF mRNA 表达有代偿增加，其水平高于正常对照组和荷瘤对照组；养胃抗瘤冲剂中大小剂量加 CTX 后骨髓造血刺激因子 GMCSF mRNA 表达水平有明显提高，并有一定的量效关系。结果显示养胃抗瘤冲剂合并化疗能明显提高小鼠造血因子 GMCSF mRNA 表达水平，这一结果与养胃抗瘤冲剂能显着提高骨髓有核细胞数的结果是一致的。3.2 养胃抗瘤冲剂对前胃（FC）615 小鼠骨髓癌细
13、胞原癌基因myc mRNA 表达水平的影响 见表 17。表 17 对前胃（FC）615 小鼠骨髓癌细胞原癌基因 myc mRNA 表达影响（略）3.3 养胃抗瘤冲剂（中药组）对 PC 小鼠骨髓、癌组织B12/mRNA 表达水平的影响 见表 18。表 18 对 PC 小鼠骨髓癌组织 B12/mRNA 表达水平的影响（略）（1）每 3 只小鼠右侧骨髓混合样，共 9 只小鼠；（2）癌组织为3 只小鼠单个样品的均值3.4 养胃抗瘤冲剂对 S180 实体瘤细胞增殖周期的影响 见表19。从表 19 可看出：正常对照组骨髓细胞中 Bc12 基因与 actin基因转录水平相比百分比为 47.7%，荷瘤小鼠组为
14、 15.9%明显下降，而CTX 组则急剧下降至 3.5%。表 19 养胃抗瘤冲剂合并化疗对 S180 细胞增殖周期的影响（略）表中显示：G0G1 期细胞数所占有百分数依次为：荷瘤对照组（38.73%）养胃抗瘤冲剂组（45.82%）养胃抗瘤冲剂+CTX（52.01%） 。而 S 期细胞数所占百分数依次为：荷瘤对照组（53.16%）养胃抗瘤冲剂（42.57%）CTX 组（36.59%）养胃抗瘤冲剂+CTX（31.04%） 。荷瘤对照组细胞 DNA 增殖速度快，主要表现在S 期细胞明显增高，化疗药物可明显减少 S 期细胞百分率。养胃抗瘤冲剂+CTX 可明显减少 S 期细胞百分数，使 G 期细胞增多，
15、阻滞了 G1 期向 S 期过渡（即阻滞了 DNA 合成前期向 S 期过渡） ，因而使 S 期细胞明显减少，所以这一结果提示：养胃抗瘤冲剂合并化疗对癌细胞增殖周期的影响，主要表现为使细胞阻滞在 G1 期，减少 S 期细胞数，使瘤体缩小，且优于单纯 CTX 组。3.5 养胃抗瘤冲剂诱导 MGC803 、BGC823 细胞凋亡细胞学观察 养胃抗瘤冲剂的含药血清具有诱导人胃癌细胞系 MGC803 细胞凋亡的作用。荧光显微镜、激光共聚焦显微镜观察早期染色质聚集于核周边部而呈新月形，晚期细胞核浓缩，并碎裂成大小不等的片段，形成由质膜包绕的含有多少不等核碎片的凋亡小体。细胞核染色质可形成明亮的凝聚块，流式细
16、胞仪检测养胃抗瘤冲剂作用 12 小时 G0G1 期前面出现了明显的亚二倍体峰，随时间延长，诱导细胞凋亡作用更为明显，细胞周期主要表现为细胞阻滞在 S 期。（A：DNA 绿色荧光，B：RNA 红色荧光，C：DNA、RNA 荧光叠加图象）图 2 激光共聚焦显微镜下养胃抗瘤冲剂组诱导人胃癌细胞MGC803 细胞凋亡时形态学变化（略）图 3 Annexin V/PI 染色，流式细胞仪测定养胃抗瘤冲剂诱导人胃癌细胞 MGC803 细胞凋亡（略）3.6 养胃抗瘤冲剂对 MGC803 细胞凋亡时细胞内 pH、Ca2+、线粒体膜电位（m）影响养胃抗瘤冲剂含药血清组与空白血清组比较可以逐渐降低线粒体膜电位，2
17、小时为 241.99251.35，24 小时下降为 103.13159.98。养胃抗瘤冲剂组随着培养时间的延长，标记细胞内 Ca2+浓度的 Fluo3 的荧光强度逐渐增强，从 21.50 增加到 44.43。与空白血清组、对照组比较，养胃抗瘤冲剂组随着给药时间的延长，细胞内 pH 逐渐下降，即细胞酸化。3.7 养胃抗瘤冲剂含药血清对 MGC803 细胞凋亡时凋亡信号转导基因 Fas/FasL、凋亡调控相关基因 Bax、Bcl2 蛋白及基因表达的影响 养胃抗瘤冲剂含药血清可以提高人胃癌细胞 MGC803 凋亡信号转导基因 Fas 蛋白表达，同时养胃抗瘤冲剂还可以降低 FasL 蛋白、FasL m
18、RNA 的表达。养胃抗瘤冲剂含药血清可以提高人胃癌细胞 MGC803 Bax 蛋白表达，对 Bcl2 蛋白表达影响不显著。RTPCR 研究养胃抗瘤冲剂具有促进人胃癌细胞 MGC803 Bax mRNA 表达作用，对 Bcl2 mRNA 表达无明显影响。3.8 养胃抗瘤冲剂对人胃癌细胞系侵袭转移相关的粘附蛋白表达影响 养胃抗瘤冲剂含药血清可以降低部分具有促进肿瘤转移的黏附蛋白如 TSP 的表达，对抑制肿瘤转移的黏附蛋白如 CD9 表达则有促进作用。化疗药可以降低部分促进转移的黏附蛋白如 CD44 的表达的同时，也可促进部分蛋白如 TSP 表达，同时又可降低抑制肿瘤转移的黏附蛋白如 CD9表达。3
19、.9 养胃抗瘤冲剂对小鼠前胃癌(MFC)术后复发转移 T 淋巴细胞增殖和凋亡相关蛋白的影响 研究结果显示：中药复方养胃抗瘤冲剂可以提高 T 淋巴细胞的增殖能力，降低 T 细胞的凋亡能力，表现在可以降低 T 细胞的 Fas 表达，提高 FasL 表达，见表 21。表 20 各组 615 小鼠前胃癌术后 15 天脾 T 淋巴细胞增殖能力（略）与正常组比较，P0.01；与模型组比较，P0.01表 21 615 小鼠前胃癌术后 15 天外周血中 T 淋巴细胞 Fas、FasL表达（略）与正常组比较，P0.01；与模型组比较，P 值0.053.10 养胃抗瘤冲剂对小鼠前胃癌(MFC)术后复发转移Fas/FasL、Bcl2/Bax 蛋白表达的影响应用免疫组化法检测。见图的研究结果提示，养胃抗瘤冲剂能增强凋亡信号转导基因 Fas 蛋白表达，增强促细胞凋亡调控基因 Bax 蛋白表达，增强 Bax/Bcl2 比值，降低 FasL蛋白表达从而起到诱导肿瘤细胞凋亡作用。图 4 615 小鼠前胃癌术后 15 天肺转移灶和复发灶Fas/FasL、Bax/Bcl2 蛋白表达（略）3.11 实时荧光定量 PCR 检测肺转移灶 Fas/FasL，Bcl2/Bax
