1、复方中药 CCMAT13 抗胃癌的作用机制作者：李永琦，许才绂，黄裕新，赵国宁，王庆莉 【关键词】 胃癌 关键词: 胃癌;医学，中国传统;投药，局部 中图号:R735.2 文献标识码:A 摘 要:目的 研究复方中药 CCM-AT13 对裸鼠胃癌荷瘤模型的治疗作用及机制. 方法 通过建立裸鼠移植瘤模型与瘤体内局部注射药物，采用大体、组织学、亚细胞学与细胞增殖动力学指标观察 CCM-AT13，5-FU与华蟾素对移植瘤的治疗效果，研究 CCM-AT13 作用机制. 结果 CCM-AT13 具有较强的肿瘤细胞杀伤作用和抑制作用，抑瘤率为 91.2%，抑瘤效果明显强于 5-FU 与华蟾素;CCM-AT1
2、3 不仅可引起肿瘤组织坏死，抑制细胞增殖，还可增强局部免疫力，促进纤维组织增生. 结论 CCM-AT13具有较强的抗肿瘤效果，有较大的临床应用价值，为临床治疗胃癌提供了新的思路与方法. Abstract:AIM To investigate the effects and mechanism of a compound chinese traditional medicine（CCM-AT13）on xenografted human gastric cancer.METHODS Nude mice tumor xenograft model，intratumor injection of d
3、rugs，histo-logical study，ultrastructural morphological observation，flow cytometric analysis were employed.RESULTS CCM-AT13exerted potent cytocidal and cytostatic effects on gas-tric cancer cell.The tumor growth inhibiting rate in vivo was91.21%，which was markedly higher than that of5-FU and Huachans
4、u injection.CCM-AT13also enhenced the immune function of nude mice，promoted fibrous tissue hyperplasia，inhibited cell multipolar division.CONCLUSION Since CCM-AT13is a potent antitumor drug，the study of its ef-fects and mechanisms may supply a new theoretical basis for the clinical treatment of gast
5、ric cancer. 0 引言 胃癌目前仍是严重威胁人民生命健康的恶性肿瘤之一，手术切除率低1，2 ，大量的临床随机资料结果显示术后放化疗等辅助治疗并不能延长患者的生存期2-4 ，寻找更有效的治疗胃癌药物和手段，改进胃癌治疗现状是目前抗肿瘤研究的重要课题之一.复方中药 CCM-AT13在体外实验中已证实对人胃癌 SGC-7901 细胞具有较强的杀伤作用，而对正常血管内皮细胞与平滑肌细胞的杀伤作用较弱5 .我们通过建立人胃癌 SGC-7901 细胞裸鼠移植瘤模型6，7 以及瘤体内注射 CCM-AT13方式，分别从大体、细胞学、亚细胞学和细胞动力学水平进一步研究CCM-AT13 的抗肿瘤作用与机
6、制. 1 材料和方法 1.1 材料 人胃癌 SGC-7901 细胞系（本校西京医院消化病研究所提供，本室传代保存）;复方中药 CCM-AT13 注射液（本科研究组方并制备的注射剂，由皂角刺、乌梅、白芨与大黄四味中药组成，质量比例为 2211，每毫升含原生药 0.5g，色淡黄，透明，pH6.5）;华蟾素注射液（Huachansu，中国淮北生化制药厂）;5-FU 针剂（天津河北制药总厂）;RPMI1640 细胞培养液（美国 Gibco 公司）;裸鼠（BALB/c nu/nu，68周龄，体质量（182）g，雌雄兼有，共 24 只，由本校实验动物中心提供，在无菌隔离器中专人饲养）. 1.2 方法 人胃
7、癌 SGC-7901 细胞在 37，5mLL-1 CO2 孵箱内培养，于含 100mLL-1 小牛血清的 RPMI1640 细胞培养液中贴壁生长，以 EDTA-胰酶混合液消化传代.将呈对数生长的人胃癌 SGC-7901 细胞接种于裸鼠右大腿皮下，每只接种 1.6106 个细胞，10d 后肿瘤直径5mm，形成皮下移植瘤模型.将已接种好的裸鼠随机分成 4 组，每组 6只，按不同的给药方案（Tab1）用微量注射器在肿瘤组织中心局部注射给药，隔日 1 次，3 次，末次治疗后 3d 处死裸鼠，取肿瘤组织分 3 块分别放入甲醛液、戊二醛液与冰盐水中，取肝、肾与心脏组织进行光镜学检查.每次治疗前及在处死前皆
8、用精密卡尺测量瘤体的最大直径与横径7 .观察指标:肿瘤体积（V）按以下公式推算8 ，V=1/2（直径横径 2 ）;肿瘤生长抑制率8 （GIR）=（对照组肿瘤体积-治疗组肿瘤体积）对照组肿瘤体积100%;组织学疗效判定标准9 :将甲醛处理的肿瘤组织、肝、肾、心脏组织石蜡包埋，HE 染色，然后在光镜下观察细胞和组织结构的变化.抗肿瘤药物的组织学疗效判定标准采用原中腾腾征制定的 4 级标准（:肿瘤全部坏死;:坏死面积超过总面积的 1/2;+:坏死面积未超过总面积的 1/2;-:坏死不明显）;肿瘤细胞超微结构观察:将用戊二醛固定的肿瘤组织，常规包埋，制成超薄切片，在透射电镜下观察细胞超微结构变化;流式
9、细胞仪检查10，11 :将冰盐水保存的肿瘤组织，在 2h 内轻轻洗去标本上的血块与粘液，然后用剪刀剪碎置于白色尼龙网（160 目/寸）上用金属小刮刀轻轻按压，同时用 Rnase 与胃蛋白酶消化制成单细胞悬液，乙醇固定，调整细胞数为1.0109 L-1 ，加入碘化丙啶染色，用 Epics Elite 流式细胞仪检测肿瘤细胞增殖周期;细胞增殖抑制率12 （PCI）:PCI=（对照组 S+G2 M-用药组 S+G2 M）对照组 S+G2 M100%.表 1 CCM-AT13 抑制 BALB/c 鼠移植瘤的效果（略） 统计学处理:采用 SPLM 统计软件（本校预防医学系统计学教研室提供）进行统计分析.
10、 2 结果 2.1 肿瘤生长抑制率 CCM-AT13，5-FU 与华蟾素皆可不同程度地抑制裸鼠移植瘤的生长，GIR 分别为 91.2%，49.7%与 44.6%，CCM-AT13 抑瘤效果明显优于 5-FU 与华蟾素（P0.01，Tab1）.用每次测得的肿瘤体积与时间作图可见CCM-AT13 组瘤体呈动态缩小趋势（Fig1）. 2.2 组织病理学结果 各组药物局部注射后组织学效果比较显示 CCM-AT13 组坏死反应较其他两组明显（Tab2）.CCM-AT13 组还可见中性白细胞与 单核巨噬细胞侵润（Fig2） ，纤维组织增生明显;5-FU 与华蟾素组细胞坏死反应较轻，中性白细胞与单核巨噬细胞
11、侵润与纤维组织增生皆不明显;各组裸鼠肝、肾、心组织未见异常. 表 2 药物处理 BALB/c 移植瘤后肿瘤组织的坏死反应（略） 2.3 肿瘤细胞超微结构 CCM-AT13 组可见肿瘤细胞线粒体与内质网明显肿胀，大量肿瘤细胞核碎裂死亡，侵润在变性坏死的肿瘤细胞周围的中性白细胞与巨噬细胞，未见明显变性改变;5-FU 与华蟾素组肿瘤细胞线粒体与内质网呈不同程度的肿胀，较 CCM-AT13 组轻，细胞核固缩破裂坏死现象较少见，未见到中性白细胞与单核巨噬细胞. 2.4 流式细胞仪检测结果 CCM-AT13，5-FU 与华蟾素皆可不同程度抑制肿瘤细胞的 S+G2 M 期，抑制率分别为（42.46.4）%，
12、 （27.42.6）%与（17.04.7）%.CCM-AT13 组明显高于 5-FU 与华蟾素组（P0.05，Tab3）.表 3 药物对肿瘤细胞周期的影响（略） 3 讨论 肿瘤治疗是一个世界性难题，寻找更有效的抗肿瘤药物是目前肿瘤治疗的重要课题之一.中药抗肿瘤作用已经得到证实13 ，从中草药及植物中提取并用于肿瘤治疗的成分越来越多14-16 ，植物提取成分已成为新抗肿瘤药物的重要来源，南美抗肿瘤药物研发办公室就从植物中提取抗肿瘤成分制定了有关标准，将体外实验 IC50 50mgL-1 的植物提取成分确定为有效抗肿瘤成分17 .复方中药 CCM-AT13 是由皂角刺、乌梅、白芨与大黄四味中药按
13、2211比例组成，经过中药注射液提取工艺流程制备而成的注射剂.根据中医理论，皂角刺辛散温，性锐利能直达病所，具有消肿托毒排脓之功效;乌梅酸涩性平，可 开胃消食，去青黑痣，蚀恶肉;白芨能消肿生肌，收敛止血;大黄攻积导滞，逐瘀通经，四味中药合用可达到中医祛腐生新治疗肿瘤的功效.CCM-AT13 体外实验结果 IC50 为 2mgL-1 ，显示较强的肿瘤杀伤作用，而且对正常细胞杀伤作用较弱5 .我们通过裸鼠移植瘤模型与瘤体内局部注射治疗实验，进一步研究证实 CCM-AT13 具有较强的肿瘤细胞杀伤作用和肿瘤生长抑制作用，抑瘤率为 91.2%，抑瘤作用优于 5-FU 与华蟾素. CCM-AT13 可引
14、起大量肿瘤组织细胞变性坏死，坏死反应比 5-FU 与华蟾素明显，由于 CCM-AT13 对于局部侵润的中性白细胞与单核巨噬细胞损伤作用不明显，加之体外实验也证实对正常内皮细胞与平滑肌细胞损伤作用较小5 ，因此 CCM-AT13 引起的肿瘤组织坏死反应不是 CCM-AT13的直接毒性作用，CCM-AT13 有其独特的抗肿瘤机制.流式细胞仪检测结果显示 CCM-AT13 对肿瘤细胞增殖有一定抑制作用，S+G2 M 期抑制率为42.4%，具有将肿瘤细胞阻断在 G0 /G1 期作用.CCM-AT13 可促进中性白细胞与单核巨噬细胞的局部侵润与局部纤维组织增生，增强局部免疫力，对局部侵润的中性白细胞与单
15、核巨噬细胞损伤作用不明显，这与在体外实验显示对正常细胞损伤作用较弱的结果一致，显示毒副作用较小.在实验期间 CCM-AT13 组 6 只裸鼠未见有活动能力下降及其他异常.5-FU 是一种抗代谢药物，进入体内后被活化为 FdUMP，抑制 TS，使不能合成dTMP，DNA 合成受抑制从而抑制细胞增殖18 ，5-FU 无增强局部免疫力作用，且毒副作用较大.本实验 5-FU 与华蟾素组未见到中性白细胞与单核巨噬细胞侵润与明显的纤维组织增生现象.5-FU 组裸鼠在治疗期间有2 只裸鼠死亡，3 只裸鼠活动能力明显下降，皮肤变黑，实验结束前已处于濒死状态;华蟾素组亦未观察到明显毒副作用. 结果表明复方中药
16、CCM-AT13 抗肿瘤作用不同于 5-FU 与华蟾素，是一种较强的局部抗肿瘤药物，有较大的临床应用价值，本实验为临床开展中药局部注射治疗胃癌提供了理论依据. 参考文献: 1Roukos DH.Current status and future prespectives in gastric cancer management J.Cancer Treat Rev，2000;26（4）:243-245. 2Yao JC，Shimada K，Ajani JA.Adjuvant therapy for gastric car-cinoma:Closing out the century J.Onc
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