1、非小细胞肺癌转化生长因子 的表达及其与血管生成的关系作者：卫小红，杜凤兰，王鸿雁 【关键词】 非小细胞肺癌 【Abstract】 AIM: To investigate the correlation between the expression of transforming growth factor beta (TGF) and the angiogenesis in nonsmall cell lung cancer (NSCLC). METHODS: MVC and expression of TGF1 in 50 carcinomatous specimens and expres
2、sion of TGF1 in 35 paracarcinomatous specimens from the same 50 cases with NSCLC were detected by SP immunohistochemistry. RESULTS: Active angiogenesis in NSCLC was detected and it was related with NSCLC progression and lymph node metastasis, but not related with histological types. Significant diff
3、erence of the expression of TGF1 was found between stage and (P0.05), and between stage and (P0.05), and the positive expression of TGF1 was significantly higher in the patients with lymph node metastasis than those without lymph node metastasis (P0.01). No significant association was found between
4、the TGF1 expression and the characteristics of the histological types in NSCLC. Positive TGF1 expression in carcinomatous specimen was stronger than that in paracarcinomatous specimen. TGF1 expression was correlated with tumor angiogenesis. CONCLUSION: TGF highly promotes the progression and lymph n
5、ode metastasis of NSCLC, mainly by stimulating angiogenesis. 【Keywords】 NSCLC; TGF; angiogenesis; immunohistochemistry 【摘要】 目的：研究血管生成与转化生长因子 （TGF）在非小细胞肺癌（NSCLC）的表达及其相互关系. 方法：通过应用 SP免疫组化方法检测 50例 NSCLC组织内微血管计数（MVC）及 50例 NSCLC组织和 35例癌旁组织中 TGF1 的表达. 结果：NSCLC 癌组织中存在活跃的血管生成，血管生成与病变分期进展和淋巴结转移有关，与组织分型无关. TG
6、F1 阳性表达在 NSCLC的 I期与 II期及 I期与 III期之间有显著意义（P0.05） ，与淋巴结转移有关，与 NSCLC组织分型无关；NSCLC 中TGF1 表达与癌旁组织中比较有显著意义（P0.05） ；TGF1 阳性表达与肿瘤血管生成有关. 结论：TGF 主要通过促肿瘤血管生成而促进了NSCLC的病期进展和淋巴结转移. 【关键词】 非小细胞肺癌；转化生长因子 ；血管生成；免疫组织化学 0 引言 肿瘤的血管生成（angiogenesis）与肿瘤的发生、发展和转移的全过程密切相关. 肺癌细胞通过合成、分泌血管生成因子调节肿瘤组织的血管生成从而影响肺癌的发生、发展和转移，其中的转化生长
7、因子(transforming growth factor, TGF)在原发性肺癌的表达、生物学作用及其与血管生成的关系为人们所关注. 为进一步了解其在非小细胞肺癌（nonsmall cell lung cancer, NSCLC）的进展和转移中的表达及与血管生成的关系，我们采用免疫组化的方法对 TGF1 在非小细胞肺癌及癌旁组织中的表达及其与肿瘤血管生成的关系进行了观察. 1 材料和方法 1.1 材料 199801/200012 经手术切除的 NSCLC标本 50(男 35，女 15)例, 年龄3385（平均 58士 9）岁. 其中 35例含癌旁组织. 鳞癌 29例，腺癌21例（包括肺泡细胞
8、癌 3例）. TNM I期 18例，II 期 20例，III 期 12例. 有肺门、纵隔淋巴结转移 32例，无淋巴结转移 18例. 兔抗人多克隆 TGF1 抗体，浓度 160（武汉博士德生物技术公司） ；鼠抗人 VIII因子相关抗原抗体，浓度 1100（北京中山生物技术有限公司） ；链霉菌抗生物素蛋白过氧化酶免疫组化染色超敏试剂盒（福州迈新生物技术开发公司）等. 1.2 方法 石蜡标本切成 5 m 厚度切片，脱水、透明、中性树胶封片. 严格按照产品说明书进行 SP免疫组化染色. 取已知含有待检抗原的切片作为阳性对照，用 PBS缓冲液代替第一抗体同上方法染色作为阴性对照. TGF1 表达以每张切
9、片不少于 3个视野中的细胞内棕黄色颗粒状染色，且着色明显高于背景或背景不着色而细胞着色者为阳性表达. 按染色强度（未着色、弱、中、强）及染色阳性细胞的百分数（0%，1%25%，26%50%，50%） ，分别积分为 0，1，2，3，两项分数之和为 02 分者计为染色（-） ，36 分者计为染色（）. 以癌旁间质细胞中出现同上染色颗粒为癌旁组织阳性表达. 微血管计数（microvessel count, MVC）按照 Fontanini（J Pathol, 1995;177:57）的方法，用抗 FVIIIRA mAB标记血管内皮细胞，可见呈棕色或棕黄色染色的血管内皮细胞，先在低倍镜（415）下观察
10、确定微血管数量最多的部位，再在高倍镜（1015）下，以与周围细胞和结缔组织成分明显区别的任何一个棕色染色的内皮细胞、或细胞丛为一个血管，只要结构不相连，其分支结构也计作一个血管计数. 肿瘤内硬化区及与肿瘤交界处软组织内的微血管，有厚的平滑肌及管腔直径大于 8个红细胞的血管除外. 在高倍镜下分别计数 3个视野内取其平均值即为该例的平均 MVC. 统计学处理: 数据以 xs表示，采用 SPSS 11.0软件进行统计分析，多组间均数比较采用方差分析，两两组间比较采用最小显著差法；两组间均数比较采用 t检验，方差不齐时采用非参数检验；计数资料采用 2 检验；等级资料采用等级资料秩和检验. 2 结果 2
11、.1NSCLC 组织中的微血管生成 NSCLC患者 50例的平均 MVC为（16.04.7）/HP，鳞癌、腺癌的平均 MVC值分别为(15.54.2)，(17.15.7)/HP，二者无统计学差异（P0.05） ；癌组织与癌旁组织比较有显著统计学意义（P0.05） ，提示 NSCLC癌组织中存在活跃的血管生成（Fig 1） ，但血管生成与组织分型无关. II期与 III期患者的平均 MVC（18.43.5)/HP，(21.52.5）/HP差别有显著性（P0.05） ，但 II期和 III期患者的 MVC高于 I期患者（10.94.1） ，其差别有显著性（P0.01） ，提示临床分期越晚，平均 M
12、VC越大，血管增生越活跃. 32例有淋巴结转移患者的平均 MVC（19.75.0）/HP高于 18例无淋巴结转移患者（11.45.3） ，其差别具有显著性统计学意义（P0.05） ，可见 NSCLC中的血管生成与淋巴结转移有关(Tab 1). 2.2TGF1 在 NSCLC组织中的分布在 50例 NSCLC中 30例可检测到TGF1 表达（Fig 2） ，阳性表达产物主要分布于癌细胞的胞质内（Fig 2A，B） ；癌旁组织中检测到的 TGF1 蛋白表达主要分布于间质细胞胞质内和极少数吞噬细胞胞质内（Fig 2C，D）. 癌组织 TGF1 阳性率高于癌旁组织（P0.05） ，但不同组织分型之间无
13、统计学差异. 在 III期NSCLC患者中 TGF1 的阳性表达高于期患者，有显著性差异（P0.05） ；有淋巴结转移者 TGF1 表达率高于无淋巴结转移者（Fig 2）. TGF1 表达阳性 30例患者的平均 MVC为(15.75.6)/HP，20 例 TGF1 表达阴性患者的平均 MVC为(12.13.0)/HP，二者间有统计学差异（P0.05）.表 1MVC与 NSCLC组织分型、分期和淋巴结转移的关系 3 讨论 肿瘤的发生、发展和转移伴随着新生血管的形成1. 肿瘤组织内MVC反映了新生血管生成的强度. 本结果表明 NSCLC中存在活跃的血管生成，与癌旁组织比较有统计学差异（P0.05）
14、 ，但鳞癌和腺癌之间 MVC无统计学差异，II 期和 III期患者 MVC均明显高于期患者（P0.05） ，提示随病期的进展，血管生成增加. 有淋巴结转移的患者的 MVC高于无淋巴结转移者，则提示新血管的生成. 因此 MVC是关系NSCLC进展、影响预后的重要指标，也是预测 NSCLC转移及预后的一项独立指标. TGF 是一种多功能的细胞因子，可由人 NSCLC分泌，以TGF1 含量最高且具有代表性，与分布在细胞上的 TGF 受体结合发挥其促进细胞转化和分化、抑制免疫以及刺激细胞外基质增殖的生物学作用2, 3. TGF 参与了肺癌病期的进展，其表达随着病变的进展而增加，可以作为反映 NSCLC
15、患者病期进展的指标. 本结果还显示，在有淋巴结转移的病例中 TGF1 表达明显高于无淋巴结转移的病例（P0.01） ，提示增加的 TGF 可能提高了非小细胞肺癌淋巴结转移的风险. NSCLC 细胞由于其异常的生物代谢，可通过合成、分泌血管生成因子和血管生成抑制因子调节肿瘤组织的血管生成4. 体外实验表明TGF 通过对 VEGF的旁分泌调节作用促进内皮细胞的长入和毛细血管腔的形成，因此促进血管内皮细胞的生长而发挥了促肿瘤血管生成作用5. 【参考文献】 1 Cox G, Jones JL, Walker RA, et al. Angiogenesis and nonsmall cell lung
16、cancer J. Lung Cancer, 2000; 27(2): 81-100. 2 Kang Y, Prentice MA, Mariano JM, et al. Transforming growth factorbeta 1 and its receptors in human lung cancer and mouse lung carcinogenesis J. Exp Lung Res, 2000; 26(8): 685-707. 3 Wieser R. The transforming growth factorbeta signaling pathway in tumor
17、igenesis J. Curr Opin Oncol, 2001; 13(1): 70-77. 4 Kumar R, Kuniyasu H, Bucana CD, et al. Spatial and temporal expression of angiogenesis molecules during tumor growth and progression J. Oncol Res, 2000; 10(6): 301-311. 5 Hasegawa Y, Takanashi S, Kanehira Y, et al. Transforming growth factorbeta 1 levels correlates with angiogenesis, tumor progression, and prognosis in patients with nonsmall cell lung carcinoma J. Cancer, 2001; 91(5): 964-971.
