1、复方中药 CCMAT13 抗胃癌 SGC7901 细胞作用机制作者：李永琦，许才绂，黄裕新，赵国宁，王庆莉 【关键词】 胃肿瘤 关键词: 胃肿瘤;中药;MTT 摘 要:目的 研究科室自组复方中药 CCM-AT13对胃癌细胞及正常细胞的作用. 方法 与华蟾素、5-FU 对比，通过 MTT法研究 CCM-AT13对胃癌细胞的杀伤作用. 结果 10mgL-1 CCM-AT13，5-FU 与华蟾素的杀伤率分别为（87.23.3）%， （34.53.0）%与（29.71.7）%，CCM-AT13 具有较强的杀伤肿瘤细胞作用，杀伤率明显高于 5-FU与华蟾素，而对人血管内皮细胞与大鼠血管平滑肌细胞杀伤作用
2、较弱. 结论 CCM-AT13抗肿瘤作用明显，具有极大的临床应用价值. Keywords:stomach neoplasm;medicine，Chinese tradition-al;MTT Abstract:AIM To investigate the effects of a compound Chinese traditional medicine（CCM-AT13） on gastric cancer cell and normal cells.METHODS MTT assay and cytocidal rate were employed.RESULTS Cytocidal ra
3、tes of of CCM-AT13，5-FU and Huachansu at10mgL-1 concentration were（87.23.3）%， （34.53.0）%and（29.71.7）%re-spectively.Cytocidal rate of CCM-AT13was markedly high-er than that of5-FU and Huachansu injection.CONCLUSION CCM-AT13has potent antitumor effects and great clinical value. 0 引言 中药治疗肿瘤在我国已有悠久历史，近年
4、来，世界各国对中草药抗肿瘤的机制进行了广泛的研究1，2 .胃癌是我国常见恶性肿瘤之一，目前对于半数无法手术切除的中晚期胃癌及术后患者联应用联合化疗方案治疗效果并不理想3，4 ，寻找更有效的治疗胃癌手段，改进胃癌治疗现状是目前抗肿瘤研究的重要课题之一.我科根据胃癌解剖学特点结合中医外科学知识自组复方中药并制备成注射剂 CCM-AT13，成分为皂角刺、乌梅、白芨与大黄.我们研究目的是用 MTT实验5-7 将结果与华蟾素、5-FU 作对比，以了解 CCM-AT13对 SGC-7901细胞、人血管内皮细胞与大鼠平滑肌细胞的作用. 1 材料和方法 1.1 材料 人胃癌 SGC-7901细胞系（本校西京医
5、院消化病研究所提供，本室传代保存）;人血管内皮细胞、大鼠血管平滑肌细胞（本校唐都医院高血压研究室培养提供）;复方中药 CCM-AT13注射液（本科研究组方并制备的注射剂，由皂角刺、乌梅、白芨与大黄四味组成，质量比例为2211，每毫升含原生药 0.5g，色淡黄，透明，pH6.5）;华蟾素注射液（Huachansu，中国淮北生化制药厂）;5-FU 针剂（天津河北制药总厂）;MTT 试剂（美国 Sigma公司）;RPMI1640 细胞培养液（美国 Gibco公司）. 1.2 方法 人胃癌 SGC-7901细胞在 37，50mLL-1 CO2 孵箱内培养，于含 100gL-1 小牛血清的 RPMI16
6、40细胞培养液中贴壁生长，以EDTA-胰酶混合液消化传代.将呈对数生长的细胞分别以 1108 L-1 （人胃癌 SGC-7901细胞、人血管内皮细胞）与 5108 L-1 （大鼠血管平滑肌细胞）接种于 96孔板上，每孔 100L，然后按一定的浓度梯度分别加入复方中药、华蟾素与 5-FU，每一浓度加4孔，每孔 100L，对照组加同量的培养液，调零组只加培养液200L，孵育 48h后，每孔加入 50L MTT（2gL-1 ） ，继续孵育 4h，然后倾去所有液体，每孔再加入 DMSO150L，以酶联免疫仪490nm波长测定各孔 A（OD）值，计算不同药物不同浓度下培养细胞的存活率SR=（用药组 A（
7、OD）值/对照组 A（OD）值）100% 8 及药物对细胞的杀伤率（CR=1-SR）. 统计学处理:采用 SPLM统计软件（本校预防医学系统计学教研室提供）进行统计处理. 2 结果 2.1 存活率与药物浓度曲线 以细胞的存活率和药物浓度绘制曲线可见 SGC-7901细胞的存活率随3种药物的浓度增加而下降，CCM-AT13 在 2mgL-1 浓度水平即可达到50%的杀伤率，5-FU 与华蟾素的 IC50 值均10mgL-1 （Fig1）. 2.2 复方中药 CCMAT13 对人胃癌 SGC7901 细胞的杀伤作用 在每同一浓度水平，CCM-AT13 对人胃癌 SGC-7901细胞的杀伤作用都明显
8、高于华蟾素与 5-FU（P0.05，Fig2） ，华蟾素与 5-FU作用相差不显著（P0.05）.在 10mgL-1 浓度水平，CCM-AT13，5-FU 与华蟾素的杀伤率分别为（87.23.3）%， （34.53.0）%和（29.71.7）%. 2.3 复方中药 CCMAT13 对人血管上皮细胞、大鼠血管平滑肌细胞的作用 复方中药在 10mgL-1 ，50mgL-1 浓度水平对培养的人血管内皮细胞、大鼠血管平滑肌细胞的杀伤作用明显低于对人胃癌SGC-7901细胞的杀伤作用（P0.01） ，CCM-AT13 在 10mgL-1 浓度水平对人胃癌 SGC-7901细胞、大鼠血管平滑肌细胞与人血管
9、内皮细胞的杀伤率分别为（87.23.3）%， （19.21.7）%与（15.3 2.1）%（Fig3）. 在 50mgL-1 浓度水平，CCM-AT13 与华蟾素对人胃癌 SGC-7901细胞的杀伤率分别为 100%和（56.93.1）%（P0.01）. 3 讨论 体外肿瘤细胞培养和 MTT实验是目前肿瘤药物筛选一种有效、快捷的方法.通过该种方法不仅可以发现有效的抗肿瘤药物，而且还可以从细胞水平和分子水平对抗肿瘤机制进行研究 9-12 ;在临床上可以指导肿瘤临床用药和调整用药组合，减少肿瘤多药耐药性的发生13-15 .中药抗肿瘤作用已经得到证实，从中草药及植物中提取并用于肿瘤治疗的单体越来越多
10、，同时中药的复方作用也已开始得到承认和重视16 .南美抗肿瘤药物研发办公室制定的植物提取物抗肿瘤的有效性标准为 IC 50 50mgL-117 . CCM-AT13 是由皂角刺、乌梅、白芨与大黄四味中药按 2211质量比例组成，经过中药注射液提取工艺流程制备而成的注射剂.根据中医理论，皂角刺辛散温，性锐利能直达病所，具有消肿托毒排脓之功效;乌梅酸涩性平，可开胃消食，去青黑痣，蚀恶肉;白芨能消肿生肌，收敛止血;大黄攻积导滞，逐瘀通经，四味中药合用可达到中医祛腐生新治疗肿瘤的效果.CCM-AT13 的 IC50 2mgL-1 ，证明 CCM-AT13具有较强的杀伤人胃癌 SGC-7901细胞作用1
11、7，18 ，杀伤效应符合一级动力学，在不同浓度水平杀伤率皆明显高于 5-FU与华蟾素. CCM-AT13 对恶性增殖的人胃癌 SGC-7901细胞杀伤作用明显大于对培养的正常细胞杀伤作用，说明 CCM-AT13主要杀伤增殖活跃的肿瘤细胞，而对增殖缓慢的正常细胞杀伤作用较弱，当 CCM-AT13剂量达到50mgL-1 时，对人胃癌 SGC-7901细胞杀伤率达到 100%，产生绝对杀伤效应，但仍不能全部杀灭培养的正常细胞，这说明 CCM-AT13可能对正常细胞毒性作用较小，且无抗血管生成作用. CCM-AT13 与 5-FU、华蟾素相比，具有较独特的抗肿瘤作用，具有较大的临床应用价值，有待进一步
12、研究. 参考文献: 1Chen YJ，Shiao MS，Lee SS.Effects of cordyceps sinensis on proliferation and differentiation of human leukemic U937cells J.Life Sci，1997;60:2349-2355. 2Hsieh T，Chen SS，Wang X.Regulation of androgen receptor and prostate specific antigen expression if the androgen-respon-sive human prostate
13、LNCap cells by ethanolic extract of Chinese herbal preparation PC-SPES J.Biochem Mol Biol Int，1997;42:535-539. 3DeVita VT， Hellman S，Rosenberg SA.Cancer-principles and practice of oncology M .New York:Lippincott-Raven，Philadelphia，1997:1021-1049. 4Vokes EE，Golomb HM.Oncologic therapies M.Berlin:Spri
14、nger-Verlag，1999:523-566. 5Michael CA.Feasibility of drug screening with panals of human tumor cell lines using a mycroculture tetrazolium assay J.Cancer Res，1988;48:589-601. 6Mehta S，Blackinton D，Omar I，Kouttab N，Myrick D.Com- bined cytotoxic action of paclitaxel and ceramide against the hu-man Tul
15、38head and neck squamous carcinoma cell line J.Cancer Chemother Pharmacol，2000;46（2）:85-92. 7Weitman S，Barrera H，Moore R，Gonzalez C，Marty J，Hilsen-beck S，MacDonald JR，Waters SJ，Von Hoff D.MGI114:Augumentation of antitumor activity when combined with topotecan J.J Pediatr Hematol Oncol，2000;22（4）:306
16、-314. 8Jin Yeung SC，Xu GP，Pan JX，Christgen M，Bamiagis A.Manumycin enhances the cytotoxic effect of paclitaxel on anaplastic thyroid carcinoma cells J.Cancer Res，2000;60:650-656. 9Brezicka F，Einbeigi Z，Bergman B.Functional assessment in vitro of human-complement-dependent antibody-induced cyto-toxici
17、ty of neoplastic cells J.Cancer Immunol Immunother，2000;49（4-5）:235-242. 10Bouterfa HL，Sattelmeyer V，Czub S，Vordermark D，Roosen K，Tonn JC.Inhibition of Ras farnesylation by lovastatin leads to downregulation of proliferation and migration in primary cul-tured human glioblastoma cells J.Anticancer Re
18、s，2000;20（4）:2761-2771. 11Liu QY，Tan BK.Effects of cis-unsaturated fatty acids on dox-orubicin sensitivity in P388/DOX resistant and P388parental cell lines J.Life Sci，2000;67（10）:1207-1218. 12Etievant C，Kruczynski A，Barret JM，Perrin D，van Hille B，Guminski Y，Hill BT.F11782，a dual inhibitor of topois
19、o-merases I and II with an original mechanism of action in vitro，and markedly superior in vivo antitumor activity，relative to three other dual topoisomerase inhibitors，intoplicin，aclarubicin and TAS-103J.Cancer Chemother Pharmacol，2000;46（2）:101-113. 13Do TK，Kubota T，Ura HT，Yamaue H，Akiyama S，Maehar
20、a Y，Tanigawa N，Kitajima M，Takagi H.Cumulative results of chemosensitivity tests for antitumor agents in Japan J.Anti-cancer Res，2000;20（4）:2389-2392. 14Maksurmova L，Ohnishi K，Muratkhodjaev F，Zhang W，Pan L，Takeshita A，Ohno R.Increased seneitivity of multidrug-re-sistant myeloid leukemia cell lines to
21、 lovastatin J.Leukemia，2000;14（8）:1444-1450. 15Singh B，Kim SH，Carew JF， Yu I，Shaha AR，Wolden S，Boyle J，Shah JP，Rao PH.Genome-wide sreening for radiation response factors in head and neck cancer J.Laryngoscope，2000;110（8）:1251-1256. 16Spaulding-Albright N.A review of some herbal and relative products
22、 commonly used in cancer patients J.J Am Diet As-soc，1997;97:208-213. 17Mans DR，da Rocha AB，Schwartsmann G.Anti-cancer drug discovery and development in Brazil:Targeted plant collection as a rational strategy to acquire candidate anti-cancer compounds J.Oncologist，2000;5（3）:185-198. 18Nash MA，Loercher AE，Freedman RS.In vitro growth inhibi-tion of ovarian cancer cells by Decorin:Synergism of action be-tween Decorin and Carboplatin J
