1、基质金属蛋白酶2 在胆管癌组织中的表达及与预后的关系【摘要】 目的： 探讨基质金属蛋白酶2(MMP2) 在胆管癌(CCA)组织中的表达及与预后的关系. 方法： 随机选取 CCA 患者 106 例，应用 SP免疫组化方法检测 MMP2 蛋白的表达. 其中 89 例术后随访 160 mo，分析 MMP2 蛋白与 CCA 患者预后的相关性. 结果： MMP2 蛋白在 CCA组织中的阳性表达率为 76.42% (81/106)，并与 CCA 组织的临床病理学特征及患者的预后均有密切的关系. 在发生肿瘤浸润、淋巴道转移及低分化的肿瘤组织中，MMP2 蛋白高表达. 此外，MMP2 蛋白阳性表达的CCA 患
2、者的生存率明显低于阴性表达的患者 (P0.01). 结论： MMP2 蛋白的表达可能与 CCA 的浸润、转移有关；检测 MMP2 蛋白在CCA 组织中的阳性表达率，并结合其临床病理学分级，可提高对患者预后的判断准确性. 【关键词】 基质金属蛋白酶类；胆管肿瘤；临床病理学；预后 0 引言 肿瘤的侵袭、转移是恶性肿瘤的基本病理学特征，也是绝大多数肿瘤患者主要的死亡原因之一. 同时，大量研究已证实恶性肿瘤的侵袭、转移与癌基因、生长基因及其受体基因的活化、抑癌基因的失活或丢失密切相关. 因而，研究胆管癌（cholangiocarcinoma，CCA）的相关基因不仅有利于理解其发病机制，还可能发现在诊断
3、和评价预后中具有临床意义的分子标记物. 基质金属蛋白酶2 （matrix metalloproteinase2 ，MMP2 ） ，又名明胶酶 A , 是基质金属蛋白酶家族的主要成员之一1. 已有多项研究表明，MMP2 蛋白在乳腺癌、肝癌等多种肿瘤侵袭、转移中起关键作用，并可用于预测术后复发、转移2-3. 然而，关于 MMP2 蛋白的表达与 CCA 病程进展的关系鲜见报道. 我们采用免疫组化方法检测 106 例 CCA 组织中 MMP2 蛋白的表达情况，探讨其与 CCA 发生、浸润、转移及预后的相关性. 1 材料和方法 1.1 材料我院普外科 200002/200202 经手术切除并经病理检查证
4、实的胆管癌组织标本 106（男 57，女 49）例；年龄 50.113.7 (2779)岁.患者术前均未行化放疗. 对于有完整临床及随访资料的 89 例患者进行为期 160 mo 的随访研究 . 对照组标本 15 例，为非肿瘤组织中的正常胆总管组织. 鼠抗人 MMP2 mAb（工作浓度 1100）和免疫组化采用的SP 法试剂盒均购自北京鼎国生物技术有限公司. 1.2 方法采用免疫组织化学 SP 法染色，标本经 40 g/L 中性多聚甲醛固定,石蜡包埋，4 m 连续切片，70烤片 15 min. 脱蜡至水，30 mL/L H2O2 灭活内源酶，PBS 漂洗 5 min3 次. 正常羊血清室温孵育
5、 15 min. 滴加 2030 L PBS 稀释的一抗 4过夜. PBS 漂洗 5 min3 次. 二抗（生物素标记的山羊抗鼠 IgG，1500）于 37孵育 45 min，PBS 漂洗 5 min3 次. DAB 显色 510 min，自来水充分洗涤，苏木素复染 5 min，冲洗 5 min. 脱水、透明、封片，镜检. 设阳性对照, 用 PBS 替代第一抗体作阴性对照. MMP2 蛋白表达阳性为细胞质出现棕黄色颗粒，不出现者为阴性. 在光镜下（400）观察 10 个视野，每个视野计数 100个细胞，阳性细胞计数打分标准如下：0 分为阴性，1 分为 10%50%细胞呈阳性表达，2 分为 51
6、%75%细胞呈阳性表达，3 分为75%细胞呈阳性表达. 统计学处理：所有数据用 SPSS12.0 处理, 计数资料采用 2 检验. 生存分析用 KaplanMeier 法. P0.05 为差异具有统计学意义. 2 结果 2.1MMP2 蛋白表达及其与 CCA 临床病理参数的关系免疫组织化学染色结果显示，在 CCA 组织中，MMP2 蛋白的阳性表达主要定位于癌细胞质，呈弥漫分布的棕黄色颗粒. MMP2 蛋白的阳性表达率为 76.42% (81/106)，而在正常胆总管组织中不表达. MMP2 蛋白在 CCA 组织中的表达情况与患者临床病理参数之间的关系见表 1. MMP2 蛋白的表达与CCA 分
7、化程度、TNM 分期、有无浸润转移有关. 低分化及存在浸润转移的肿瘤组织中，MMP2 蛋白的阳性表达率高于高、中分化（P=0.02）及未发生浸润转移者（P0.01） ；TNM期的 CCA 组织中 MMP2 蛋白的阳性表达率明显低于 TNM期的 CCA 组织 (P=0.01). 表 1MMP2 蛋白表达与 CCA 临床病理参数的关系 2.2MMP2 蛋白表达与 CCA 患者预后的关系本研究对 89 例 CCA 患者进行了术后随访研究. MMP2 蛋白表达情况与患者术后生存率的关系分析如表 2，图 1 所示. 根据 TNM 分期和浸润转移情况分组的 CCA 患者中，有 MMP2 蛋白阳性表达的患者
8、，其生存率则明显低于阴性表达者. 从生存分析结果看，当 MMP2 蛋白阴性表达时，CCA 患者的生存率高于MMP2 蛋白阳性表达的患者. 3 讨论 已有研究表明4-5 ，肿瘤的浸润转移是个多步骤的复杂过程，癌细胞脱离原发灶及进出血管时，需要首先突破细胞外基质及基底膜屏障，向临近纤维结缔组织浸润进而向远处转移，其中细胞外基质及基底膜的降解是肿瘤侵袭转移过程中最关键的一步. 近年来, 肿瘤细胞间质成分的改变在肿瘤浸润转移中的作用成为肿瘤研究的一个热点. 研究表明，基质金属蛋白酶(MMPs) 是降解细胞外基质的主要家族之一. 它们在肿瘤侵润转移中扮演着重要角色，MMPs 通过降解细胞外基质中的大分子
9、物质(如胶原、层粘连蛋白等)而破坏癌细胞浸润的物理屏障. MMP2 是 MMPs 家族中分布最广的成员，因其主要反应底物为细胞外基质中的 IV 型胶原故又称之为 IV 型胶原酶，未激活的酶原 Mr 为 72 000，水解后 Mr 变成66 000 的激活形式6. 当细胞恶变时常有 MMP2 的升高. 目前认为MMP2 表达和功能的调节发生于转录、分泌、前酶原的激活、细胞表面的结合以及与源于肿瘤或宿主细胞的 MMPs 抑制剂的相互作用等多个不同的水平. 已有许多关于 MMP2 的报道证实，在肺癌、乳腺癌、结直肠癌、子宫内膜癌、皮肤鳞状细胞癌等多种肿瘤细胞中均发现 MMP2 表达的增高，在部分肿瘤
10、中还发现随着肿瘤恶性程度的增高，MMP2 的表达也增高，且与肿瘤的浸润和转移相关7-8. 表 2MMP2 蛋白表达与 CCA 患者术后生存率的关系 CCA 是恶性梗阻性黄疸的原因之一，多发生在肝门部，以浸润性生长为特征，病变范围与周围组织分界不清，造成手术根治困难，术后易复发. 影响胆管癌预后的因素主要有肿瘤组织分化程度、浸润深度、有无神经浸润及临床分期等9-10. 本研究中，MMP2 蛋白在高、中、低分化型癌中，阳性表达率呈逐渐上升趋势，分化越低的癌组织中，MMP2 蛋白的强阳性表达率越高，提示 MMP2 蛋白的异常高表达与肿瘤的分化程度密切相关. 我们同时发现 MMP2 蛋白表达与浸润转移
11、和 TNM分期有关，随着浸润转移的出现及 TNM 分期的进展，MMP2 蛋白的强阳性表达率明显增加. 此外，通过对患者进行术后 160 mo 的随访观察发现，MMP2 蛋白阳性表达的患者生存率低于其阴性表达者. 综上所述，MMP2 蛋白的表达可能与 CCA 的浸润、转移有关；检测MMP2 蛋白在 CCA 组织中的阳性表达率，并结合其临床病理学分级，可提高对患者预后的判断准确性. 【参考文献】 1 Pulukuri S, Patel J, Estes N, et al. Matrix metalloproteinase1 (MMP1) expression and biological sign
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