1、慢性乙型肝炎患者血清基质金属蛋白酶 2及其组织抑制因子的变化及临床意义【摘要】 目的： 观察血清基质金属蛋白酶2 （MMP2 ）及其组织抑制因子（TIMP2 ）与慢性乙型肝炎患者肝纤维化程度的相关性. 方法： 用 ELISA 方法检测 60 例慢性乙型肝炎患者的血清 MMP2 和TIMP2 的含量，并与 20 例健康人员作对比，分析二者与患者肝纤维化程度之间的关系. 结果： 慢性乙型肝炎重度患者血清 MMP2 和TIMP2 的水平分别较对照组、慢性乙型肝炎轻、中度升高（P0.05） ；而慢性乙型肝炎轻、中度患者的 MMP2 和 TIMP2 水平与对照组比较无统计学差异（P0.05）. 慢性乙型
2、肝炎轻、中度患者的 MMP2, TIMP2 比较无统计学差异（P0.05）. 血清 MMP2, TIMP2 水平分别与肝纤维化程度有相关，二者的相关系数 r 值分别为 0.851, 0.623，P 值均0.01. 结论： 患者血清中 MMP2, TIMP2 水平随慢性乙型肝炎病情的加重而升高，并与肝纤维化程度有相关. 【关键词】 明胶酶 A；金属蛋白酶2 组织抑制剂；肝炎，乙型，慢性 【Abstract】 AIM: To investigate the relationship of the levels of serum matrix metalloproteinase2 (MMP2) an
3、d tissue inhibitor of metalloproteinase2 (TIMP2) with hepatic fibrosis degree in patients with chronic hepatitis B. METHODS: Serum levels of MMP2 and TIMP2 were measured by ELISA in 60 patients with chronic hepatitis C and 20 healthy controls. RESULTS: The serum MMP2 and TIMP2 levels were significan
4、tly increased in severe chronic hepatitis B, but not in mild and moderate chronic hepatitis B. There was no significant difference in the serum MMP2 and TIMP2 levels between the patients with mild and moderate chronic hepatitis. The levels of serum MMP2 and TIMP2 showed a positive correlation with t
5、he degree of hepatic fibrosis (r=0.851, 0.623, P0.01). CONCLUSION: Serum MMP2 and TIMP2 levels are significantly increased in chronic hepatitis B and have a good correlation with hepatic fibrosis. 【Keywords】 gelatinase A; tissue inhibitor of metalloproteinase2 (TIMP2); hepatitis B, chronic 0 引言 慢性乙型
6、肝炎后，易发生肝纤维化，进而发展为肝硬化、肝癌. 目前的研究表明，基质金属蛋白酶（MMPs）及其组织抑制剂（TIMPs）可调节肝细胞外基质（ECM）的代谢，肝纤维化的发生就是由于 ECM 合成增多，降解减少而在肝内过度沉积所致1-4. 其中，MMPs 促进 ECM 降解，而TIMPs 通过抑制 MMPs 阻止 ECM 的降解从而促进肝纤维化. 肝脏 MMPs 的活性受抑，同时 TIMPs 的功能活性增强，导致了细胞外基质的降解减少. 肝纤维化时，在 ECM 降解过程中起主要作用的 MMPs 是 MMP1, MMP2, MMP3, MMP9 5 ，其中 MMP2 与肝纤维化的关系较为密切. 因此
7、，本实验我们观察了 60 例慢性乙型肝炎患者及 20 例健康人员 MMP2 和TIMP2 血清水平的变化，探讨其与肝纤维化程度的相关性. 1 对象和方法 1.1 对象 慢性乙型肝炎组 60（男 30，女 30）例，年龄(35.613.7)岁，均为我院 200201/200701 住院及门诊患者，所有病例均被我院临床明确诊断为慢性乙型肝炎患者，符合 1995 年北京全国病毒性肝炎会议制定的诊断标准（包括体征、超声、生化系列检测、血清抗 HBsAg 为阳性）. 正常对照组 20 例，均系健康体检者，无心、肝、肺、肾等重要脏器疾患，肝、肾功能试验正常，HBsAg 为阴性. 1.2 方法 1.2.1
8、血样标本 采集所有实验对象均采取空腹静脉血后，立即分离血清，-20保存待测. 1.2.2 肝活检方法及病理诊断标准 每例患者在穿刺前，均行 B 超定位检查. 采用 1s 肝穿刺活检法，使用 16G 活检针，由配套活检枪行经皮肝穿术，取肝组织标本送病检，连续切片，分别做 HE 及网状纤维染色，病理炎症分级按照 1995 年国家卫生部制订的病毒性肝炎防治方案的病理诊断标准判断. 60 例均有不同程度的炎症反应及不同程度的纤维化或肝硬变. 1.2.3 血清 MMP2 和 TIMP2 测定 均采用 ELISA 方法检测（试剂购自 USA RD Systems Inc）. 按试剂盒说明书操作. 统计学处
9、理：各指标以 xs 表,示用统计软件 SPSS12.0 进行统计学处理，各组均数比较用方差分析及 LSDt 检验. MMP2, TIMP2 分别与肝纤维化分期作相关性分析. 2 结果 在不同炎症活动度下，慢性乙型肝炎组与正常对照组的血清 MMP2, TIMP2 水平比较见表 1. 可见慢性乙型肝炎重度患者的血清 MMP2, TIMP2 含量与正常对照组比较，有统计学差异（P0.05）. 慢性乙肝轻、中度患者的血清 MMP2, TIMP2 含量与对照组比较，无统计学差异（P0.05）. 慢性乙肝轻、中度患者的血清 MMP2, TIMP2 含量的比较亦无统计学差异（P0.05）. 表 1 正常组与
10、患者肝组织炎症活动度与血清 MMP2, TIMP2 水平的关系 （略） 在不同肝纤维化程度下，慢性乙型肝炎组与正常对照组的血清MMP2, TIMP2 水平比较见表 2. 慢性乙型肝炎患者随肝纤维化程度的加重，其 MMP2, TIMP2 的血清水平逐渐升高，且升高幅度不断加大，与正常对照组比较有统计学差异（P0.01）. 通过相关性分析发现，MMP2, TIMP2 的血清水平与肝纤维化程度的相关系数 r 分别为0.851, 0.623，P 值均0.01，具有一定的正相关性. 3 讨论 各种慢性肝病患者均会逐渐出现不同程度的肝纤维化，进而向肝硬化发展. 肝纤维化的实质6-9是以, 型胶原为主的细胞
11、外基质(ECM)合成与降解失衡，导致 ECM 在肝内过度沉积. 基质金属蛋白酶类(MMPs) 和金属蛋白酶组织抑制因子(TIMPs)的平衡在 ECM 的合成与降解中发挥着重要的作用.表 2 正常组与患者在不同肝脏纤维化程度下血清MMP2, TIMP2 的含量（略） MMPs10是一类含有 Zn2+的肽链内切酶，几乎能水解所有的细胞外基质. 迄今为止，MMPs 家族中已发现有 26 个成员，但它们的降解底物及功能各不相同. TIMPs 则是近年被发现的一组能够特异性抑制 MMPs活性的蛋白质，其家族成员有 4 个，分别命名为 TIMP1, TIMP2, TIMP3, TIMP4 ，均为小分子多肽
12、. TIMPs 分为 N 端和 C 端两个功能区，前者的半胱氨酸残基与 MMPs 的 Zn2+活性中心结合，后者与 MMPs 的其他部位结合，以 11 非共价结合的形式构成 MMPs TIMPs 复合体，从而阻断 MMPs 与其底物结合，是一种转录后调节机制. 在正常肝脏中 MMPs 和 TIMPs 处于平衡的状态，两者共同维护肝脏的微环境稳态,一旦有致病因子打破这种平衡,便会促进肝纤维化的发生. MMP2, MMP9 和MMP3 对正常肝脏基质有降解活性11. 其中 MMP2 的特异性底物为型胶原，TIMP2 调节 MMP2 的活性，故 MMP2, TIMP2 在肝纤维化的发生、发展过程中起
13、重要作用. 所以，对 MMP2 及其抑制物TIMP2 在肝纤维化病理损害中的变化过程进行分析是很有必要的. 为此，我们在本实验中对 60 例慢性乙型肝炎患者血清 MMP2, TIMP2 水平与炎症活动度及肝纤维化程度的关系进行了考察，结果发现，慢性乙型肝炎重度患者的 MMP2,TIMP2 血清水平高于正常对照组，有统计学意义（P0.05）. 并且随着患者肝纤维化程度的加重，MMP2 ，TIMP2 的血清含量逐渐升高，幅度不断加大，相关性分析说明二者与肝纤维化程度呈明显的正相关. 可见，MMP2 ，TIMP2 血清水平不仅可以作为肝纤维化的诊断指标之一，还可用于判断慢性乙型肝炎病情轻重，在此领域
14、具有一定的临床意义. 【参考文献】 1Pazienza V, Clement S, Pugnale P, et al. The hepatitis C virus core protein of genotypes 3a and 1b downregulates insulin receptor substrate 1 through genotypespecific mechanismsJ. Hepatology, 2007, 45(5):1164-1171. 2韩志启,秦守杰,朱增红.干扰素 a2a 对慢性乙型肝炎肝纤维化的疗效观察J. 医药论坛杂志,2003,24(17):17-18.
15、3韩捷，陈海燕，李扬，等. 秦巴山区 HCMV 感染母婴垂直传播与 HcmvgB 基因分型的关系J. 第四军医大学学报，2006，27（15）：1425-1427. 4Vizzutti F, Arena U, Romanelli RG, et al. Liver stiffness measurement predicts severe portal hypertension in patients with HCVrelated cirrhosis J. Hepatology, 2007, 45(5):1290-1297. 5Ozdemir A, Yalinbas B, Selamet U,
16、 et al. The effect of hepatitis C virus infection on insulin resistance in chronic haemodialysis patients J. Yonsei Med J, 2007,48(2):274-80. 6王晓波.乙型肝炎的实验室诊断J. 中国保健, 2006,14（24）：80-81. 7郭西萍，钟基大，冯红平，等. 血清 HA, LN, PC 含量与慢性肝炎病理变化的关系J. 中西医结合肝病杂志 , 2000, 10(6)：19-20. 8徐庆杰. 苦参素联合拉米夫定治疗慢性乙型肝炎对肝纤维化指标的影响J. 第
17、四军医大学学报，2005，26（8）：732-733. 9CollierI E, Wilhelm SM, Eisen AZ, et al. Haras oncogene transformed human bronchial epithelial cells(TBEl)secrete a single metalloproteinase capable of degrading basement membrane collagenJ. J Biol Chem, 1988, 263(14);6579-6587. 10岳兰萍,马红,贾继东. 基质金属蛋白酶及其抑制因子与肝纤维化J. 胃肠病学和肝病学杂志, 2006, 15(6):627-629. 11刘江，何建方，施柏年. 慢性肝病患者血清基质金属蛋白酶一 2 和基质金属蛋白酶一 2 组织抑制因子与肝纤维化指标的关系J. 临床内科杂志，2005, 22(8):522-524.
