1、趋化因子受体 CCR7 在不同类型肺癌组织中的表达及其临床意义【摘要】 目的：探讨趋化因子受体 CCR7 在不同类型肺癌组织中的表达及其临床意义. 方法：采用免疫组织化学方法检测 110（鳞癌 40，腺癌 40，小细胞癌 30）例肺癌和 30 例癌旁正常肺组织中 CCR7 的表达. 结果：在 110 例肺癌组织中有 77 例 CCR7 表达阳性（70.0%） ，30 例癌旁正常肺组织中仅 5 例表达阳性（16.7%，P0.05）. 鳞癌、腺癌及小细胞癌 CCR7 阳性率分别为 60.0%，92.5%，53.3%（P0.01） ；腺癌 CCR7阳性率明显高于鳞癌和小细胞癌（分别 P0.01，P0
2、.01）. 68 例伴淋巴结转移的病例 CCR7 阳性率 83.3%，42 例不伴淋巴结转移的病例CCR7 阳性率 47.6%（P0.01）. 期、期、期、期肺癌病例CCR7 阳性率分别为 59.5%，76.2%，69.2%，100.0%（P0.05）. 不同性别患者肺癌组织中 CCR7 阳性率分别为男 66.7，女80.8（P0.05）. 小于等于 60 岁和大于 60 岁年龄组肺癌组织中CCR7 阳性率分别为 70.3，69.6（P0.05）. 结论：CCR7 上调表达是肺鳞癌、腺癌及小细胞癌的一个普遍特征，高水平的 CCR7 表达与肺癌的淋巴结转移和高 TNM 分期有关，而与年龄、性别无
3、关. 【关键词】 肺肿瘤 趋化因子受体 CCR7 趋化因子 淋巴结转移 0 引言 CCR7（CC chemokine receptor 7）是 CC 家族趋化因子受体的成员之一，通过与其配体 CCL21 相互作用在淋巴细胞的归巢过程中起重要作用. CCL21 在淋巴结中特异性高表达，同时许多肿瘤细胞表面有 CCR7 的表达. 研究证实，CCR7 的表达与多种恶性肿瘤的淋巴结转移密切相关1-3. 但有关肺癌组织中 CCR7 的表达及其与淋巴结转移关系的研究目前报道很少. 我们通过观察 CCR7 在不同类型肺癌组织中的表达，探讨CCR7 表达与肺癌临床病理特征和淋巴结转移的关系. 1 材料和方法
4、1.1 材料收集我院 200306/200606 肺癌根治手术标本 110（男84，女 26）例，平均年龄 58（3276）岁，其中肺腺癌 40 例，肺鳞状细胞癌 40 例，肺小细胞癌 30 例，并以癌旁正常肺组织 30 例做对照. 所有病例经病理复诊并进行 TNM 分期：期 37 例，期 42 例，期 26 例，期 5 例. 山羊抗人 CCR7 多克隆抗体（美国 Santa Cruz 公司） ；即用型SP 免疫组化检测试剂盒（山羊 SP kit） （北京中杉金桥生物技术有限公司） ；ZEISS Avxioskop2 显微镜（德国） ；MICROM 切片机（德国） ；PYXDHSX 恒温培养箱
5、（德国） ；Haier BCD238WF 冰箱. 1.2 方法 1.2.1 免疫组织化学染色用 SP 法，将中性甲醛固定和石蜡包埋的肿瘤组织制成 4 m 厚的切片，经二甲苯和梯度乙醇脱蜡至水，在 30 mL/L H2O2 溶液中室温孵育 10 min 以消除内源性过氧化物酶活性. 切片在 EDTA 溶液（1 mmol/L, pH 8.0）中煮 20 min 进行抗原修复. 在封闭用正常山羊血清中室温孵育 10 min. 倾去血清，滴加一抗（山羊抗人 CCR7多克隆抗体，170 稀释） ，4过夜. PBS 冲洗 3 次后滴加生物素标记二抗工作液（生物素标记兔抗山羊 IgG） ，37孵育 30 m
6、in. PBS 冲洗 3 次，滴加辣根酶标记链霉卵白素工作液，37孵育 30 min. PBS 冲洗 3 次. DAB 显色. 用自来水冲洗，苏木素复染，脱水透明，常规封片. 用 PBS 代替一抗做阴性对照. 1.2.2 结果判断由两位病理医师分别双盲阅片，按肿瘤细胞阳性细胞率和着色强度分别进行记分. 肿瘤细胞阳性细胞率记分标准：阳性细胞5%为 0 分，6%25%为 1 分，26%50%为 2 分，51%75%为 3 分，75%为4 分；着色强度记分标准：无着色为 0 分，淡黄色为 1 分，黄色为 2 分，棕黄色为 3 分. 两种记分标准所得分值的乘积为 0 表示阴性(-)，大于 1为阳性，其
7、中 12 弱阳性(+)，34 阳性() ，5 强阳性(). 统计学处理: 采用四格表及行列表资料的 2 检验，以 P0.05认为差异有显著性. 2 结果 2.1 肺癌及癌旁正常肺组织中 CCR7 的表达 CCR7 阳性部位定位于胞膜和（或）胞质（图 1）. 在 110 例肺癌组织中 CCR7 阴性 33 例，弱阳性22 例，阳性 27 例，强阳性 28 例，阳性率为 70.0%；30 例癌旁正常肺组织 CCR7 阴性 25 例，弱阳性 5 例，阳性 0 例，强阳性 0 例，阳性率为16.7%. 肺癌组织 CCR7 阳性率明显高于癌旁正常肺组织（P0.005）. 2.2 不同类型肺癌组织中 CC
8、R7 的阳性表达肺鳞癌、腺癌及小细胞癌组织中 CCR7 阳性率分别为 60.0%(24/40), 92.5%(37/40), 53.3%(16/30) (P0.01)；腺癌 CCR7 阳性率明显高于鳞癌和小细胞癌（P 均0.01） ，鳞癌和小细胞癌组织中 CCR7 表达无明显差异（P0.05）. 2.3CCR7 表达与肺癌临床病理特征的关系伴淋巴结转移的肺癌病例CCR7 阳性率为 83.3%(57/68)，不伴淋巴结转移的肺癌病例 CCR7 阳性率为 47.6%(20/42)，组间比较有显著性差异（P0.01）. 期、期、期、期肺癌病例 CCR7 阳性率分别为 59.5%(22/37)，76.
9、2%(32/42)，69.2%(18/26)，100.0%(5/5)（P0.05） ，CCR7 阳性率越高，TNM 分期越高. 不同性别患者肺癌组织中 CCR7 阳性率分别为男 66.7%(56/84)，女80.8%(21/26)（P0.05）. 小于等于 60 岁和大于 60 岁年龄组肺癌组织中 CCR7 阳性率分别为 70.3%(45/64)，69.6%(32/46)（P0.05）. 3 讨论 趋化因子受体是一种介导趋化因子行使功能的 GTP 蛋白耦连的跨膜受体，趋化因子与其受体的相互作用在人体细胞的生长、发育、分化和凋亡，以及肿瘤细胞的生长和转移，淋巴细胞向炎症部位的聚集，HIV 感染等
10、许多生理和病理过程中发挥重要作用4. CCR7 属 CC 类趋化因子受体亚家族的成员，功能性表达于多种组织和细胞类型，通过与其配体CCL19，CCL21 结合参与机体内多种生理和病理过程，尤其是在肿瘤生长和转移中的作用倍受关注. 马飞等5的研究发现，CCR7 的表达能够促进乳腺癌细胞的趋化和侵袭； Muller 等3的研究也发现阻断 CCR7 受体与配体的结合可抑制乳腺肿瘤的转移，说明 CCR7 通过与其配体结合可能在乳腺癌淋巴结转移中发挥重要作用. CCR7 与肿瘤生长和淋巴结转移的相关性还见于甲状腺癌、子宫颈癌、口腔和口咽鳞状细胞癌等的研究中6-8 ，而有关肺癌组织中 CCR7 表达及意义
11、的研究较少，尤其小细胞肺癌组织中 CCR7 表达情况的研究尚未见报道. 苏丽萍等9研究了趋化因子受体 CXCR4 在肺癌及癌旁正常肺组织的表达，发现与癌旁正常肺组织相比，肺癌组织表达较高水平的 CXCR4，并且 CXCR4 高表达与肺癌的淋巴结转移有关. CCR7 与 CXCR4 分属不同趋化因子受体亚家族，在肿瘤的发生发展过程中可能具有某些相同作用. 我们观察了包括 30 例小细胞肺癌在内的 110 例肺癌组织中 CCR7 的表达情况. 结果表明，肺癌组织CCR7 表达显著高于癌旁正常肺组织，并且与肺癌的组织学类型有关；腺癌 CCR7 阳性率显著高于鳞状细胞癌和小细胞癌，这提示 CCR7 在
12、一定程度上与肺癌的发生有关，同时 CCR7 上调表达可能是肺鳞癌、腺癌及小细胞癌的一个普遍特征. 研究结果还显示， CCR7 高表达与肺癌的淋巴结转移和高 TNM 分期有关，提示 CCR7 可能参与了肺癌的淋巴结转移过程，进而影响肺癌患者的 TNM 分期和预后，这与文献报道一致10-11. CCR7的配体 CCL19 和 CCL21 在淋巴结中高表达12 ，从而诱导 CCR7 表达阳性细胞向淋巴结定向迁移可能是 CCR7 表达阳性肿瘤更容易发生淋巴结转移的原因之一. 目前认为，CCR7 及其配体 CCL21 在肿瘤发生发展中的作用是多方面的，其作用机制与 CCL21 与 CCR7 作用诱导树状
13、突细胞及淋巴细胞的抗肿瘤免疫反应和抑制肿瘤血管生成有关，并可能成为研发新的抗肿瘤药物的理论依据. 越来越多的证据表明，肿瘤的转移是嗜器官的，趋化因子及其受体的表达在肿瘤的转移部位上起关键作用13. 我们的结果显示 CCR7 的上调表达与肺癌的发生有关，其高表达可能是判断肺癌是否发生淋巴结转移及 TNM 分期，进而判断患者预后的一个指标. 目前虽然肿瘤细胞上调表达相关趋化因子或趋化因子受体的分子机制还未完全阐明，但可以肯定的是，肿瘤细胞自身表达的趋化因子或趋化因子受体与宿主的特异性受体或配体结合与肿瘤的生长、播散和靶器官特异性转移有关. 因此有关 CCR7 的上调表达在肺癌生长及转移中的作用机制
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