1、胃癌组织 连环蛋白与尾侧型同源转录因子2 表达的临床意义作者：黄知果，孙维佳，何剪太，张阳德 【摘要】 目的： 探讨胃癌 连环蛋白(catenin) 与尾侧型同源转录因子2(CDX2) 的表达与浸润、转移及预后的关系. 方法： 胃癌患者 80 例，以正常胃黏膜 12 例作为对照，应用 SP 免疫组化方法检测catenin 和 CDX2 的表达. 结果： 正常胃黏膜上皮中 catenin 全部正常表达，而在胃癌组织中表达减弱、缺失或分布异常. CDX2 则在正常胃黏膜上皮中不表达. catenin 和 CDX2 的表达与胃癌组织的分化程度、肿瘤生长方式、癌细胞浸润深度及淋巴结转移有关（P0.01
2、）. 当患者 catenin 阳性表达/CDX2 阳性表达时，术后 5 a 生存率最高(P0.05). 结论： catenin, CDX2 与胃癌的发生、浸润、转移有关. 【关键词】 连环蛋白；尾侧型同源转录因子2 ；胃肿瘤；预后【Abstract】 AIM: To analyze the association of the expression of catenin and CDX2 with invasion, metastasis, and prognosis of human gastric carcinoma. METHODS: Eighty patients with gastr
3、ic carcinoma and 12 normals as control were examined for the expression of catenin and CDX2 by SP immunohistochemistry. RESULTS: catenin was present in all normal gastric mucomembranous epithelium, but CDX2 was not. catenin was decreased, deficient, or abnormaliy distributed in gastric carcinoma tis
4、sues. These two markers were associated with the differentiation, invasion, metastasis of gastric carcinoma(P0.01). The 5year survival rate was highest in patients with coexpression of catenin and CDX2 (P0.05). CONCLUSION: The expression of CDX2 or catenin may be associated with the genesis, invasio
5、n, and metastasis of gastric carcinoma.【Keywords】 catenin; CDX2; stomach neoplasms; prognosis0 引言胃癌是我国最常见的恶性肿瘤之一. 近年来的诸多研究表明多重遗传变化与胃癌的发生、发展密切相关. 连环蛋白（catenin ）是上皮型钙黏素/连环蛋白复合物的重要成分之一，是保证上皮型钙黏素行使黏附功能所必需的蛋白质. 该复合物下调将导致的黏附功能丧失，是许多上皮性恶性肿瘤浸润进展的重要步骤. 有研究表明，catenin在乳腺癌和结肠癌中表达异常，并与癌组织的浸润和转移有关1 ，但对胃癌组织的影响尚未见详
6、细报道. 尾侧型同源转录因子2 (caudal type homeobox transcription factor2, CDX2) 是人体中肠道特异性表达的核转录因子，在肠黏膜上皮细胞的发育及保持其形态、结构特征中起着重要作用. 大量研究认为 CDX2 在结直肠肿瘤发生过程中扮演“抑癌基因”的角色，并与肿瘤的生物学特性及患者预后密切相关2 ，而关于 CDX2 对胃癌发展作用和意义的研究报道不多. 因此，我们采用免疫组织化学方法检测 80 例胃癌组织中 catenin 和 CDX2 的表达情况，探讨二者与胃癌发生、浸润、转移及预后的关系.1 对象和方法1.1 对象200006/200206 胃
7、癌手术病理学诊断标本 80(男 55，女 25)例；年龄 53.610.3 (3275)岁. 患者术前均未行化放疗. 均被随访，时间560 mo. 分别根据国际胃癌新 TNM 分期标准、Lauren 分类法、胃癌组织学分类标准及淋巴转移情况对病例进行分组. 正常对照组标本 12 例，为距胃癌边缘 10 cm 以上的胃黏膜组织，经病理学检查证实无癌肿浸润.1.2 方法采用免疫组织化学染色 SP 法，标本经 40 g/L 中性多聚甲醛固定, 石蜡包埋，4 m 连续切片，70烤片 15 min，梯度乙醇脱水，30 mL/L H2O2 灭活内源酶，PBS 漂洗 5 min3 次. 正常羊血清室温孵育
8、15 min. 滴加 2030 L PBS 稀释的一抗(15 的 HECD1mAb) 4过夜. PBS 漂洗 5 min 3 次. 二抗、三抗依次 37 孵育 45 min，PBS 漂洗 5 min3 次. DAB 显色 510 min，自来水充分洗涤，苏木素复染 5 min，稀盐酸淡化 30 s，冲洗 5 min. 脱水、透明、封片，镜检. 设阳性对照, 用 PBS 替代第一抗体作阴性对照. 鼠抗人 catenin mAb（工作浓度150，购自美国抗体诊断公司） 、鼠抗人 CDX2 mAb（工作浓度 150，购自美国抗体诊断公司）和免疫组化采用链霉菌抗生素蛋白 过氧化物酶法染色(SP 法)
9、试剂盒均为 Santa Cruz 公司生产，购自北京中山生物技术有限公司. 取 10 个高倍视野，以阳性癌细胞占观察癌细胞总数的百分比作为阳性细胞率. 细胞膜呈棕黄色颗粒染色者为 catenin 阳性细胞，阳性率10%为阳性，否则为阴性；CDX2 蛋白表达阳性为胞核出现棕黄色颗粒，超过 40%细胞 CDX2 阳性表达记为阳性，否则记为阴性3.统计学处理: 所有数据用 SPSS13.0 处理, 列联表资料采用 2 检验与 Fishers 法分析. P0.05 为差异具有统计学意义. 2 结果2.1catenin 和 CDX2 蛋白表达与胃癌临床病理特征的关系正常胃黏膜组织上皮细胞全部正常表达 c
10、atenin ，表现为细胞膜或胞区近胞膜处呈棕褐色，同质和极性分布，未见异常着色；但 CDX2 不表达. 在胃癌细胞中，catenin 出现异常表达，细胞膜着色淡或不着色，且极性分布消失；CDX2 则主要表达于细胞核，呈棕黄色. catenin 和CDX2 的表达与胃癌患者年龄、性别、肿瘤大小及有无血管侵害均无关(P0.05). 而与胃癌组织的 Lauren 分型、淋巴转移程度、TNM 分期、癌组织分化程度及肿瘤浸润深度均有关(P0.05，表 1). 表1catenin 和 CDX2 蛋白表达与胃癌临床病理特征的关系(略)2.2catenin 和 CDX2 与胃癌 5 a 生存率的关系 80
11、例胃癌患者5 a 总生存率为 32.5%，当 catenin 与 CDX2 联合阳性表达时，患者的生存率最高，达到 64.3%；而当二者均为阴性表达时，患者的生存率最差（7.1%）. catenin （-）/CDX2（+）为 23.1%，而catenin （+）/Cdx2（-）为 48.0%.3 讨论catenin 是连环蛋白家族的重要成员之一4. 参与上皮细胞黏附和 WNT 信号传导. 当 catenin 基因的变异或 catenin 的异位磷酸化致使上皮型钙黏素/连环蛋白复合物和细胞骨架脱离，细胞黏连松散，两种作用共同导致肿瘤细胞的浸润转移5. 本研究中，正常胃黏膜 100 %表达 cat
12、enin. 在高、中、低分化型癌中，catenin 阳性表达率呈逐渐减少趋势，说明分化越低的胃癌，catenin 阳性表达率越低，提示 catenin 的低表达与肿瘤的分化程度密切相关. 更重要的发现是，catenin 的表达与肿瘤的浸润深度、TNM 分期、有无淋巴结转密切相关. 提示 catenin 参与了胃癌细胞的移位、浸润、转移.CDX2 为同源异型盒基因(homeobox gene) 家族的成员之一，其产物特异性地表达于小肠和结肠上皮，在正常人体发育过程中对肠上皮细胞的分化和增殖起调节作用. CDX2 为抑癌基因，可能与癌基因突变、细胞周期调控有关6. 虽然在正常胃黏膜上皮中 CDX2
13、 呈阴性表达，但在绝大多数胃黏膜肠化生中呈阳性表达，提示 CDX2 蛋白在胃黏膜细胞中的异位表达是发生胃黏膜肠化生的重要起始事件，而肠化生又是胃癌的癌前病变. 我们发现肠型胃癌中 CDX2 呈现高表达，且高于混合型胃癌. 此外，CDX2 蛋白表达强度随胃癌组织的分化程度变差而减弱，说明 CDX2 异常表达与胃癌密切相关. 影响胃癌患者预后的关键因素就是肿瘤浸润胃壁的深度和淋巴结转移数量. 本研究表明高 CDX2 蛋白表达的胃癌较低表达患者的侵袭能力差，且后者常出现淋巴结转移，这一现象可能与CDX2 蛋白表达缺失有利于癌细胞的免疫逃逸有关. CDX2 蛋白表达强度随癌细胞系分化由好到差呈逐渐减少
14、的趋势. 据此可以认为检测胃癌组织中 CDX2 蛋白的表达状况可能有助于判断胃癌的恶性程度及患者预后转归. 通过综合分析 catenin 和 CDX2 蛋白的联合表达与胃癌患者 5 a 生存率的关系，我们发现，两种蛋白在患者胃癌组织中同时表达时，其生存率大大提高，较总体水平高出 31.8%，有显著统计学意义. 可见，catenin 和 CDX2 蛋白与胃癌的发生、浸润、转移有关，可联合检测，作为新的胃癌标记物，有利于判断病情进展及预后.【参考文献】1Lim SC, Lee MS. Significance of Ecadherin/catenin complex and cyclin D1 i
15、n breast cancer J. Oncol Rep, 2002, 9: 915-928.2Almeida R, Silva E, SantosSilva F, et al. Expression of intestinespecific t ranscription factors, CDX1 and CDX2, in intestinal metaplasia and gastric carcinomas J. J Pathol, 2003, 199(1) : 36.3Bankfalvi A, Terpe HJ, Breukelmann D, et al. Immunophenotyp
16、ic and prognostic analysis of Ecadherin and catenin expression during breastcarcinogenesis and tumor progression: Acomparative study with CD44 J. Histopathology, 1999, 34 :25-341.4李恒平，童仕伦，张倩. 连环蛋白和核转录因子在胃癌中的表达及意义J. 武汉大学学报:医学版, 2005, 26（2）：243-246.5王莉，张帆，吴平平, 等. 上皮型钙黏素和连环蛋白表达与胃癌的关系J. 上海第二医科大学学报, 2005, 25（7）：675-678.6Seno H, Oshima M, Taniguchi MA, et al. CDX2 expression in the stomach with intestinal metaplasia and intestinaltype cancer: Prognostic implications. J Int J Oncol, 2002, 21:769-774.
