1、小肝癌血管内皮生长因子的表达与螺旋 CT血供特征的探讨作者：尚红利 贺伯伟 吴方雄 王丽娜 【摘要】 目的：探讨小肝癌组织中血管内皮生长因子的表达及其与螺旋 CT 血供分型的关系. 方法：用免疫组化染色检测 33 例小肝癌组织中VEGF 的表达水平,并与患者的螺旋 CT 双期扫描血供分型特征对照. 结果：血管内皮生长因子表达水平与门静脉癌栓形成有关(P0.05)，与肝癌组织学分级、肿瘤包膜形成和肿瘤大小无关；肝动脉供血型的小肝癌组织中 VEGF 表达水平高于门脉供血型(P0.05)和少血供型小肝癌组织(P0.01). 结论： VEGF 在小肝癌组织血管生成过程中起重要作用，它可以作为小肝癌抗血
2、管治疗的靶点. 【关键词】 肝肿瘤 病理学 体层摄影术 X 线计算机 血管内皮生长因子 抗原 0 引言 肝癌是高血供肿瘤，肝脏肿瘤血管生成被认为在肝癌的发生发展过程中起重要作用. 在肿瘤血管生成过程中，血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor, VEGF）起着关键性作用. 螺旋 CT 有助于对小肝癌(small hepatocellular carcinoma，SHCC)的早期发现. 我们用免疫组化法和螺旋 CT 双期扫描研究 VEGF 表达水平与 SHCC血供分型的关系. 1 对象和方法 1.1 对象 选取 200001/200401 在西安医学
3、院附属医院和第四军医大学西京医院行手术切除或细针穿刺的病理诊断明确的 SHCC 组织病变 33（男25，女 8）例，年龄 3367（中位 55）岁；SHCC 大小以单个癌灶最大径3 cm，或同一病例多个癌结节数目不超过 2 个，最大直径之和3 cm为标准. 血清 HBsAg 阳性 25 例，HCVAb 阳性 4 例,其中 1 例为 HBV 和 HCV重叠感染,5 例 HBV 和 HCV 检测均为阴性. 肿瘤病理分级按 WHO 标准，其中高分化肝癌组织标本 11 例，中分化肝癌组织标本 15 例，低分化肝癌组织组织标本 7 例. 癌结节直径1.5 cm 者 7 个病灶，大于 1.5 cm 者26
4、 个病灶. 包膜完整 14 例、包膜欠完整和(或)无包膜 19 例，门脉癌栓形成 6 例、无门脉癌栓形成 27 例. 所有患者术前均行螺旋 CT 双期扫描，未化疗. 1.2 方法 1.2.1 螺旋 CT 检查所有患者术前均采用美国通用电器公司（GE) LightSpeed16 增强版型螺旋 CT 检查, 扫描时间 0.8 s，扫描条件 230 mA，120140 kV. 层厚间隔为 7.5 mm 或 10 mm，螺距为 1.375. 对比剂为碘普罗胺（300 g/L） ，按 2 mLkg，注射流率为 3 mL/s 经肘静脉注入采用高压自动注射器单相注射. 对每例 SHCC 全肝平扫后选择肿瘤所
5、在层面进行动脉期扫描(延迟时间 2030 s)和门脉期扫描(延迟时间6070 s). 1.2.2SHCC 螺旋 CT 供血分型由两位有经验的影像科医师行双盲法阅片，SHCC 动脉期和门脉期扫描结果根据文献1分为肝动脉供血型、 门静脉供血型、肝动脉和门静脉双重供血型及少供血型. 1.2.3 免疫组化标本经 40 g/L 甲醛液固定 ,石蜡包埋, 5 m 连续切片贴于经 APES 处理的载玻片. VEGF 兔抗人多克隆抗体购自福州迈新公司，采用免疫组化 SP 法进行 VEGF 染色. 所有免疫组化切片经 DAB 染色，苏木精轻微复染. 用已知阳性染色组织作为阳性染色对照，以 PBS 替代一抗作为阴
6、性对照. 对 VEGF 免疫组化染色结果判定： VEGF 主要在细胞质和细胞膜表达，阳性细胞显示棕黄色或棕褐色颗粒. 按阳性细胞数计分,10%为阴性(-)；10%为阳性(+)，其中 10%50%为阳性(+)，50%为强阳性(). 统计学处理： 所有数据经 SPSS11.0 统计软件分析处理. VEGF 表达水平与 SHCC 临床病理学特征之间的关系及与 SHCC 血供分型的关系采用KruskalWallis 检验及 Wilcoxon 检验,以 P0.05 为有统计学差异. 2 结果 2.1SHCC 螺旋 CT 双期扫描的血供分型 33 例 SHCC 组织中，肝动脉供血型 15 例，占 45.5
7、%；肝动脉和门静脉双重供血型 9 例，占 27.3%；门静脉供血型 5 例，占 15.2%；少供血型 4 例，占 12.1%. 2.2VEGF 表达水平与 SHCC 临床病理学特征的关系 6 例有门静脉癌栓形成的 SHCC 组织中 VEGF 表达阴性、阳性、强阳性者分别有 0 例、1 例、5 例，27 例无门静脉癌栓形成的 SHCC 组织中 VEGF 表达阴性、阳性、强阳性者分别有 7 例、11 例、9 例，有门静脉癌栓形成的 SHCC 组织中 VEGF 表达水平高于无门静脉癌栓者（P0.05）. VEGF 表达水平与肝癌组织学分级、肿瘤包膜形成和肿瘤大小无关（表 1）.表 1VEGF 表达水
8、平与 SHCC 临床病理学特征的关系（略） 2.3VEGF 表达水平与 SHCC 血供分型的关系 33 例 SHCC 组织中,VEGF 表达阳性者 12 例，强阳性者 14 例. 其中肝动脉供血型的 SHCC 组织中 VEGF 表达阳性、强阳性者分别占50.0%（6/12）和 64.3%（9/14） ；肝动脉和门静脉双重供血型分别占25%（3/12）和 28.6%（4/14） ；门静脉供血型，分别占 16.7%（2/12）和7.1%（1/14） ；少供血型分别占 8.3%（1/12）, 0%（0/14） ；肝动脉供血型的 SHCC 组织中 VEGF 表达水平高于门脉供血型(P0.05)或少血供
9、型小肝癌组织(P0.01, 表 2).表 2VEGF 表达水平与 SHCC 血供分型的关系（略） 3 讨论 20 世纪 70 年代初 Folkman 等提出了“肿瘤生长依赖于血管生成”这样一个概念. 近年来关于肿瘤的基础及临床研究证明：血管生成是癌细胞能否发展成为临床可测及的肿瘤、能否转移或导致宿主死亡的先决条件. 肿瘤由高分化向低分化演变生长过程分为血管前期和血管期两个阶段. 在血管前期由于肿瘤主要依赖周围组织的弥散来获取营养物质和排泄代谢物，明显抑制了肿瘤的持续生长；而在血管期，肿瘤组织中出现新生毛细血管并获得进一步生长的能力. VEGF 在血管期的肿瘤血管生成过程中起重要作用. 随着 S
10、HCC 肿瘤直径的增大或组织分化程度降低，瘤体快速侵袭性生长而肿瘤血管生成相对迟缓，局部缺氧使肿瘤细胞VEGF 表达增加导致肿瘤血管生成. 新血管生成后又加快肿瘤细胞生长，形成周而复始的恶性循环. 本研究发现，随着 SHCC 肿瘤直径的增大或分化程度的降低，SHCC 的 VEGF 表达水平增高,但无显著性差异. 由此推测：虽然 VEGF 是 SHCC 肿瘤血管生成所必需的，但其它血管生成因子也在SHCC 血管生成过程中发挥着重要作用. Poon 等2研究认为：血清VEGF 水平可作为人 HCC 血管浸润的预测指标. 而本组发现：有门静脉癌栓形成的 SHCC 组织中 VEGF 表达水平高于无癌栓
11、组(P0.05)，提示肝癌组织中 VEGF 水平与门静脉癌栓形成密切相关. 一方面门静脉癌栓形成可以影响 SHCC 组织血供使肿瘤组织缺氧，VEGF 表达水平增高，从而促使肿瘤血管生成增加，出现大量结构和功能异常的肿瘤血管.另外 VEGF 可以降低癌细胞的同质黏附性，使癌细胞更易发生分离、脱落进入血管，形成转移. Park 等3报道 VEGF 的表达水平与 HCC 组织中不成对动脉（无明显门静脉、胆管或结缔组织伴行的动脉，表示有血管生成）和CD34（CD34 染色是肝窦毛细血管化的标志之一）表达水平有关. 本组研究 VEGF 的表达水平与螺旋 CT 双期扫描血供分型有关，结果表明：VEGF在肝
12、动脉供血型 SHCC 组织中的表达水平最高，在肝动脉和门静脉双重供血型、门静脉供血型、少供血型依次降低. 其中肝动脉供血型与门脉供血型或少血供型 SHCC 组织之间有显著差异(P0.05). 同样说明了VEGF 在 SHCC 组织由门静脉血供向肝动脉化的转化过程中重要作用. 肝癌作为丰富血供的实体肿瘤,其发生、发展及转移主要依靠新生血管的血液供应,这是肝癌抗血管治疗的基础. 而 VEGF 在 SHCC 发展、转移及血供变化中起中起重要作用,提示它可以作为 SHCC 治疗的靶点. 【参考文献】 1黄娟，周翔平，刘荣波，等. 原发性肝癌血供特点的螺旋 CT表现及其与病理学特征相关性研究J.中华放射
13、学杂志，2000, 34（11）： 753-756. 2Pooh RT， Ho JW，Tong CS，el al. Prognostic significance of serum vascular endothelial growth factor and endostatin in patients with hepatocellular carcinomaJ Br J Surg，2004，91；1354-1360. 3Park YN, Kim YB, Yang KM, et al. Increased expression of vascular endothelial growth factor and angiogenesis in early stage of multistep hepatocarcinogenesisJ. Arch Pathol Lab Med, 2000, 124(7): 1061-1065.
