1、小鼠腹腔注射阿霉素的急毒实验及其对外周血的影响作者：何伟 秦绪军 海春旭 梁欣 张晓迪 赵康涛 陈宏莉 谷小刚 【关键词】 阿霉素 关键词: 阿霉素;毒性试验;LD50 ;外周血 摘 要:目的 测定雄性小鼠 ip 阿霉素（ADM）急毒 LD50 及对外周血影响的剂量效应关系. 方法 昆明种小鼠随机分成 8 组，阴性对照组和ADM7 个不同剂量组，除阴性对照组外，其余依次经ip1.25，2.50，5.00，10.00，15.00，20.00 和 40.00mgkg-1 7个不同剂量的 ADM，阴性对照组给予对应剂量的生理盐水，观察动物给药后 10d 内的生存情况. 结果 ADM 的 7 个剂量组
2、动物的死亡率随 ADM 的剂量由低到高依次是 0，0，0，20%，70%，90%和 100%.ADM 可引起外周血除红细胞分布活力（RDW） 、平均血小板体积（MPV）和淋巴细胞百分比（LYM）外几乎所有的指标降低，红细胞（RBC） 、白细胞（WBC） 、血小板（PLT）3 种血液成分降低显著（P0.05） ，并随 ADM 剂量的增加而愈发明显. 结论 雄性昆明种小鼠 ADM ip LD50 为 13.2mgkg-1 ，其 95%可信限范围为 10.616.4mgkg-1 .ADM 毒性导致的血液3 种成分数量及相关功能的下降呈剂量效应关系. Keywords:adriamycin;toxic
3、ity tests;LD50 ;peripheral blood Abstract:AIM To investigate adriamycins acute toxicity in mice through ip and its effect on the peripheral blood.METHODS The animals were randomly divided into eight groups which were negative control group and seven adri-amycin（ADM）groups.The seven ADM groups were g
4、iven ADM through ip at the dosage of1.25，2.50，5.00，10.00，15.00，20.00and40.00mgkg-1 respectively，then we ob-served the survival status in the following ten days.RESULTS The animals death rates in different ADM groups were0，0，0，20%，70%，90%and100%sequentially from the low dosage to high.Except RDW，MPV
5、and LYM pa-rameters，ADM could induce almost every parameter，espe-cially the RBC，WBC and PLT，to decrease significantly，which was more clear with the increasing of ADM dosage.CONCLUSION LD50 of ADM ip in male Kunming mice is13.2mgkg-1 ，with95%confidence interval of10.616.4mgkg-1 .ADM induces all kinds
6、 of blood cells to decrease significantly. 0 引言 阿霉素（adriamycin，ADM）抗瘤谱广、作用强.但有心肌毒性，临床使用受到一定限制.ADM 能否经 ip 给药，ip 的主要副作如何，能否得到消除等均未见文献报道，因而限制了对腹腔及消化道肿瘤治疗的疗效，我们探讨了经 ip 给药的急性毒性试验对外周血的影响如下. 1 材料和方法 1.1 材料 注射用盐酸阿霉素（10mg/支） ，汕头经济特区明治医药有限公司产.ADVIA-60 型全自动血球分析仪，德国拜尔公司生产.二级健康雄性昆明种小鼠 80 只，体质量（263）g，由第四军医大学实验动物中
7、心提供. 1.2 方法 将动物随机分成 8 组，每组 10 只，包括 1 个阴性对照组（A 组）和 7 个不同剂量的 ADM 组（依次为 B，C，D，E，F，G 和 H 组）.将 ADM 用生理盐水稀释成 0.0625，0.125，0.25，0.50，0.75，1.00 和2.00gL-1 7 种浓度，对 ADM 各组小鼠按体质量20Lg-1 的比例 ip，即得到经 ip 给药剂量依次为1.25，2.50，5.00，10.00，15.00，20.00 和 40.00mgkg-1 的7 组不同剂量的 ADM 给药组.阴性对照组给予对应剂量的生理盐水.动物自由摄水饮食，观察动物的生命活动及死亡情况
8、.给药后 10d 将存活的小鼠宰杀，取其全血测定其外周血的各项指标的变化.采用改良寇氏法1 求 ADM 的 LD50 ，并计算其 95%可信限. 统计学处理:结果由统计软件 SPSS（windows10.0 版）oneway ANOVA中的 LSD 统计分析. 2 结果 2.1 动物体质量变化及死情况 给药后 3，4d 时 ADM 各组动物出现懒惰、嗜睡、厌食，立毛现象明显，个别出现粘液便，随 ADM 剂量增加而逐渐加重、动物死亡数增加.给药 10d 后小鼠的体质量变化随着 ADM 的剂量的增加依次递减，分别为（7.43.1） ， （6.21.5） ， （6.61.5） ，（4.21.5）a
9、， （0.32.6）a 和（-3.52.6）a （mgkg-1 ） （a P0.05vs A 阴性对照组，最高剂量 G 组只剩 1 只，H 组全部死亡，已无法计算体质量变化）.死亡率依次为 0，0，0，0，20%，70%，90%和100%.经计算 LD50 为 13.2mgkg-1 ，其 95%可信限范围为10.616.4mgkg-1 . 表 1 阿霉素对 WBC，RBC，HCT 和 Hb 的影响 略 2.2 ADM 对外周血的影响 最高剂量的 F，G 和 H3 个阿霉素用药组动物大多数死亡无统计学意义，本实验仅对 A（对照组） ，B，C，D 和 E5 组各指标作一比较分析.与阴性对照组相比，
10、阿霉素可以引起用药组动物外周血的白细胞（WBC） 、红细胞（RBC） 、血小板（PLT）和血红蛋白（Hb）的数量的降低，并且随着阿霉素剂量的增高而愈发显著（P0.05，Tab1） ，红细胞压积（HCT）也呈现出相同的变化趋势（P0.05，Tab1）.阿霉素可以引起外周血红细胞分布活力（RDW）和平均血小板体积（MPV）升高（P 0.05） ，血小板分布活力（PDW）下降（P0.05，Tab2） ，并随 ADM 剂量的变化而显示出明确的剂量效应关系.阿霉素白细胞的影响亦较大，它不仅引起各类白细胞的比例的变化，淋巴细胞的比例显著上升，单核细胞和粒细胞的比例下降（P0.05，Tab3） ，而且引起各
11、类白细胞的绝对数量降低，并且这种趋势随着阿霉素用药剂量的加大而加重. 表 2 阿霉素对 PLT，RDW，MPV 的影响 略 表 3 阿霉素对 LYM，MON 和 GRA 的影响 略 3 讨论 ADM ip 有很强的毒性，动物随着 ADM 剂量的增加，体质量增长速度逐渐降低，甚至出现负增长，显示出毒性作用逐渐增强.ADM 经 ip 其毒性因吸收缓慢形成略显延迟的毒性作用，使动物的毒性发作高峰并不在给药后的 24h 内，而随剂量的不同而均有一定的延迟.ADM 对骨髓有一定的抑制作用，积累量大时可致心肌损害或心力衰竭2 .但对造血的急性作用影响报道不多.我们研究表明，急性的 ADM 损伤可以引起外周
12、血各项指标的明显变化.WBC，RBC 和 PLT 较阴性对照组都显著降低（P0.05） ，并随 ADM 剂量增加而下降的趋势明显，HCT 和 Hb 亦显著降低（P0.05）.ADM 损伤引起白细胞的数量减少，而其中淋巴细胞、单核细胞和中性粒细胞的数量都急剧减少（P0.05） ，但三者各自占白细胞总数的比例的变化却略有不同，其中单核细胞（Mon）和中性粒细胞（Gra）所占比例随着 ADM 的剂量增加而显著下降，而淋巴细胞则相反，即上升（P0.05） ，提示随着 ADM 剂量的增加而导致的损伤主要是 Mon和 Gra.此外，ADM 损伤还可以导致红细胞分布活力（RDW）和平均血小板体积（MPV）升
13、高（P0.05） ，血小板分布活力（PDW）下降（P0.05） ，并随 ADM 剂量的变化而显示出明确的剂量效应关系.这也提示 ADM 化疗引起患者急性毒性作用是由于 ADM 毒性导致的三种血液中主要成分数量及相关功能的下降所致，防治化疗副作用的损伤，不仅仅要保护白细胞，而且应全面保护血液的各类成分的数量、状态和功能.有文献报道，ADM 的心脏毒性与自由基损伤有关3 ，但对外周血损伤是否也是由于自由基损伤所致，值得进一步探讨. 参考文献: 1Zhang X，Liu YG.Toxicology M.Beijing:the Beijing Medi-cal University and Chine
14、se Xiehe Medical University United Publication House，1997:217-231. 2Ogura M.Adriamycin（doxorubicin ） J.Gan To Kagaku Ry-oho，2001;28（10）:1331-1338. 3Nagi MN，Mansour MA.Protective effect of thymoquinone a-gainst doxorubicin-induced cardiotoxicity in rats:A possible mechanism of protection J.Pharmacol Res，2000;41（3）:283-289.
