1、眼睑基底细胞癌组织中 Survivin 的表达及统计分析【摘要】 目的：探讨眼睑基底细胞癌组织中 Survivin 的表达。方法:收集武汉市中心医院和武汉大学中南医院病理科 20022009 年手术切除及活检的眼睑基底细胞癌( basalcell carcinoma,BCC)标本共 20 例，另取癌周围正常组织 5 例作对照。将眼睑基底细胞癌和正常组做免疫组织化学染色，观察各组细胞内 Survivin 的表达。采用 HPIAS2000 高清晰度彩色病理图文报告管理系统对 Survivin 在各组中的表达进行定量分析。结果：眼睑基底细胞癌组织中 Survivin 呈高表达，癌旁组织中 Survi
2、vin呈低表达。图像分析结果显示眼睑基底细胞组织与癌旁组织之间Survivin 的平均光密度及阳性面积率的差异有显著性(P0.01)。结论：Survivin 在眼睑基底细胞癌中的异常表达，对眼睑基底细胞癌的发生发展起了重要作用。 【关键词】 眼睑; 基底细胞癌; Survivin; 统计分析眼睑基底细胞癌(basalcell carcinoma,BCC)是最常见的眼睑恶性肿瘤，约占眼睑恶性上皮性肿瘤的 85%95%1。研究显示多种癌基因的异常表达在眼睑 BCC 的发生发展过程中有重要作用，研究癌相关基因抗原在 BCC 发生、发展及转移机制中的作用，对于揭示 BCC 的生物学行为及探索有效的防治
3、方法有重要意义。1 材料与方法1.1 材料1.1.1 标本来源 收集武汉市中心医院和武汉大学中南医院病理科 2002 2009 年手术切除及活检的眼睑基底细胞癌( basalcell carcinoma,BCC)标本共 20 例，另取癌周围正常组织 5 例作对照。所有标本均经 10%甲醛固定, 常规 HE 染色，光镜观察，病理检查确诊。1.1.2 主要试剂 即用型鼠抗人 Survivin 单克隆抗体(北京中山生物技术有限公司);超敏即用型 SP 通用型免疫组织化学试剂盒(福州迈新生物有限公司);DAB 显色试盒及多聚赖氨酸(北京中山生物技术有限公司)。1.1.3 主要仪器 YWY781 型医用
4、微波仪，250W，50Hz，浙江临安电子器材厂生产;家用高压锅。1.2 方法1.2.1 常规 HE 染色 取材、固定、脱水、透明、切片和 HE 染色。1.2.2 免疫组织化学 SP 法检测 Survivin 抗原 主要步骤： 4m 组织切片常规脱蜡至水后，0.01M PBS(pH 7.4)漂洗 33 min; 抗原修复(柠檬酸缓冲液微波抗原修复法)，室温自然冷却后，0.01M PBS(pH 7.4)漂洗 53 min; 滴加 3%过氧化氢，37湿盒孵育 10min以抑制内源性过氧化物酶活性，0.01M PBS(pH 7.4)漂洗 33 min;正常羊血清 37湿盒孵育 10min 以减少非特异
5、性背景; 甩去多余血清，分别滴加一抗，4孵育过夜，0.01M PBS(pH 7.4)漂洗 35 min; 滴加生物素标记的二抗 37湿盒孵育 10min，0.01M PBS(Pp 7.4)漂洗 33 min; 滴加链霉素抗生物素蛋白-过氧化物复合物 37湿盒孵育10min，0.01M PBS(pH 7.4)漂洗 33 min; 滴加新鲜配置的 DAB 显色液显色，光镜下控制反应时间(约 35 min)，自来水冲洗终止反应; 苏木素复染，流水冲洗，1%盐酸酒精分色数秒，流水冲洗，0.1%氨水返蓝; 梯度酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶封片并镜检;用 PBS 代替一抗作为阴性对照。1.3 免疫组织化
6、学结果判断Survivin 抗原以细胞浆或胞核出现棕黄色颗粒为阳性反应。阴性对照除细胞核染成蓝色外，细胞浆或胞核内无棕黄色反应物。采用 HPIAS2000 高清晰度彩色病理图文报告管理系统(同济千屏影像公司)对细胞浆或胞核的表达进行定量分析，每张切片随机选取 5 个完整而不重叠的高倍镜视野(400)，测定每个视野下阳性反应的平均光密度、阳性反应面积和所有细胞总面积，计算阳性面积率(阳性面积率=单位面积中阳性反应的总面积/单位面积中细胞的总面积100%)。以每例 5 个视野的平均光密度、阳性面积率的平均值作为该例的测量值。1.4 统计学处理数据以均数标准差表示，用 SPSS11. 5 软件对各组
7、免疫组织化学反应阳性颗粒的平均光密度、阳性面积率做单因素方差分析和 SNK(q) 检验，检验水准 为 0.05。2 结果2.1 HE 染色瘤体由基底样细胞组成，细胞核大，呈圆形或椭圆形，胞浆为嗜碱性，可见少量核分裂相。瘤体周边细胞呈栅栏状排列。肿瘤周围结缔组织增生，有较多纤维母细胞，产生胶原纤维包绕在瘤体周围。2.2 Survivin 的表达基底细胞癌组织中可见癌细胞胞浆内棕黄色颗粒较多，Survivin表达呈阳性;癌旁组织的细胞胞浆内可见极少量的棕黄色颗粒，Survivin表达呈阴性。图像分析结果显示：眼睑基底细胞癌 Survivin 表达的平均光密度为 0.38530.0254，癌旁组织
8、Survivin 表达的平均光密度为0.0246 0.0029; 眼睑基底细胞癌 Survivin 表达的阳性面积率为0.35200.0263;癌旁组织中 Survivin 表达的阳性面积率为0.03050.0021。经单因素方差分析，组间有显著性差异(P0.01。经 q 检验，眼睑基底细胞癌与癌旁组织之间，Survivin 的平均光密度及阳性面积率有显著性差异(P0.01见表。表 1 基底细胞癌与癌旁组织 Survivin 表达的平均光密度和阳性面积率3 讨论基底细胞癌是眼睑最常见恶性肿瘤，常发生于长期暴露于阳光下的中年以上的人群，男性略多，好发于下睑及内眦，病变位置表浅， BCC 是生长缓
9、慢的肿瘤,病程一般较长, 最长可达 20 年。BCC 一般只局部侵袭, 很少转移, 但若不及时治疗, 肿瘤可侵及眼轮匝肌、睑板和眶骨, 并可经眼眶向颅内侵犯。近年来随着人口的高龄化, BCC 有逐渐增多的趋势2，3。人 Survivin 基因位于 17 号染色体端粒部位,基因总长度 14. 7KB,包含 4 个外显子和 3 个内含子。Survivin 作为 IAP 家族中最小的 1 个新成员,结构独特。它只含有 1 个 B IR 结构,该结构被认为是 Survivin 发挥抗凋亡作用的部位57。目前普遍接受的观点是, Survivin 作用于各个凋亡途径的汇集点: 直接抑制终末效应蛋白casp
10、ase9 、caspase3 和 caspase7 。最新发现 Smac 分子是与细胞色素 C 同时从线粒体释放出来的具有拮抗 IAP 作用的蛋白小分子, 它是通过其 NH2 末端与 IAP 分子结合而抑制后者的功能。受 Smac 分子作用的启发,大量的工作致力于发现能与 IAP 结合的非肽类小分子化学物质,这些小分子能够通过模拟 Smac 分子的作用而诱导肿瘤细胞凋亡810。Survivin 是凋亡抑制蛋白家族的新成员，Survivin 具有肿瘤特异性，只表达于肿瘤和胚胎组织，且与肿瘤细胞的分化增殖及浸润转移密切相关11。现已发现，Survivin 在所有常见恶性肿瘤中表达，如乳腺癌、胃癌、
11、肾癌、黑色素癌、肠癌、神经母细胞癌和卵巢癌等，而在正常组中无表达。它的这一特性，使得靶向 Survivin 的免疫治疗和基因治疗能够促进肿瘤细胞的凋亡，抑制其增殖，正常组织却能不受损伤和影响。Survivin 可以作为抗肿瘤免疫治疗的一个广泛适用的靶基因1215。实验采用免疫组织化学方法观察了 Survivin 在眼睑基底细胞癌组织和癌旁组织中的表达，实验表明眼睑基底细胞癌与癌旁组织之间，Survivin 的平均光密度及阳性面积率有显著性差异(P0.01，Survivin 做为新的抗凋亡基因与肿瘤细胞的增殖与血管生成密切相关。目前，关于 Survivin 在肿瘤中的研究已经取得了一定的进展，但
12、是还有不少方面需要更深入地进一步研究。如 Survivin 与肿瘤发生发展及其临床预后的相关性，Survivin 在细胞浆和细胞核中的表达受到何种调节，Survivin 的各种异构体之间的关系及作用，以及 Survivin 在肿瘤靶向治疗中的作用等都需要我们去探究。【参考文献】1 李凤鸣.中华眼科学上册.人民卫生出版社 ，2005，880881.2 Allali J,DHermies F,Renard G.Basal cell carcinomas of the eyelids. Ophthalmologica, 2005，219(2):5771.3 Dazard JE,Gal H,Amari
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