1、血小板衍生生长因子受体在膀胱癌中的表达意义【关键词】 膀胱肿瘤 关键词 :膀胱肿瘤;受体，血小板源生长因子;新生血管化，病理性;免疫组织化学 摘 要:目的 探讨血小板衍生生长因子受体（PDGFR）表达与膀胱移行上皮细胞癌发生、生物学行为及预后的关系. 方法 采用免疫组织化学技术两步法检测 68 例膀胱移行细胞癌和 10 例正常膀胱组织 PDGFR表达及膀胱癌组织中微血管密度（MVD）. 结果 PDGFR 阳性染色分布于癌细胞、间质、血管及炎症细胞的胞质及胞膜.膀胱癌组织 PDGFR 阳性率为 83.8%，明显高于正常膀胱组织（30.0%，P0.01） ，膀胱癌组织中PDGFR 阳性表达组的微血
2、管密度（MVD）明显高于 PDGFR 阴性表达组（8530vs3615，P0.01）. 结论 PDGFR 表达与正常膀胱组织生长有关，过度表达与癌的形成、血管的形成及炎症细胞功能相关，未发现 PDGFR 表达与肿瘤分期、分级及预后相关. Keywords:bladder neoplasms;receptors，platelet-dervied growth factor;neovascularization，pathologic;im-munohistochemistry Abstract:AIM To study the relationship between expres-sion of
3、 platelet-derived growth factor receptor（PDGFR）and the genesis，biological behavior and prognosis of bladder transitional cell carcinoma.METHODS Expression of PDGFR and microvessel density（MVD）were investigated in68cases of transitional cell carcinoma in bladder and10cases of normal bladder tissues w
4、ith immunohistochemical technique according to the procedures of classical two-steps.RESULTS It was revealed that the PDGFR positive staining rate in tumor tissues（83.8%，57/68）was significantly higher（P0.01）than that in normal tissues（30%，3/10）;the pos-itive staining was confined to the cytoplasms a
5、nd membranes of epithelial，interstitial，vascular smooth muscle and inflam-matory cells.MVD was higher in the positive expression of PDGFR than in the negative patients（8530vs3615，P0.01）.CONCLUSION Expression of PDGFR is related to the growth of the normal bladder tissues，but the increased expression
6、 of PDGFR is associated with malignant transfor-mation and development of bladder carcinoma，angiogenesis in the bladder cancer and the function of inflammatory cells.There might be no significant correlation between expression of PDGFR and tumor grade，stage and prognosis. 0 引言 血小板衍生生长因子（PDGF）是细胞生存微环
7、境中的重要一员1-3 .研究表明，其受体（PDGFR）表达失调可导致细胞增殖及恶变4-7 .PDGFR 在膀胱肿瘤表达的研究较少且关系尚未明确.我们采用免疫组织化学技术两步法，在检测膀胱移行上皮细胞癌组织中 PDGFR 表达的同时用 VWF 一抗检测肿瘤的微血管密度（MVD） ，探讨 PDGFR 表达与膀胱移行细胞癌发生、生物学行为及预后的关系. 1 材料和方法 1.1 材料 1988/1993 我院经病理证实的膀胱移行细胞癌石蜡包埋标本 68 例，均有完整的 5a 随访资料.其中男 49 例，女 19 例，年龄 2582（平均60.2）岁.临床病理与分期按 UICC 标准:TisT1 36
8、例，T2 T 4 32 例.按WHO 肿瘤分级:级 16 例，级 29 例;级 23 例;复发、死亡 43 例（死亡 26 例，17 例复发存活）.另取 10 例正常膀胱组织作对照.常规切片厚度 4m.兔抗人 PDGFR 多克隆抗体由 Santa Cruz 公司提供，工作浓度1100.鼠抗人 VWF mAb 由 Dako 公司提供，工作浓度 1200.抗兔、鼠二抗（Dako Envision TM +system，HRP R ）由 Dako 公司提供. 1.2 方法 用免疫组织化学两步法.作 4m 厚连续组织切片 4 张，分别做PDGFR，VWF 免疫组化，空白对照和 HE 染色.常规脱蜡至水
9、，30mLL-1 H2 O2 封闭 30min，1gL-1 胰蛋白酶消化30min，滴加一抗 4过夜，37孵育 1h，PBS 液震洗后滴加二抗并 37孵育 30min，DAB 显色，苏木素复染、脱水、二甲苯透明，封固阅片.用已知阳性的肾细胞癌切片作阳性对照，用 PBS 液代替一抗做空白对照.PDGFR 表达的判定:细胞着黄色或棕黄色呈颗粒或线网状为阳性细胞.在400 倍视野下每张切片随机观察 10 个视野，将切片中平均阳性细胞比例及染色深浅分别记 03 分.切片中无阳性细胞为 0 分，阳性细胞占总细胞数25%记 1 分，25%50%记 2 分，50%记 3 分;染色深度以多数细胞为准，无阳性细
10、胞记 0 分，显色为黄色记 1 分，显色棕黄色记 2分，显色棕褐色记 3 分;再按这两项指标的总积分将结果分成 4 级:0 分为-，12 分为+，34 分为，56 分为，其中，为强阳性表达. 微血管密度的计数:按 Weidner 法8 在低倍镜下找到肿瘤组织的微血管区（呈阳性染色的内皮细胞） ，再在高倍镜（2010）观察单位面积癌组织的微血管数量，以 5 个高倍视野微血管数的均数表示. 统计学处理:结果采用 2 检验，t 检验及 Spear-man 秩相关分析. 2 结果 2.1 PDGFR 阳性染色分布及染色结果 细胞呈棕黄色颗粒状或线网状阳性染色分布于胞质、胞膜（Fig1）.膀胱癌组中癌细
11、胞、血管平滑肌、间质细胞及部分炎症细胞均有阳性细胞染色.正常膀胱组织中阳性染色多见于上皮细胞，其次为血管平滑肌细胞.膀胱癌组的 PDGFR 染色阳性率及强阳性率均明显高于正常膀胱组（P0.01 和 P0.05，Tab1）.表 1 膀胱癌组织中 PDGFR 染色结果（略） 2.2 肿瘤分期分级与 PDGFR 表达的关系 PDGFR 阳性染色与膀胱癌分期、分级间无相关，即癌组织中 PDGFR 表达并不随着肿瘤的分期、分级递增而递增（Tab2）.表 2 膀胱癌分期分级与 PDGFR 表达的关系（略） 2.3 PDGFR 表达与肿瘤微血管密度及膀胱癌预后的关系 PDGFR 表达与膀胱肿瘤组织 MVD
12、之间相关，即 PDGFR 阳性表达组肿瘤组织 MVD（8530，n=57）明显高于 PDGFR 阴性表达组（3615，n=11，P0.01）.膀胱移行上皮细胞癌 68 例中，PDGFR 表达阳性 57 例，阴性 11 例，生存满 5a 者分别为 32，6 例，两组 5a 生存率无显著差异.PDGFR 强阳性表达 34 例，弱表达或不表达 34 例，生存满5a 者分别为 20，18 例，两组 5a 生存率亦无显著性差异. 3 讨论 血小板衍生生长因子（PDGF）可来源于血小板、巨噬细胞、成纤维细胞等细胞，是重要的间叶组织细胞生长调节因子，与其受体结合后可激活与细胞增殖有关的酶及基因，并可调节细胞
13、外基质的合成及分解9-11 .Fudge 等12 观察到 PDGF-A 链及 PDGFR- 表达于前列腺癌上皮、基质细胞.Alpers 等13 亦发现 PDGFR 可表达于 Wilms 肿瘤的上皮细胞.PDGF 系统可调节多种正常组织的生长发育14-17 .我们发现正常膀胱组织有 30%具有 PDGFR 表达，提示 PDGF 系统可调控正常组织的生长及功能的维持.我们同时发现 PDGFR 表达于正常移行上皮细胞、膀胱癌细胞、血管平滑肌细胞及其他一些间质细胞，表明 PDGF 可调控膀胱组织多种细胞的生长及增殖.目前的研究发现 PDGFR 高表达与多种肿瘤生成密切相关.Sitaras 等18 发现
14、体外培养前列腺癌细胞株可以分泌PDGF，表达 PDGFR.Michel 等19 亦发现人类前列腺细胞恶性增殖受PDGF 调节.Fudge 等12 观察到 PDGF 及其受体的抗体可标记于前列腺癌细胞.Coltrera 等20 和 Fudge 等12 检测到某些癌变组织中PDGFR 表达明显高于相应的正常组织，并认为与癌变过程有关.我们的检测结果表明，膀胱癌组织 PDGFR 阳性表达率为 83.8%，明显高于正常膀胱组织，提示 PDGFR 过度表达与膀胱癌的形成密切相关.PDGFR 过度表达，可能受炎症细胞浸润释放细胞因子，其他生长因子的相互作用、致癌因素的作用、组织三维结构改变以及胞外基质成分
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