1、乙酰肝素酶和基质金属蛋白酶 2 在胰腺癌组织表达及其与神经浸润的关系【摘要】 目的 探讨乙酰肝素酶（HPSE）和基质金属蛋白酶2 （MMP2 ）在胰腺癌中的表达及其与神经浸润的关系。方法 采用免疫组织化学双标技术检测 47 例胰腺癌组织及 10 例正常胰腺组织中 HPSE和 MMP2 的表达，观察 HPSE、MMP2 的阳性表达率与神经浸润的关系。结果 胰腺癌组织中 HPSE 及 MMP2 的阳性表达率分别为 59.57%和 65.96%，明显高于正常胰腺组织（20.80和 25.00） ，差异有显著意义（2=9.59、8.56,P0.05） 。HPSE 和 MMP2 阳性表达率在有神经浸润的
2、胰腺癌组织中分别为 72.41%和 86.21，均高于无神经浸润者（38.89%和 33.33） ，差异有显著性（2=5.183、13.828，P0.05） 。结论 HPSE 和 MMP2 在胰腺癌神经浸润过程中发挥重要作用，其检测可作为反映胰腺癌生物学行为的重要指标。 【关键词】 胰腺肿瘤 乙酰肝素酶 明胶酶 A 神经浸润 免疫组织化学 ABSTRACTObjectiveTo investigate the expressions of heparanase and MMP2 in pancreatic carcinoma and their relationship with perine
3、ural invasion. Methods Immunohistochemical doublestainning technique was used to detect the expressions of heparanase and MMP2 in 47 cases of pancreatic carcinoma and 10 cases of normal pancreatic tissues. The relationship between the positive expressions of heparanase and MMP2 and perineural invasi
4、on were analysed. ResultsThe positive expression rates of heparanase and MMP2 in the cancer tissues were 59.57% and 65.96%,respectively, which were significantly higher than that of the normal pancreatic tissues (20.80 and 25.00)，(2=9.59,8.56；P0.05). The positive heparanase and MMP2 in the cancer ti
5、ssue with perineural invasion were 72.41% and 86.21, respectively，which were significantly higher than that of the cancer tissue without perineural invasion （38.89% and 33.33）（2=5.183,13.828；P0.05）. ConclusionHeparanase and MMP2 play an important role in the process of perineural invasion in pancrea
6、tic carcinoma. Their detection can be used a significant marker to reflect the biological behavior of the disease. KEY WORDSpancreatic neoplasms; heparanase; gelatinase A; perineural invasion; immunohistochemistry 胰腺癌病人发生胰周神经浸润的比例可高达 53.5%100.0%1,2 。神经浸润不仅是胰腺癌的独立预后指标，而且与术后的腹膜后肿瘤复发有密切关系。尽管对胰腺癌神经浸润发生机
7、制已做了较多研究，但其确切分子机制仍不清楚。本文采用免疫组化双标技术检测正常胰腺和胰腺癌组织中乙酰肝素酶（HPSE）及基质金属蛋白酶2 （MMP2 ）的表达，并用 S100 标记神经纤维，探讨 HPSE 及 MMP2 的表达与胰腺癌神经浸润的关系。 1 材料与方法 11 材料来源 收集青岛大学医学院附属医院 2002 年 1 月2005 年 12 月手术切除胰腺癌标本 47 例，每例均有详细的临床资料及手术记录。术前均未接受化疗和放疗。其中男 29 例，女 18 例，年龄 2775 岁，平均 56.7 岁。按 CT 显示肿瘤直径分 3 组：2 cm 组 5 例， 24 cm 组 14 例,4
8、cm组 28 例。病理学类型均为浸润型导管癌。按 Bloom 评分标准的组织学分级：级（高分化）10 例，级（中分化）16 例，级（低分化）21 例。47 例胰腺癌中有神经浸润者 29 例，无浸润者 18 例。另取 10 例正常胰腺组织作为对照。 12 试剂与方法 所有标本均经 40 g/L 甲醛溶液固定，常规石蜡包埋，4 厚连续切片，分别做苏木精 伊红染色及 免疫组化双标技术染色。具体操作按试剂盒说明书进行。每次染色均设对照作为染色质量控制标准，阳性对照采用已知的阳性乳癌组织切片，阴性对照采用 PBS 代替一抗。所有试剂均购自北京中杉金桥生物技术有限公司。 13 阳性结果判断 HPSE 和
9、MMP2 阳性染色为细胞质内表达呈棕黄色颗粒。每张切片在400 倍显微镜下选定 10 个视野，计算阳性细胞的百分数。表达强度判定：胞浆染色阳性的细胞百分率5%为（） ，5%24%为(+)，25%50%为() ，50%为() 。神经纤维阳性染色为紫蓝色。 14 统计学分析 采用 2 检验进行统计学分析，所有数据统计均在 SPSS 软件上进行。2 结 果 21 HPSE 和 MMP2 在胰腺癌及正常胰腺组织中的表达 47 例胰腺癌组织中 HPSE 和 MMP2 阳性表达率分别为 59.57%和65.96%，大多数为（ ）表达。而 10 例正常胰腺组织 HPSE 和MMP2 阳性表达率为 20.80
10、和 25.00，多为(+) 表达，主要见于胰腺腺泡细胞及胰岛细胞。HPSE 和 MMP2 在胰腺癌组织中的阳性表达率明显高于正常胰腺组织（2=9.59、8.56,P0.05） 。胰腺癌间质中反应性纤维母细胞及血管内皮细胞也表达 HPSE 和 MMP2 。包绕神经纤维并进入神经束膜内的癌组织 HPSE 和 MMP2 的表达强度明显高于周围癌组织（图 1、2） 。 22 HPSE 和 MMP2 表达与神经浸润的关系 HPSE 和 MMP2 阳性表达率在有神经浸润的胰腺癌组织中分别为72.41%和 86.21，无神经浸润者分别为 38.89%和 33.33，其差异有显著意义（2=5.183、13.8
11、28,P0.05） 。 3 讨 论 神经浸润是指肿瘤细胞包绕神经纤维并进入神经束膜内沿其扩散的现象，被认为是导致肿瘤局部复发、转移和预后不良的极为重要的因素3,4 。胰腺癌发生神经浸润的比例高达 53.5%100.0%，而在腹膜后残癌复发的病例中大多数是因神经浸润灶的残留所致。TAKUKAZU 等5报道 85的病例腹膜后组织可有浸润，而其中又有 72发生神经浸润。ALBONESSAVEDRA 等6假设神经浸润有两种途径：癌细胞沿阻力较小的神经周围间隙生长；细胞分泌某种因子促进神经干向癌组织内延伸。但迄今为止，胰腺癌的神经浸润和转移的确切机制尚未完全清楚，可能有多种因子参与此过程。 在发生神经浸
12、润的过程中，细胞外基质和基底膜的降解是恶性肿瘤浸润与转移的前提。在参与破坏 ECM 的酶中，HPSE 和基质金属蛋白酶(MMPs)与肿瘤侵袭、转移的关系最为密切。HPSE 是体内唯一可降解乙酰肝素的内源性酶，主要通过降解细胞外基质和血管基底膜、促使乙酰肝素释放和活化肝素结合型的生长因子、诱导血管生成和促进释放尿激酶型纤溶酶原激活物及组织型纤溶酶原激活物等方式促进癌细胞的侵袭和转移，其表达水平的升高与肿瘤的浸润和转移能力密切相关7 。WALCH等8对前列腺癌的实验结果也表明，神经营养因子 可诱导 HPSE 的合成，进而诱导肿瘤细胞穿透神经细胞的基底膜，促使瘤细胞沿神经浸润。MMPs 是一组锌依赖
13、性蛋白酶,可降解基底膜和细胞外基质的大多数蛋白质，其中 MMP2 可通过降解基底膜的主要成分型胶原、层粘连蛋白等成分，破坏基底膜结果的完整性，从而在肿瘤的侵袭和转移中起关键作用9 。关于 HPSE 和 MMP2 在胰腺癌组织中的表达及其与神经浸润关系的研究较少。KOLIOPANOS 等10报道，胰腺癌组织中 HPSE 的 mRNA 含量为正常组织的 30.2 倍，它的表达与术后生存率之间有着明显的负相关性，而离体培养的胰腺癌细胞经全长 HPSE 转染后，其侵袭性明显增高。BRAMHALL 等11采用 Northern 印迹分析技术显示，93%的胰腺癌组织中 MMP2 mRNA 水平异常增高，且
14、阳性率与肿瘤浸润和转移相关。本研究应用免疫组化双标技术检测 HPSE 和 MMP2 在胰腺癌及正常胰腺组织中的表达及其与神经浸润的关系，显示正常胰腺组织中只有少量腺泡上皮及胰岛细胞出现 HPSE 和 MMP2 表达，胰腺癌组织中 HPSE 和 MMP2表达阳性率明显高于正常胰腺组织，并且有神经浸润的胰腺癌组织明显高于无浸润者，其差异有显著性。同时本研究还显示，胰腺癌间质中反应性纤维母细胞及血管内皮细胞也表达 HPSE 和 MMP2 ；包绕神经纤维并进入神经束膜内的癌组织 HPSE 和 MMP2 的表达强度明显高于周围癌组织。本文研究结果提示，胰腺癌细胞可通过自分泌和旁分泌 HPSE 和MMP2
15、 ，降解基底膜及神经束膜，增加其侵袭及转移能力。因此，HPSE和 MMP2 在胰腺癌的神经浸润中发挥重要作用，可作为判断胰腺癌生物学行为和预后的有用指标。 【参考文献】 1 KAYAHARA M, NAGAKAWA T, KONISHI I, et al. Clinicopathological study of pancreatic carcinoma with particular reference to the invasion of the extrapancreatic neural plexusJ. Lnt J Pancreatol, 1991,10(2):105111. 2NA
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