1、转化生长因子 1 在胆管癌组织中的表达及意义作者：张建余 胡宗玲 张炳远 李玉军 【关键词】 胆管肿瘤；转化生长因子 1；免疫组织化学, 【摘要】 目的 研究转化生长因子 1（TGF1）在胆管癌组织中的表达，探讨它与胆管癌生物学行为及预后的关系。方法 应用免疫组织化学 SP 法检测 47 例胆管癌及癌旁正常胆管组织中 TGF1 的表达，分析其表达与胆管癌临床病理特征的关系，结果进行统计学处理。结果 TGF1 阳性表达主要定位于胆管癌细胞胞浆，偶有胞膜、胞核着色。47例胆管癌组织中 TGF1 阳性表达 36 例(766%)，较癌旁正常胆管组织高（P0001） 。TGF1 表达与胆管癌临床分期及是
2、否有淋巴结、肝转移有关（P001，005，005） ，与组织学分级无关（P005） 。结论 TGF1 可能参与了胆管癌的发生、发展。随着胆管癌临床分期的增高而TGF1 表达增高，其基因缺失可能是胆管癌细胞侵袭性生长转移的重要分子机制，检测 TGF1 表达有助于判断胆管癌的恶性程度及预后。 【关键词】 胆管肿瘤；转化生长因子 1；免疫组织化学 【Abstract】 Objective To study the expression of TGF1 in cholangiocarcinoma tissues and its biological behavior.Methods TGF1 was
3、detected by immunohistochemical methods in 47 paraffinembedded specimens of cholangiocarcinoma and the control tissues near to the tumor. Results Expression of TGF1 was significantly higher in cholangiocarcinoma than that of control tissues near to the tumor(P0001).There was significantly relation b
4、etween TGF1 expression and clinical stages,lymph node and liver metastasis(P001,0.05,0.05),and no difference in histological grade. Conclusion Smad4 and TGF1,TGFR may play an important role in the occurrence and development of cholangiocarcinoma. Loss of Smad4 and TGFRgene may be one of the signific
5、ant molecular biological mechanism. 【Key words】 bile duct neoplasm,transforming growth factor1,immunohistochemistry 胆管癌早期临床症状不明显,早期发现和治疗成为临床面临的一大难题，其发生涉及多种癌基因的激活及抑癌基因的失活。转化生长因子1(TGF1)是一种多功能细胞因子，在信号转导中发挥重要的生物学作用，研究表明, TGF1 在胆管炎症中有较高的表达1 。TGF1 信号转导与肿瘤的关系在胰腺癌、结直肠癌、胃癌、乳癌等众多的恶性肿瘤中屡有报道，在胆管癌中的作用国内未见报道，国外研究
6、亦及少。本研究通过免疫组化检测 TGF1 在胆管癌中的表达，旨在探讨与胆管癌生物学行为及预后的关系。 1 材料和方法 1.1 标本来源 收集青岛大学医学院附属医院 1998 年 5 月-2001年 10 月间 47 例手术切除的胆管癌（肝外胆管癌）病人的存档组织蜡块，每例均有详细的临床资料及手术记录，全部病例均经病理证实。其中男25 例，女 22 例，年龄 3978 岁平均（55276）岁 。按 CT 显示肿瘤大小 086 cm, 其中20 cm 者 14 例，20 cm 33 例。 按部位分肝门部胆管癌（上段癌）27 例，中段癌 7 例，下段癌 13 例。临床 pTNM 分期期 6 例，期
7、13 例，期 21 例，期 7 例。组织学分级级（高分化）10 例，级（中分化）20 例，级（低分化）17 例。临床和病理证实有区域淋巴结转移者 16 例，肝转移 10 例，无转移者 26 例，同时有淋巴结和肝转移者 5 例。 1.2 方法 采用免疫组化 SP 法。试剂： TGF1 山羊抗人多克隆抗体，美国 Santa Cruz 公司产品。免疫组化试剂盒来自中山生物技术有限公司。 1.3 免疫组织化学结果判定标准 由两位病理工作者共同阅片并取均数，染色强度在100 倍镜下清楚可见棕黄色颗粒，阳性细胞数10%定为阳性病例，阳性细胞数10%为阴性病例。 1.4 统计学处理 根据资料性质分别应用 2
8、 检验、精确检验法。 2 结果 2.1 TGF1 在胆管癌组织及癌旁正常胆管组织中的分布和差异 TGF1 阳性表达主要定位于胆管癌细胞胞浆，偶见胞膜、胞核着色，呈棕黄色或浅黄色，见图 1、图 2。TGF1 阳性表达在胆管癌及癌旁正常胆管组织中的表达有显著性差别（222.55, P0.001） ，见表 1。 图 1 TGF1 在胆管癌组织学中的表达。SP200 图 2 TGF1 在胆管癌组织中的表达。SP200 表 1 TGF1 表达在胆管癌及癌旁正常胆管组织中的差异 组织类型例数 TGF1 表达阳性胆管癌 4736(766)癌旁正常组织 4713(277) 2.2 TGF1 表达与胆管癌组织分
9、级、临床分期的关系 TGF1 在胆管癌中随组织学分级的增高而增高，但统计学处理并无差异（精确检验法, 与、与、与比较分别P03178,02730,02756，TGF1 阳性表达与临床分期有关，+期阳性表达显著低于+期（21021，P001） ，见表 2。表 2 TGF1表达与胆管癌组织分级、临床分期的关系分级分期例数 TGF1 表达阳性组织学分级 2.3 TGF1 表达与胆管癌淋巴结、肝转移的关系 TGF1 在胆管癌中的阳性表达无转移者与是否淋巴结转移（2532，P005）及肝转移（精确检验, P00208）有关，见表 3。表 3 TGF1 表达无转移者与有淋巴结、肝转移的关系转移情况例数 T
10、GF1 表达阳性淋巴结转移1615 肝转移 1010 无转移 2616 注：2 或精确检验，P005 3 讨论 胆管癌近 20 年发病率呈逐渐上升的趋势，发现时多为晚期，手术切除率低，预后差，早期诊断和治疗是临床面临的一大难题。研究表明，信号传导通路异常与肿瘤的发生、发展及肿瘤细胞的浸润、转移密切相关。TGF1 通过信号转导通路发挥着重要的生物学效应，它调节细胞的增殖、分化、凋亡、迁移、粘附以及胞外基质的产生。TGF1 的跨膜信号转导，将信号递呈给细胞核，激活核转录。此基因的缺失、突变将导致信号转导中断，导致细胞的过度分裂、增殖，无限制生长，致肿瘤形成，它将信号从细胞表面传到细胞核的过程中具有
11、重要作用。TGF1 是 Mr2500的二聚体，经激活后获得有活性的 TGF1，它是一种多功能生长调节因子，对大多数上皮起源的细胞增殖均有抑制作用，对上皮起源的肿瘤具有负调节作用，它通过信号转导通路产生重要的生物学效应。研究发现多数肿瘤细胞有 TGF1 的高表达，结直肠癌、胃癌、乳腺癌、前列腺癌、膀胱癌及子宫内膜癌等均有高表达， 其高表达与肿瘤的演进、转移有关2，4 。Boivin5在研究小鼠胃腺体时发现 TGF1 表达缺失的小鼠胃小弯粘液腺增生，提示 TGF1 抑制胃粘膜生长。Bedossa6应用原位杂交和免疫组化技术都证明原发性肝癌细胞有 TGF1 的高表达，表明TGF1 不但在转录水平而且
12、在翻译水平上都表达增强，且高表达患者侵袭转移能力强，预后差。我们通过免疫组化方法研究结果显示 TGF1 阳性反应物主要分布于胆管癌上皮细胞胞浆，呈棕黄色染色，阳性表达766%（36/47） ，而在癌旁正常胆管组织细胞中阳性表达 277%（13/47） ，差异有极显著性意义。TGF1 高表达随组织学分级的增高而增高（、级分别为 70%，75%，823%） ，但统计学处理并无差别。TGF1 表达与临床分期有关，+期阳性表达显著低于+期。TGF1 表达与是否有淋巴结、肝转移有关，这表明 TGF1 随着临床分期增高及肿瘤转移侵袭能力增强而表达增高，即晚期胆管癌有 TGF1 的高表达。与 TGF1 负性
13、生长调节作用相反，为什么在高表达的 TGF1 的胆管癌细胞增长得不到抑制呢？这可能与胆管癌细胞中 TGF1 受体基因突变、缺失或受体后下游信号传导中断及 TGF1 本身生物活性有关。TGF1 不但是一种很强的生长抑制因子，而且具有较强的免疫抑制作用，它可抑制免疫活性细胞的增殖分化。晚期胆管癌有 TGF1 的高表达可能与 TGF1 能刺激肿瘤内的血管生成、抑制淋巴细胞的免疫作用有关，或肿瘤自分泌的 TGF1 对其自身无明显作用，可通过旁分泌抑制周围组织增殖、减少癌细胞增殖的空间限制，为癌细胞的生长创造良好环境7 。我们通过免疫组化对胆管癌组织中 TGF1 蛋白表达的研究发现，随着胆管癌临床分期的
14、增高而 TGF1 表达增高，揭示出 TGF1 可能参与胆管癌的发生、发展。检测 TGF1 蛋白对判断胆管癌潜在的侵袭、转移及预后有重要意义。 参 考 文 献 1 刘海双，蔡景修，顾红光，等. TGF1 及其受体在炎性胆管壁中的表达及意义. 世界华人消化杂志，1999，1（5）：342 2Hirayama D, Fujimori T, Satanaka K, et al. Immunohistochemical study of epidermal growth factor and transforming growth factor-beta in the penetrating type
15、of early gastric cancer. Human Pathol, 1992,23:681 3Girsch SM, Memoli VA, Stukel TA,et al. Immunohistochemical staining for transforming growth factor-beta1 associated with disease progression in human breast cancer.Cancer Res, 1992,52:6949 4Eastham JA, Troung LD, Rogers E,et al. Transforming growth
16、 factor1: Comparative immunohistochemical localization in human primary and metastatic prostate cancer. Lab Invest, 1995, 73628 5Boivin GP, Molina JR, Ormsby I, et al. Gastric lesions in transforming growth factor beta1 heterozygous miceJ. Lab Invest， 1996，74:513 6Bedossa P, Peltier E, Terris B, et al. Transforming growth factorbeta 1( TGF1) receptors in normal, cirrhotic and neoplastic human liversJ. Hepatology, 1995，21:760 7Lu Z,Friess H,Graber HU,et al. Presence of two signaling TGFbeta receptors in human pancreatic cancer correlates with advanced tumor stageJ.Dig Dis Sci，1997，42(10):2054
