1、手工洗涤血小板的制备及临床输注后疗效的研究【摘要】 目的 对比研究手工洗涤后血小板功能与形态的影响，观察洗涤血小板的质量和临床疗效。方法 采用血细胞分析、经典玻球法、经典比浊法、对 CS 3000plus 血细胞分离机采集血小板和手工制备洗涤血小板相互间的有关形态指标、黏附聚集性的比较，双盲法输注机采血小板和手工洗涤血小板。结果 手工洗涤血小板的回收率可达洗涤前的91.08%，残余红细胞(0.3150.003)109/u，残余白细胞(0.0320.003)108/u，血浆蛋白清除率99.14%，与机采血小板差异有统计学意义（P0.01） 。两组制品血小板 PDW 和 MPV、血小板的黏附聚集率
2、、血小板功能的指标与机采血小板差异无统计学意义（P0.05） 。洗涤血小板临床输注后疗效与机采血小板差异无统计学意义（P0.05） ，且输注不良反应明显低于机采血小板。结论 利用 0.9%的生理盐水对血小板进行手工洗涤的工艺方法是科学的、可行的，洗涤血小板各项质量指标符合国家标准，在临床的应用有广阔的前景。【关键词】 血小板；洗涤；机采/CS 3000；临床应用【Abstract】 Objective To assess the influence of apheresis and wash on platelet function and morphology.Washed platelet
3、 of quality and clinical effect were observed.Methods To determine the count，size，distribution，aggregation of the platelet from the peripheral blood prior to apheresis and aphersed produced by CS 3000 plus or washed platelets，double blindness transport the peripheral blood prior to apheresis and aph
4、ersed produced by CS 3000 plus and washed platelet.Results Washed platelet recycle rate 91.08%，residul WBC( 0.0320.003)108/u，residul RBC (0.3150.003)109/u，plasma protein separate 99.14%，both apheresed and washed platelet showed no problem on PDW and MPV，there were no statistical difference between g
5、roups.There were no difference in platelet and aggregation expression（P0.05）.But there is no difference between apheresed and washed platelet.Clinical observation of efffects no diffence（P0.05）.In addition it is improving blood safety.Conclusion 0.9%GNS washed platelet was science and safety.Quality
6、 of washed platelet fit into countrys standard，washed platelet have reliable quality and can be used in a variety of clinical conditions and new preservation technique.【Key words】 platelet;flow-cytometry;CS 30000;clinical application随着血细胞分离机在国内的推广，我国机采血小板的用量逐年攀升，已占了临床应用血小板的绝大部分1，2 。影响血小板输注疗效的，包括是非免疫
7、因素和免疫因素3 。目前国内用 CS 3000plus 血细胞分离机及专用的配套管道洗涤血小板，成本大，手工采集血小板洗涤报道很少；本文就手工采集血小板洗涤制备的安全性与临床疗效进行研究，报道如下。1 材料与方法1.1 材料 采集全血 400ml 多联袋和机采血小板耗材(南格尔公司)。1.2 设备 大容量低温离心机(J-6M 型，美国 Beckman)、KX-21 型血小板计数仪(美国产)、全自动无菌接口机（TSCDsc-201A 型） 、0.9%生理盐水(国产)、恒温血小板震荡仪(美国产)、pH 计(pH-HJ90B)，CS 3000plus血细胞分离机（美国 Baxter 公司）等。1.3
8、 方法1.3.1 机采血小板 CS 3000plus 血细胞分离机按常规操作一次采集一个治疗量的血小板，取样检测血小板产品各项的相关指标。1.3.2 手工洗涤血小板的制备（WPC） 提取多联袋采集的 6h 内的400ml 新鲜全血，置大容量低温离心机，以 1200g 22离心 9min，采用富浆法手工制备成富血小板血浆（PRP） 。然后将 PRP 以 2475g 22离心 15min，制备得 PC(2u/袋)，将贮存期内已经解聚的 PC，以 22 5800g，离心 5min，清除袋底的白细胞、红细胞，将上清液即少白细胞血小板挤压分离到另一无菌空袋内，加入 0.9%生理盐水 300ml，于 22
9、 2475g 离心 15min，移去上清液，再加入 0.9%生理盐水 300ml，室温静置 30min，再经 22 2475g 离心 15min，移出上清液，加入 0.9%生理盐水 60ml 悬浮血小板即为 WPC，放入血小板恒温保存箱在 22静置 1h后，然后水平震荡（60 次/min）解聚，取样检测洗涤血小板的各项指标。1.3.3 血小板黏附试验 采用经典玻球法4测定血小板黏附率。1.3.4 血小板聚集试验 采用经典比浊法4 （11.2mol/L ADP）测定血小板最大聚集率。1.3.5 血小板输注疗效的判断 CCI 1h 大于 10 为有效，小于 10 为无效5 。1.3.6 质量指标
10、用血小板的总形态分数、平均体积、分布宽度、计数、黏附功能、聚集功能、pH 值、血浆蛋白清除率和白细胞、红细胞残余量等指标来评价血小板洗涤前后的质量变化。1.3.7 临床效果观察 随机抽取多次输注过血小板的患者 40 例，分为两组（每组 20 例） 。观察组每例分次输入 4 个治疗量的手洗血小板，对照组每例分次输入 4 个治疗量的机采血小板，然后观察临床疗效和输注不良反应以及血小板纠正计数指数(CCI)。1.3.8 统计学方法 采用 t 检验。2 结果2.1 机采与手工分离洗涤的血小板指标观察 手工洗涤血小板的回收率可达洗涤前的 91.08%，洗涤后各项血小板功能的指标与机采血小板比较差异无统计
11、学意义（P0.05） ，残余红细胞(0.3150.003)109/u，残余白细胞(0.0320.003)108/u，血浆蛋白清除率99.14%，差异有统计学意义（P0.01） ，见表 1。表 1 机采与手工分离洗涤的血小板指标观察 （n=100，xs） 注：2u 血小板为 1 袋 400ml 全血制备，每组为 1002.2 洗涤前后血小板质量对比 洗涤血小板 PDW 与 MPV 进行对比，24h内差异无统计学意义（P0.05） ，36h 后差异有统计学意义（P0.05） ，见表 2。表 2 洗涤前后血小板质量对比 (n=100，xs，fl)注：洗涤前与洗涤后 PDW、MPV，洗涤前与洗涤后 2
12、4h PDW、MPV 差异无统计学意义(P0.05);洗涤前于洗涤后 36h PDW、MPV差异有统计学意义(P0.05)2.3 手工制备洗涤后与机采血小板临床疗效对比 洗涤血小板经临床输注后，疗效与对照组机单采血小板差异无统计学意义（P0.05） ，且输注不良反应明显低于机采血小板，见表 3。表 3 手工制备洗涤后与机采血小板临床疗效对比注：每次输注 1 个治疗量，*P0.053 讨论目前临床上应用机采血小板已非常广泛，机采血小板的应用也大大降低了输注血小板的不良反应；由于浓缩血小板的悬浮液采用供者的血浆，血浆中含有抗原、抗体、凝血酶、纤溶酶等异体蛋白，白细胞、红细胞、血小板自身特异性抗原和
13、 HLA I 类抗原均可引起同种免疫6 ，输注血小板引起的输注不良反应也日益得到重视。特别是对血浆过敏、IgA 缺乏的患者，由于患者血浆中有 IgA 抗体，当输入含有 IgA 的机采血小板时，往往发生严重的抗原抗体反应7 ，多次输注血小板患者中约有 8%产生血小板特异性抗体8 ，Sanz 报道，HLA 配合的血小板输注也有 3.8%出现输注无效，是由血小板特异性抗体引起的9 。洗涤血小板不仅能解决血浆过敏、IgA 缺乏、同种免疫等患者的血小板输注无效治疗问题，而且对血小板输注中预防非溶血性发热反应、急性血管内溶血反应有一定的作用10 。本文洗涤血小板后对血小板的功能指标进行了观察，测定了血浆蛋
14、白、红细胞、白细胞的清除率，差异有统计学意义，说明应用 0.9%生理盐水作洗涤液及悬浮液的方法是可靠的、稳定的，但生理盐水作为悬浮液缺乏血小板代谢所需的物质，生理盐水不是最理想的悬浮液。洗涤血小板保存 36h 后 PDW 增宽，MPV 增大，其原因可能是血小板悬浮在生理盐水中保存，细胞内能量消耗后，Na+进入细胞内，导致细胞内渗透压增高，使 PDW 增宽、MPV 增大；同时血小板保存的最适 pH 值为 6.66.8，所以洗涤血小板不宜长时间保存，应在洗涤后 6h 输注，未能及时输注能在（222）震荡条件下保存 12h。对临床输注的 20 例患者进行观察，仅有 1 例患者输注洗涤血小板后出现了低
15、热，这可能与患者当时的病情有关，其他无任何不良反应发生。欧美临床血小板始终以手工采集为主，国内输血界对全血中血小板资源缺乏足够的认识，手工采集的全血中血小板资源严重浪费11 。手工制备洗涤的血小板，不仅能节约全血中的血小板资源，而且为临床上需要反复输注血小板而发生输注无效或输注不良反应的患者，提供了一条新的治疗途径，手工制备洗涤血小板是一种安全有效的血小板制剂，值得在临床上推广应用。【参考文献】1 洪婴，郑碧华.献血者血细胞参数与机采血小板采集效率的关系.中国输血杂志，2002，15(5)：340.2 汤小娴.机采血小板输注治疗血小板严重减少的疗效观察.宁波大学学报（理工板） ，2002，15
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