1、BCL6 表达对生发中心形成及淋巴瘤发生的作用作者：张永清 黄高升 王哲 闫庆国 郭英 【关键词】 淋巴瘤 关键词: BCL-6;原癌基因淋巴结;增生;淋巴瘤;免疫组织化学 摘 要:目的 探讨 BCL-6在正常淋巴组织和一组淋巴瘤中的表达与生发中心形成及不同类型淋巴瘤发生的关系. 方法 形态学及免疫组织化学方法对 17例反应性增生淋巴组织（RLH）及 74例不同类型淋巴瘤进行检测并分类，免疫组化法检测各组织石蜡标本中 BCL-6表达情况. 结果 17例 RLH生发中心细胞、10 例滤泡性淋巴瘤（FL）及 4例弥漫性大B细胞淋巴瘤（DLBCL）中等强度表达 BCL-6;3例 FL及 21例 DL
2、-BCL BCL-6表达为强阳性（72%） ，高于其他各组（P0.01）.17 例 RLH生发中心外细胞，4 例 DLBCL，14 例小淋巴细胞淋巴瘤（SLL） 、4 例套细胞淋巴瘤（MCL）及 14例经典型霍奇金淋巴瘤（HD）BCL-6 阴性. 结论 BCL-6表达与生发中心形成密切相关.少数 FL和大部分 DLBCL中 BCL-6过表达，可能与这些淋巴瘤发病机制有关.检测 BCL-6有助于 FL与SLL，MCL 间及 RLH与 HD间的鉴别诊断. Keywords:BCL-6;proto-oncogenes lymph nodes;hyperplsi-a;lymphoma;immunohi
3、stochemistry Abstract:AIM To study the effects of bcl-6expression on the formation of lymphoid germinal center and the pathogene-sis of different types of lymphomas.METHODS Histomor-phology and immunophenotype of17cases of lymph node re-active hyperplsia（RLH）and74cases of lymphoma were de-tected and
4、 classified.BCL-6was detected in both paraffin sections of RLH and lymphoma with immunohistochemistry.RESULTS BCL-6was expressed moderately in cells within the germinal center of the17cases of RLH，in10cases of follicular lymphoma（FL）and in4cases of diffuse large B cell lymphoma（DLBCL）.Three cases of
5、 FL and21cases of DL-BCL were found to express BCL-6intensively，with statistic significance in positive intensity between DLBCL and above mentioned groups（P0.01） ，while BCL-6was negative in cells outside the germinal center of the17cases of RLH，in14cases of small lymphocytic lymphoma（SLL） ，in4cases
6、of mantle cell lymphoma（MCL）and in14cases of classic Hodgkins lymphoma（HD）.CONCLUSION There is a close relationship between BCL-6expression and the forma-tion of germinal center.The overexpression of BCL-6in some cases of FLs and DLBCLs may play a key role in their pathogenesis.It may be helpful to
7、detect BCL-6in distin-guishing FL from SLL and MCL and in distinguishing RLH from HD. 0 引言 BCL-6 是位于 3q27原癌基因 bcl-6编码，具有锌指结构的核内转录抑制因子1 .BCL-6与部分白血病细胞凋亡2 及 B淋巴细胞分化关系密切3 ，bcl-6 基因缺失，小鼠不能形成生发中心4 ，其基因 5端调控区的突变或易位而导致的 BCL-6表达异常，推测是某些淋巴瘤发生的基础5 .为进一步阐明 BCL-6表达与生发中心形成及淋巴瘤发生的关系，我们对 17例反应性增生淋巴组织及 74例不同类型的淋巴瘤组
8、织中 BCL-6表达情况进行了检测. 1 材料和方法 1.1 材料 1980/1999西京医院病理科反应性增生淋巴结（RLH）活检标本 17例及不同类型淋巴瘤活检标本 74例，标本用 10g L-1 中性多聚甲醛固定，常规石蜡包埋，3m 厚连续切片.所有标本经组织形态学及CD20，CD45RO 和 CD30（CD20，CD30 单克隆抗体均购自丹麦 Dako公司，工作浓度 1 100;CD45ROmAb购自 Sigma公司，工作浓度 1 800）相关免疫学标记检测（用 Dako EnVision+两步法）后，按 1997年 WHO淋巴瘤分类草案6 进行分类，RLH17 例，FL13 例，DLB
9、CL29 例，SLL14 例，MCL（Men-tle 细胞淋巴瘤）4 例，HD（霍奇金淋巴瘤）14 例.BCL-6mAb购自英国 Novocastra公司，Evision+及 DAB试剂购自 Dako公司. 1.1 方法 石蜡切片用 EDTA修复液配合高压修复7，8 ，免疫组化采用 Dako Evision+两步法（按说明操作） ，扁桃体炎标本作阳性对照，TBS 代替一抗作阴性对照.采用半定量方法评价结果:阴性（-）不着色，阳性为棕黄色胞核，散在棕黄色颗粒为中等强度阳性（+） ，棕黄色团块为强阳性（）. 统计学方法:采用 2 检验. 2 结果 2.1 BCL6 表达 除 RLH为 CD20及
10、CD45RO双阳性标记外，所有淋巴瘤标本为 CD20（+） ，CD45RO（-）表型，CD30 是 HD较特异标记（Fig1）.17 例 RLH及 13例 FL均表达 BCL-6，RLH 表达部位为生发中心内细胞，生发中心外细胞不表达 BCL-6（Fig2）.FL 均表达 BCL-6，绝大部分 DLBCL表达 BCL-6（阳性率为 86%）.SLL，MCL 及 HD均未见 BCL-6表达（Tab1）. 表 1 RLH及淋巴瘤组织免疫标记及 BCL-6表达 略 2.2 BCL6 表达强度 RLH组 BCL-6表达为中等阳性强度（Fig2）.FL组大部分 BCL-6亦为中等阳性强度（Fig3） ，
11、少数（3/13）为强阳性表达（Fig4）.29 例 DLBCL中，72%为强阳性表达（Fig5） ，BCL-6 表 达阳性强度显著高于以上两组（P0.01，Tab2）. 表 2 BCL-6在 RLH，FL 及 DLBCL中表达阳性强度情况 略 3 讨论 经免疫学标记检测进一步证实，FL，DLBCL，SLL，MCL 及 HD主要为B淋巴细胞起源，CD30 为霍奇金淋巴瘤的特征性标记之一，本研究中 14例 HD CD30均为阳性，提示分类可靠.Allman 等3 研究发现，BCL-6在多种细胞增殖时表达水平下降，而在细胞分化时表达水平上调.在增殖非常活跃的生发中心 B淋巴细胞中，BCL-6mRNA
12、 水平与生发中心外静止状态的 B细胞水平相当，但 BCL-6蛋白水平却可高出外周 B细胞 30余倍.提示 BCL-6蛋白在翻译及翻译后水平受到严格调控.Dent 等4 证实BCL-6基因缺陷鼠其淋巴组织不能形成生发中心.本研究用组化方法证实，BCL-6主要表达于正常淋巴组织生发中心，表达水平为中等阳性强度，生发中心以外淋巴细胞不表达 BCL-6，与 Flenghi等9 的报道一致，进一步证实 BCL-6持续表达与生发中心形成密切相关.生发中心这一特殊环境可能提供给 B细胞某种刺激信号，使得 BCL-6处于持续表达状态，BCL-6表达又是生发中心形成不可缺少的条件.13 例滤泡性淋巴瘤均表达BC
13、L-6，大部分表达水平与正常淋巴组织生发中心相似，仅少部分呈强阳性表达.而 29例 DLBLC有 86%患者表达 BCL-6，其中绝大部分为强阳性表达.目前多认为 DLBCL中 BCL-6过表达是因其调控区基因突变或易位所致，而 BCL-6过表达又可能导致 DLBCL的发生4 .FL的发生一直认为主要与 14q32染色体易位有关，与 BCL-6关系不大10 .Capello等11 最近研究发现，部分 FL同样存在 bcl-6调控区基因突变，当基因突变至一定程度时，可使恶性程度较低的 FL转化为恶性程度较高 DLBCL.本研究发现少数 FL患者 BCL-6异常表达，是否因其调控区基因突变引起，而
14、异常表达的 BCL-6是否能促使 FL向 DLBCL转化，此问题值得进一步研究.研究中还发现，并非所有 DLBCL均强表达 BCL-6，检测 BCL-6表达对进一步研究 DLBLC的起源及发病机制有重要意义，BCL-6表达阳性的 DLBCL可能起源于生发中心 B淋巴细胞.14 例 SLL，4例 MCL及 14例典型 HD患者均不表达 BCL-6，与 Raible等12 报道结果相似.提示以上淋巴瘤可能起源于非生发中心 B淋巴细胞，且这些类型淋巴瘤发病机制可能与 BCL-6关系不大.但检测 BCL-6有一定的鉴别诊断价值.FL 与 SLL及 MCL的鉴别，三者为中低度恶性淋巴瘤，瘤细胞与正常淋巴
15、滤泡的帽带细胞相似，时常弥漫一致，难以区别，可借助 BCL-6鉴别诊断;RLH 与 HD的鉴别:部分淋巴结持续炎性病变亦可致淋巴结的正常结构部分或全部消失，代之以增生的组织细胞或纤维细胞，与 HD的病理改变极为相似，检测 BCL-6可作为鉴别指标之一. 图 1 图 5 略 参考文献: 1Chang CC，Ye BH，Chaganti RS，Dalla-Favera R.BCL-6，a PoZ/zinc-finger，is a sequence-specific transcriptional repressor J.Proc Natl Acad Sci USA，1996;93:6947-695
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