1、CNTF、PDGF 在成年猫背根节的分布作者：张连双 王希锋 李雅娜 张洪芹 赵伟 时彦 王东 刘桂香 【摘要】 目的 观察睫状神经营养因子（CNTF） 、血小板源性生长因子（PDGF）在成年猫背根节(dorsal root ganglion, DRG)的表达情况。方法 成年健康雄猫 5 只，心内灌注固定后，随机取一侧 L6 背根节制作厚 20 m 冰冻切片，采用免疫组织化学 ABC 法染色，观察 CNTF、PDGF在正常背根节的分布。结果 CNTF、PDGF 在成年猫背根节的大、中小神经元均有表达，但以中小神经元的表达为主；阳性反应物主要定位在胞浆；部分纤维也呈阳性反应，未见明显的卫星细胞着
2、色。结论 CNTF、PDGF 在成年猫的背根节有表达，可能与背根节神经元的生理功能有关。 【关键词】 睫状神经营养因子；血小板源性生长因子；背根节；免疫组织化学；猫 【Abstract】 Objective To investigate the distribution of ciliary neurotrophic factor(CNTF) and plateletderived growth factor(PDGF) in dorsal root ganglion(DRG) of adult cat.Methods Five healthy male adult cats were use
3、d and 20m thick sections of L6 DRGs were cut with a cryostat. The sections were stained for CNTF and PDGF by immunohistochemical ABC method. Results CNTF and PDGF immunoreactants were distributed in large and mediumsmall sized neurons. Positive reactivity was mainly located in cytoplsma. Some fiber
4、was also positive.Conclusion CNTF and PDGF are expressed in DRG of adult cat. 【Key words】 ciliary neurotrophic factor (CNTF),plateletderived growth factor(PDGF),dorsal root ganglion,imumunohistochemistry，cat CNTF、PDGF 是神经营养因子家族的两个成员。大量的研究显示，它们的生理作用不仅涉及神经元存活、增殖、分化和促进神经突起生长，而且对损伤后的神经再生亦有促进作用。已有实验表明，CN
5、TF 和 PDGF 在部分背根切断后的备用背根节表达有改变 。但 CNTF、PDGF 在正常成年猫背根节的分布报道不多。本实验的目的亦在了解该两因子在正常成年猫 DRG 的分布。 1 材料与方法 11 取材 成年健康雄猫（体重 33.5 kg）5 只，3.5%戊巴比妥钠（1.3 ml/ kg）腹腔注射麻醉，4多聚甲醛心内灌注固定。随机取L6 DRG 后固定 12 h，再置于 20蔗糖 PBS 中下沉，恒冷箱纵切片，片厚20 m，入 0.01M PBS 备用。 12 免疫组化染色 用免疫组织化学 ABC 法染色，所用抗体为兔抗 CNTF（1500，Sigma） ，PDGF(1200，北京中山)。
6、对照组用 PBS 代替一抗，结果阴性。 13 结果观察 在显微镜下观察 CNTF、PDGF 阳性产物在 DRG 中的分布。 2 结果 在 Olympus 显微镜下进行观察。按照文献报道，将背根节的神经元分为大、中小两类 。本实验观察到 CNTF、PDGF 在成年猫背根节的大、中小神经元均有表达，但以中小神经元的表达为主。阳性反应物主要定位在胞浆，部分纤维也呈阳性反应。未见明显的卫星细胞着色（见图 1、图 2） 。 3 讨论 CNTF、PDGF 在成体 DRG 的分布报道较少。顾晓松等3 用原位杂交法显示，脊髓表达 CNTF mRNA 的部位主要在脊髓白质的前索和外侧索，而在脊髓灰质未见到明显的
7、 CNTF mRNA 阳性信号。CNTF 在成体 DRG 的分布报道较少。越来越多的证据表明，CNTF 对感觉神经元有明显的营养作用。文献报道，在体外采用无血清培养鸡胚的背根节神经元和脊髓前角的运动神经元，加入不同浓度的人重组 CNTF，背根节神经元对 CNTF 的缺乏更敏感 。本实验观察到 CNTF 在 L6 DRG 有表达，推测其可能是DRG 自身合成或从外周靶器官摄取，而非脊髓运输而来。提示 CNTF 与成年猫 DRG 神经元的生理功能有关，对 DRG 神经元起营养作用。 实验显示，在出生后的所有时段，大鼠 DRG 的神经元都可以表达 PDGF及其受体 PDGF 和 PDGF 5 。Ma
8、rcus 等6报道，PDGF 由神经元的胞体产生，通过顺行轴浆运输进行转运。说明 DRG 产生的 PDGF 除对DRG 的神经元有营养作用外，还可以通过顺行轴浆运输转运到脊髓进一步发挥作用。本结果显示，正常成年猫 L6 DRG 有 PDGF 阳性神经元，说明DRG 可以产生 PDGF，可能与 DRG 神经元的营养及存活有关。另外结合文献报道及本实验观察到的 DRG 部分纤维呈 PDGF 阳性，推测 DRG 产生的PDGF 还可以部分运输至脊髓进一步发挥作用。 本文为 CNTF、PDGF 在成年猫 DRG 的分布提供了新的形态学证据，但其具体的合成部位及作用机制，还有待于进一步探讨。 【参考文献
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10、n sensory and motor neuron of chicken embryoJ.Zhongguo Ying Yong Sheng Li Xue Za Zhi，1997, 13(3): 268270. 5 Eccleston PA, Funa K, Heldin CH. Expression of plateletderived growth factor (PDGF) and PDGF alpha and beta receptors in the peripheral nervous system: an analysis of sciatic nerve and dorsal root gangliaJ.Dev Biol, 1993, 155(2): 459464. 6 Fruttiger M, Calver AR, Richardson WD, et al. Plateletderived growth factor is constitutively secreted from neuronal cell bodies but not from axonsJ. Curr Biol, 2000, 10(20): 12831287.
