1、HPLC 法测血清奥氮平浓度【摘要】 用高效液相色谱法测定血清中奥氮平的药物浓度，方法简便、快速、灵敏、特异，适用于临床常规和研究应用。 【关键词】 高效液相色谱法 奥氮平 奥氮平为苯并异 唑衍生物，是新一代的抗精神病药物，并已广泛应用于临床，因而在临床上误服、服毒自杀时有发生。为了配合临床上的急救以及使给药方案更加合理化，我们建立了奥氮平的液相色谱定性定量的分析方法。 1 材料和方法 高效液相色谱法在药物分析中的应用是近年来飞速发展的新技术。目前，用 HPLC 法快速测定血中奥氮平浓度的方法国内报道甚少，我们在参考国外有关文献资料的基础上结合临床实际，试图在国内首先建立一个取样量少、分析周期
2、短、灵敏度高的实验方法，以满足临床实际的需要。 1.1 实验部分 1.1.1 仪器及试剂 (1)仪器 美国惠普 HP1050 高效液相色谱仪伴惠普 HP1050 紫外分光检测仪及色谱工作站。色谱柱为 2004.6mm 不锈钢柱，内充 5m Spherisorb C18 (34/73)。 (2)标准物 奥氮平标准对照品。 (3)溶剂 甲醇；三氯乙酸 CCl3COOH；乙酸乙酯 CH3COOC2H5；四硼酸钠 Na2B4O710H2O；磷酸氢二钠 Na2HPO412H2O；水为双重蒸馏水。 1.1.2 试剂配制 （1）标准储备液 用双重蒸馏水配成 1mg/ml 溶液，4保存。 （2）标准应用液 用
3、双重蒸馏水稀释成 100g/ml 溶液，4保存。 （3）50mmol/L Na2HPO4 缓冲液 准确称取 8.9535g Na2HPO412H2O 于 500ml 容量瓶中加双蒸水至刻度。 （4）0.05mmol/L 四硼酸钠溶液 准确称取 1.90685g Na2B4O710H2O 于 100ml 容量瓶中加双蒸水至刻度。 （5）准确称取 10g CCl3COOH 于 100ml 容量瓶中加双蒸水至刻度。 （6）流动相 取甲醇、双重蒸馏水按 70:30 的比例（v/v）配制，用前超声波脱气。 1.1.3 实验方法 （1）色谱条件 分析柱：色谱柱：Spherisorb-C18 4.6200m
4、m。 流动相流速：1ml/min。 检测波长：276nm。 满量程吸光度：0.02。 记录仪纸速：4mm/min。 柱温：室温。 （2）病人标本收集和保存 病人服用固定剂量达稳态血药浓度后，于清晨服药前取肘或颈静脉血 2ml，及时分离出血清。不能及时测定的血清密封后冰冻保存。 （3）样品的预处理 取血清 1ml，加入 10%三氯乙酸 1ml，在旋涡混合器上混合振荡 2 分钟。 在 3000r/min 离心机上离心 5min 后，取出上清液，加入乙酸乙酯/0.05mol/L 四硼酸钠（50:25 v/v）振荡 8min，经 3000r/min 离心5min 后，取上清液，N2 60吹干。残渣用
5、100l 流动相溶解，取20l 进行液相色谱分析。 2 计算 测出药物的峰面积，以血清应用液的峰面积为自变量，浓度为因变量，算出相关系数及回归方程，用标本的峰面积由回归方程算得结果。 3 结果 3.1 色谱行为 在本实验条件下，奥氮平保留时间为 4.9min。 3.2 线性关系及检测限 在空白血浆中分别添加奥氮平使血药浓度相当于 2、5、10、20g/L,在上述实验条件下进行分析，所得数据经计算机进行回归，得到峰面积 A 与质量浓度 C（g/L）的关系： A=1.78104+0.12104C；相关系数为 0.99。 3.3 回收率与精密度 配制含奥氮平质量浓度分别为2、5、10、20 g/L
6、的标准血浆样品各五份，在上述实验条件下进行分析，测得血浆中奥氮平回收率；另取上述四种质量浓度标准血浆，对每一质量浓度当日测定 5 次，求得日内相对平均偏差；四种质量浓度的血浆放置于冰箱保存，每天测 1 次，连续测定 5 次，求得日间平均相对偏差 3.4 检测波长 对奥氮平的标准溶液（g/L）进行全波长扫描，在 276 nm 外有较强的吸收，故选定检测波长为 278 nm。 4 讨论 4.1 本文采用 HPLC 法测血清奥氮平浓度，具有操作简单、取样量少、分析周期短、灵敏度高的特点，使奥氮平血药浓度的得知快速、简洁。 4.2 经专属性考察，常用的抗精神病药（氯氮平、冬眠灵、奋乃静）在该色谱条件下对奥氮平的测定无干扰。 4.3 本文采用血样经三氯乙酸沉淀蛋白后进样的方法来测定，经上百次试验，对柱压无明显影响。 4.4 本实验方法对病人无痛苦，对实验人员无危害。对节省医院及病人非合理用药造成额外治疗费具有很大意义。 参 考 文 献 1张仁斌.高效液相色谱法在医药研究中的应用.上海科技出版社，1983：145. 2陆明廉.血液浓度测定与临床应用.第一版.上海科技出版社，1986：160.
