1、HPLC 法测定红霉素明胶微球的含量作者：伍善广 杨帆 潘育方 黄慧 李桃 【摘要】 目的 建立红霉素明胶微球中红霉素含量的测定方法。方法 采用高效液相色谱法，色谱柱为 DIKMA C18 色谱柱(5 m,250 mm4.6 mm)，流动相为 0.1 mol/L 磷酸二氢铵（三乙胺调节至 pH6.5） 乙腈（体积比 6733） ，流速 1 mL/min；检测波长 210 nm。结果 红霉素质量浓度在 0.099 20.496 0 mg/mL 范围内与峰面积呈良好线性关系，r=0.999 9；平均回收率为 100.1%，RSD=0.95(n=9)。结论 本文方法可用于红霉素明胶微球的含量检测。
2、【关键词】 红霉素明胶微球；高效液相色谱法；紫外分光光度法 Abstract:Objective To establish an HPLC method for determining the content of erythromycin in the gelatin microspheres containing erythromycin. Methods DIKMA C18 column (5 m, 250 mm 4.6 mm) column was used to analyze the sample by using the mobile phase consisting of 0.
3、1 mol/L ammonium dihydrogen phosphate (adjust to pH6.5 with triethylamine)acetonitrile (6733) . The flow rate was 1 mLmin-1 and the detection wavelength 210 nm.Results The calibration curve was linear over the range 0.099 2-0.496 0 mgmL-1 for erythromycin (r=0.999 9). The recovery through the column
4、 was 100.10%(RSD 0.95, n=9). Conclusions The method is simple, rapid and accurate for the content analysis of erythromycin in the gelatin microspheres. Key words:erythromycin； gelatin microspheres；HPLC 红霉素(erythromycin)是临床上应用广泛的抗生素，是治疗支原体肺炎、军团菌肺炎的首选药物1 ，但在体内分布广泛，有效治疗浓度维持时间短，容易诱发耐药性，且有口服吸收不规则、肝毒性等不良反
5、应2 。 红霉素微球是以可生物降解的明胶为载体，是本实验室通过正交试验优化制备的具有合适粒径的肺靶向性微球3 。中国药典(2005 年版)中红霉素的含量测定采用微生物检定法4 ，此法操作繁琐、费时、影响因素多、结果准确性差。文献报道红霉素及其在制剂中含量的检测方法有紫外分光光度法、高效液相法、高效毛细管电泳法等5-7 。 本文作者曾采用紫外分光光度法测定红霉素微球的含量5,取得良好效果。本文采用高效液相色谱法测定红霉素明胶微球含量，并对 2种方法进行统计分析，检验 2 种方法的差异性。 1 仪器与试药 岛津 LC10ATVP 高效液相色谱仪（SHIMADZU COPRPORATION） ，紫外
6、 SPD10Avp 检测器（SHIMADZU COPRPORATION） ，HW 色谱工作站。pHS25pH 计（上海精密科学仪器有限公司） ，超声波清洗器（天津市考德斯科技有限公司） 。 红霉素标准品（中国药品生物制品检定所，批号30307200215 ） ，乙腈为色谱纯，其余试剂均为分析纯，水为重蒸水。红霉素明胶微球(简称 EMGMS ，自制，批号：20060809、20060812、20060815、20060820、20060822、20060828)。 2 方法与结果 2.1 色谱条件 色谱柱： DIKMA C18 柱(5 m,250 mm4.6 mm)；流动相：0.1 mol/L
7、磷酸二氢铵（三乙胺调节 pH 6.5） 乙腈（体积比 6733） ；流速1 mL/min；检测波长：210 nm。 2.2 溶液的配制 精密称取红霉素标准品 49.6 mg 置 50 mL 量瓶中,加流动相稀释至刻度,摇匀,制成质量浓度为 0.992 mg/mL 的标准品溶液。 精密称取红霉素明胶微球 172.3 mg(约相当于红霉素 23 mg),充分研磨，显微观察微球完全破坏后，置于容量瓶中加流动相至刻度，超声 30 min，放冷,用流动相定容至刻度，摇匀，0.45 m 微孔滤膜过滤，制成供试品溶液。 精密称取空白明胶微球 172.4 mg,充分研磨，按“供试品溶液”制备方法制成阴性对照溶
8、液。 2.3 系统适应性及方法专属性试验 在选定的色谱条件下，分别注入红霉素标准品溶液、供试品溶液和阴性对照溶液，结果见图 1。红霉素拖尾因子为 1.26、保留时间约13.1 min，理论塔板数按红霉素计算不低于 1 000，与其他组分可基线分离，阴性样品不干扰样品测定。 2.4 标准曲线 分别精密量取标准品溶液 1、2、3、4、5 mL 置 10 mL 量瓶中,加流动相稀释至刻度,摇匀。分别取 20 L 进样,记录色谱峰峰面积。以峰面积(A)为横坐标,质量浓度()为纵坐标,绘制标准曲线,回归方程为:=0.310-4A+0.2810-2，r=0.999 9。结果表明红霉素的质量浓度在0.099
9、 20.496 0 mg/mL 范围内与峰面积呈良好的线性关系。 2.5 稳定性试验 取供试品溶液在室温放置,分别于 0、2、4、6、8、10 h 进样,记录色谱峰峰面积,RSD 为 0.86%，表明样品溶液在 10 h 内稳定。 2.6 精密度试验 取对照品溶液,于 10 h 内不同时间重复进样 5 次，记录色谱峰峰面积,RSD 为 1.41%，表明精密度良好。 2.7 回收率试验 精密吸取已知浓度的红霉素明胶微球溶液 9 份，加入一定量的红霉素对照品，配制成高、中、低 3 种质量浓度的溶液，按“2.2”项方法制成供试液，进样测定，计算回收率,结果平均回收率为 100.1%，RSD值为 0.
10、95%（n=9） 。 2.8 重复性试验 取同一批微球(批号：20060809)5 份，按“2.2”项方法制成供试液，进样，记录色谱图，计算红霉素含量的 RSD 为 1.2，表明重复性良好。 2.9 样品的测定 取 6 批样品，按“2.2”项方法制成供试液，进样测定。并同时按紫外分光光度法进行检测5 ，测定结果见表 1。采用统计软件SAS9.0 对 2 种方法的测定结果进行配对资料两样本均数 t 检验，统计分析结果见表 2。从表 2 可见，2 种方法的测定结果差异无显著性(P=0.85,P0.05)。表 1 紫外分光光度法和高效液相色谱法的测定结果比较表 2 统计分析结果 【参考文献】 1 P
11、OTHULURI J V, NAWAZ M,CERNIGLIA C E. Environmental fate of antibiotics used in aquacultureM/SIKDAR S K,IRVINE R L.Bioremediation: Principles and Practice,Biodegradation Technology Developments. LancasterBasel:Technomic Publishing Co,1998:221-248. 2 陈新谦新编药物学M.14 版.北京：人民卫生出版社，1997:78-79 3 ILLUM L, DAV
12、ID S STargeting of colloidal particles to the bone marrowJ Life Sci，1987，40:1553-1560 4 国家药典委员会.中华人民共和国药典:2005 年版二部S 北京：化学工业出版社，2005：223. 5 伍善广,潘育方,杨帆,等.紫外分光光度法测定红霉素明胶微球的含量J.海峡药学,2007,19(10):65-66. 6 朱恩东,茅春新.HPLC 法测定红霉素含量J.中国医学研究与临床,2004,16(2):39-40. 7 孔小轶，车宝泉，田红昭高效毛细管电泳法测定红霉素的含量J 首都都医药,1999，6(7)：18
