1、安宫牛黄丸对脓毒症大鼠重要器官损伤及死亡率的影响作者：张丹，黄萍，李俊，胡质毅，王艳丽【摘要】 【目的】观察安宫牛黄丸对脓毒症大鼠重要器官损伤及死亡率的影响。 【方法】选用 SD 大鼠，随机分为正常对照组，模型组，安宫牛黄丸低、中、高剂量组(中药低、中、高剂量组，剂量分别为10 、20 、30 gkg-1d-1)。除正常对照组外，其他组均采用盲肠结扎穿孔(CLP)法复制腹腔感染型脓毒症模型，中药低、中、高剂量组分别于造模前 05 h 和造模后 6 h 灌胃给药，观察 24 h 大鼠死亡率，检测造模 24 h 后各组大鼠血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、总胆红素(TB)和肌酐(Cr)含量及肺组织髓
2、过氧化物酶(MPO)活性。 【结果】模型组血清ALT、TB 水平，肺组织 MPO 活性及 24 h 死亡率均显著升高(P005或 P001) 。中药低、中、高剂量组可显著降低肺组织 MPO 活性(P005 或 P001) ，其中低剂量组可显著降低血清 TB 水平(P005) ，低、中剂量组还可显著降低 24 h 死亡率(P005) 。【结论】安宫牛黄丸可降低脓毒症大鼠的死亡率，并对肺、肝等重要器官有一定的保护作用。 【关键词】 安宫牛黄丸/药理学;脓毒症/中药疗法;疾病模型，动物;大鼠脓毒症(sepsis)是严重创(烧)伤、休克、外科大手术后常见的并发症，其本质上是一个失控的全身自我破坏性炎症
3、反应过程1-2。脓毒症属于中医温热病范畴，是由于火毒炽盛、正气亏虚，正不胜邪、邪毒内陷，客入营血所致3。安宫牛黄丸是中医治疗温热病的“三宝”之一，也是中医危重病症急救要药。本文观察了安宫牛黄丸对盲肠结扎穿孔(CLP)法复制脓毒症模型大鼠重要器官功能及死亡率的影响，现报道如下。1 材料与方法11 主要药物、试剂与仪器安宫牛黄丸由北京同仁堂股份有限公司同仁堂制药厂生产(批号：5010279)，水合氯醛由国药集团化学试剂有限公司生产(批号：20071210)，髓过氧化物酶(myeloperoxidase，MPO)活性检测试剂盒由南京建成科技有限公司提供(批号：071103)，AU5421全自动生化检
4、测仪由日本 Olympus 公司生产。12 动物模型制备清洁级 SD 大鼠 90 只，雌雄各半，体质量180220 g，购自广东省医学实验动物中心，合格证号：0031637。在Wichterman4-5方法的基础上进行改良，复制腹腔感染型脓毒血症。术前禁食 12 h，用 100 mg/L 水合氯醛按 15 mL/kg 的剂量腹腔注射麻醉大鼠，常规消毒腹部，在下腹部正中央切口，长约 2 cm，打开腹腔寻找盲肠与小肠及大肠交界处，用灭菌 4 号丝线环形结扎，结扎完毕后仔细检查，保持肠道通路正常。在与肠系膜相对的盲端肠壁浆膜面用 9 号针头穿刺 2 次，2 个针孔相距约 3 mm，第 1 针孔距盲端
5、约 3 mm，同时在第 2针孔处放置 1 条宽 2 mm 的橡胶引流片，防止伤口愈合，轻轻将肠管放回原处，关闭腹腔，逐层缝合。术后即刻皮下注射生理盐水，补充手术过程中体液的丢失，剂量 10 mL/kg。13 动物分组及给药将 90 只大鼠随机分为正常对照组(10 只)、模型组(20 只)和中药低、中、高剂量组(各 20 只)。取中药临床剂量的10、20、30 倍分别作为低、中、高剂量。中药低、中、高剂量组分别于术前 05 h 和术后 6 h 按 10 、20 、30 gkg-1d-1 剂量灌胃安宫牛黄丸。正常对照组和模型组动物灌胃饮用水。观察记录 24 h 动物死亡率，24 h 后各组动物活杀
6、，检测血清及肺组织有关指标的变化。14 标本的采集和处理无菌状态下腹主动脉采血，用肝素钠抗凝，3 000 r/min 离心 15 min，取血浆于-20保存。无菌状态下取肺组织200 mg，加入 18 mL 生理盐水在冰浴下匀浆，3 000 r/min 离心 15 min，取上清液。15 指标检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、总胆红素(TB)、肌酐(Cr)含量采用全自动生化分析仪测定，肺组织 MPO 活性检测采用酶学分光光度法。16 统计学方法采用 SPSS 130 统计软件包，对计量资料进行 t检验和方差分析，计数资料进行 2 检验。2 结果21 安宫牛黄丸对脓毒症大鼠死亡率的影响 与正常
7、对照组比较，模型组死亡率显著增高(P001) 。中药低、中剂量组死亡率与模型组比较显著降低(P005) ，中药高剂量组死亡率虽然低于模型组，但差异无显著性意义(P005) 。结果见表 1。22 安宫牛黄丸对脓毒症大鼠重要器官损伤的影响大鼠经 CLP 手术造模后，出现活动减少、反应迟钝、嗜睡、竖毛、进食减少、不饮水、腹泻及部分出现呼吸急促等现象，与临床所见的脓毒症表现比较相似。CLP 术后 24 h 模型组大鼠血清 ALT、TB 水平显著高于正常对照组(P005) ，表明脓毒症大鼠肝脏有一定的损伤。中药干预后 24 h 各剂量组大鼠的 ALT 水平无显著改善(P005) 。中药低量剂组能显著降低
8、脓毒症大鼠的血清 TB 水平(P005) ，而中、高剂量组对脓毒症大鼠血清 TB 有降低的趋势，但与模型组比较差异无显著性意义(P005) 。模型组大鼠血清 Cr 水平无显著变化(P005) ，说明 CLP 大鼠造模 24 h 肾脏功能尚无显著的损害。中药各剂量组干预后大鼠血清 Cr水平也未出现显著改变(P005) 。模型组大鼠肺组织中 MPO 活性显著升高(P005) ，表明 CLP脓毒症大鼠肺组织炎症损伤明显。中药低、中、高剂量组干预可以显著降低肺组织 MPO 活性(P005 或 P001) ，减轻脓毒症对肺组织的炎症损伤。结果见表 2。表 1 各组脓毒症大鼠 24 h 死亡率比较表 2
9、各组脓毒症大鼠重要器官损伤比较3 讨论脓毒症是多种疾病在发生发展过程中所表现出来的一种共同的病理生理过程。主要由感染性因素引起，如革兰阳性菌、革兰阴性菌、真菌、病毒等致病微生物入侵所致。这些感染因素迅速激活机体非特异免疫系统释放大量早期和晚期炎症介质，诱发失控性炎症反应(SIRS)，进一步发展可导致脓毒性休克、多器官功能障碍综合征(MODS)甚至死亡6。近 20 年来，尽管人们采取了许多抗炎方法干预脓毒症的病理过程，但是临床疗效并不理想7。安宫牛黄丸出自我国清代著名温病学家吴鞠通著作温病条辨 ，该方由牛黄、犀角、黄连、黄芩、栀子、郁金、麝香、珍珠、朱砂、雄黄、冰片等 11 味中药组成，具有清热
10、解毒、芳香辟秽、开窍通闭之功效，对温热病有独特的疗效。临床应用安宫牛黄丸及其类方治疗脓毒症取得较好疗效8-9。本实验结果显示，模型组大鼠表现出与临床脓毒症者相似的症状，大鼠肝、肺等器官损伤明显，死亡率高达 55%。安宫牛黄丸低、中剂量组能显著降低脓毒症大鼠的死亡率，验证了安宫牛黄丸对脓毒症的治疗作用。胆红素代谢和肝脏关系密切，肝细胞对胆红素的摄取、结合、排泄过程发生障碍可致血清总胆红素升高。脓毒症大鼠血清总胆红素升高，在一定程度上反映了脓毒症对大鼠肝脏的损伤，安宫牛黄丸低剂量组能显著降低脓毒症大鼠的血清总胆红素水平(P005) ，提示安宫牛黄丸对脓毒症大鼠的肝脏功能具有一定的保护作用。MPO
11、是中性粒细胞(PMN)特有的还原酶，主要存在于 PMN 的嗜天青颗粒中，且每个细胞所含酶的量是恒定的，约占细胞干质量 5%，故可以通过组织 MPO 活性定量测定 PMN 的数目，肺组织中 MPO 活性高低可定量反映 PMN 扣押与聚集的程度10-11。实验性脓毒症大鼠肺组织中的 PMN浸润，应与肺脏特殊的解剖学和生理学特点有关。因为肺脏不仅是一个重要的代谢器官，同时又是全身静脉血液的过滤器官，各组织脏器所产生并释放到血液中的代谢产物、活性物质都要从肺脏经过，且肺脏毛细血管分支较少，血管长，灌注压低，血流缓慢，流经肺毛细血管活化的PMN 易与内皮细胞接触并粘附，且粘附后不易被缓慢的血流冲走，因此
12、PMN 易聚集于肺脏。而肺组织活化的中性粒细胞经脱颗粒作用，释放弹性蛋白酶、MPO 和金属酶等多种蛋白酶，分解胞外纤维与基质，可导致肺组织损伤12。因此 MPO 活性的高低在一定程度上可以反映肺组织的损伤程度。本实验结果显示，CLP 术后 24 h 大鼠肺组织中 MPO 活性显著升高，安宫牛黄丸低、中、高剂量组可以显著降低肺组织 MPO 的活性，减轻脓毒症对肺组织的损伤，提示安宫牛黄丸对脓毒症大鼠的肺脏具有一定的保护作用。综上所述，安宫牛黄丸可不同程度地降低脓毒症大鼠的死亡率，并对肺、肝等重要器官功能具有一定的保护作用。【参考文献】1Bone R C,Sprung C L,Sibbald W
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