1、藏药川西獐牙菜对小鼠免疫性肝损伤的治疗作用【摘要】 目的 探讨藏药川西獐牙菜的醇提物对小鼠免疫性肝损伤的影响，进一步评价其降酶、保肝护肝的作用。方法 采用尾静脉注射卡介苗(BCG)和脂多糖(LPS)复制免疫性肝损伤模型，测定血清 ALT、AST活性，计算肝脏、脾脏、胸腺质量指数。结果 川西獐牙菜的高、中、低剂量给药组连用 10d 可显著抑制免疫性肝损伤小鼠血清 ALT、AST 活性，并能有效防止 BCG+LPS 对小鼠各脏器的免疫性肝损伤。结论 川西獐牙菜预防性给药能减轻免疫性肝损伤对小鼠肝脏的破坏，保护肝功能。 【关键词】 免疫 肝损伤 川西獐牙菜 脏器指数 丙氨酸氨基转移酶(ALT) 天门
2、冬氨酸氨基转移酶(AST) 小鼠ABSTRACT: Objective To observe the therapeutic effect of Swertia mussotii Franch is extracted by alcohol on immunological liver injury in mice, and further evaluate its immun-regulating effect in decreasing aminotransferase and protecting heptocytes. Methods BCG vaccine and lipopolys
3、accharide were intravenously injected to establish liver injury model. The effects of Swertia mussotii Franch on liver injury were contrasted. Results The high-, medium- and low- dose Swertia mussotii Franch groups which had been administered for 10 consecutive days, had significantly inhibited seru
4、m ALT and AST acticities of immunological liver injury; Swertia mussotii Franch could effectively prevent immunological liver injury by BCG+LPS. Conclusion Swertia mussotii Franch can protect mice from immunological liver injury and protect the function of liver.KEY WORDS: immunity; liver injury; Sw
5、ertia mussotii Franch; organ index; alanine aminotransferase (ALT); aspartate aminotransferase (AST)藏药川西獐牙菜(swertia mussotii franch)，藏药名桑蒂或蒂达，始载于藏医药书四部医典 ，有清热、解毒，清肝利胆的功效，在历代的藏医药著作如晶珠木草 、 鲜明注释等均有记载。川西獐牙菜属龙胆科(gentianaceae)獐牙菜属(swertia)，为青藏高原特有种1 ，分布于西藏和青海海拔 3 800-5 000 m 的高寒地区，为一年生草本，全草入药，是传统的名贵藏药，俗称“
6、藏茵陈( Zang Yin Chen, ZYC)”。研究资料表明，川西獐牙菜中主要含有獐牙菜苦苷、龙胆苦苷、芒果苷、齐墩果酸等物质2-3 ，其中抗肝炎有效成分主要为齐墩果酸和芒果苷2 。这些成分中的齐墩果酸、芒果苷、环烯醚萜苷类具有降酶、利胆、镇痛等作用4 。本实验通过观察藏药川西獐牙菜对免疫性肝损伤小鼠的脏器指数及常用肝功能生化指标丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase, ALT)和天冬门氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase, AST)的影响，进一步了解藏药川西獐牙菜的药理作用，为利用藏药川西獐牙菜这一青海宝贵资源、开发新药及保健品
7、，提供一定的科学依据。1 材料与方法1.1 实验动物 昆明种小鼠，雄性，6-8 周龄，体重(202)g，由兰州实验动物研究所提供。1.2 药品及试剂 卡介苗(bacillus calmette guerin, BCG)为卫生部上海生物制品研究所产品；脂多糖(lipopolysaccharide, LPS, E.coli. 055:B5)为美国 Sigma 公司产品；ALT、AST 测定试剂盒为南京建成生物工程研究所产品。1.3 方法1.3.1 BCG 和 LPS 诱导免疫性肝损伤(ILI)模型的制备 参照文献方法5-16 ，模型组小鼠于造模第 1 天尾静脉注射 125 mg/kg BCG 溶液
8、(约含 5.0107 个活菌数)，10 d 后再次尾静脉注射 375 g/kg LPS 溶液进行攻击，经 LPS 攻击后小鼠开始禁食，但自由饮水。通过检测肝功能指标 ALT 和 AST 活性明显上升，符合 BCG+LPS 造模特点，判定造模成功。1.3.2 分组设计及用药方案 将小鼠随机分成 5 组，每组 20 只。即：正常组、模型组、川西獐牙菜高剂量组、川西獐牙菜中剂量组、川西獐牙菜低剂量组。试验用药剂量按照徐叔云等17的配药剂量进行换算，换算公式如下：dB=dARBRAWAWB13公式中 dA、dB 是 A、B 两种动物的每公斤体重剂量。RA、RB 是动物体型系数，可由书中查到，WA、WB
9、 是动物的体重(kg)值。川西獐牙菜高、中、低剂量组按每 60 kg 人需生药量分别为 10 g、5 g、1 g 计算，再运用上面的换算公式得到每 20 g 小鼠需生药量高、中、低剂量组分别为28.364 2 mg、14.182 2 mg、2.836 4 mg。实验的溶剂用吐温 80、食用油、蒸馏水以 118 比例混合而成。用药方案：除正常组小鼠外，其余各组动物于第 1 天给药前 1 h 鼠尾静脉注射(静脉注射)BCG 生理盐水溶液(约含 5.0107 个活菌数) 0.2 mL/只，从造模第 1 天起，按 0.2 mL/20 g 体重分别灌胃高、中、低剂量的药物，正常组和模型组给予等量溶媒，每
10、天 1 次，连续 10 d，末次给药 1 h 后鼠尾静脉注射 LPS 生理盐水溶液(含 7.5 g)0.2 mL/只，然后禁食 16 h 后，眼眶采血，测血清ALT、AST，处死动物剖取肝脏、脾脏、胸腺称重，计算其质量指数。1.3.3 小鼠免疫器官指数肝脏指数、脾脏指数和胸腺指数的测定 称小鼠体重，颈椎脱臼处死小鼠，剥离肝脏、脾脏和胸腺，分别称其湿重，肝脏、脾脏和胸腺的质量与小鼠体重的比值为肝脏指数、脾脏指数、胸腺指数。计算公式：肝脏、脾脏、胸腺指数=肝脏、脾脏、胸腺重量(mg)/小鼠体重(g)。1.3.4 小鼠生化指标 ALT/GPT 和 AST/GOT 活性的测定赖氏法 小鼠眼眶取血，离心
11、获取血清，按产品说明书操作检测。1.4 统计学处理 本实验所有数据用 SPSS10.0 统计软件包中的 ANOVA 法进行单因素方差分析处理，实验数据均采用均数标准差(s)表示，多组间比较用F 检验，组间两两比较用 q 检验，P0.05 为差异有统计学意义。2 结果2.1 川西獐牙菜对 BCG/LPS 所致免疫性肝损伤脏器指数的影响 与正常组相比较，模型组小鼠的肝脏、脾脏指数均显著升高(P0.01)；而胸腺指数却显著降低(P0.01)。与模型组比较，川西獐牙菜高剂量给药组的肝脏、脾脏指数明显降低(P0.05)，中、低剂量给药组与模型组相比，差异无统计学意义(P0.05)；而川西獐牙菜各剂量给药
12、组的胸腺指数与模型组比较，差异均无统计学意义(P0.05，表 1)。结果表明：BCG+LPS 组小鼠肝、脾脏指数增大，胸腺指数减小，高剂量给药组可使增大的肝、脾脏指数降低，中、低剂量给药组对肝、脾脏指数也有降低的趋势，可见对肝、脾脏肿大的抑制作用与剂量有关。而各剂量给药组对胸腺指数影响不大。表 1 不同组别小鼠脏器指数的变化（略）1.3.2 分组设计及用药方案 将小鼠随机分成 5 组，每组 20 只。即：正常组、模型组、川西獐牙菜高剂量组、川西獐牙菜中剂量组、川西獐牙菜低剂量组。试验用药剂量按照徐叔云等17的配药剂量进行换算，换算公式如下：dB=dARBRAWAWB13公式中 dA、dB 是
13、A、B 两种动物的每公斤体重剂量。RA、RB 是动物体型系数，可由书中查到，WA、WB 是动物的体重(kg)值。川西獐牙菜高、中、低剂量组按每 60 kg 人需生药量分别为 10 g、5 g、1 g 计算，再运用上面的换算公式得到每 20 g 小鼠需生药量高、中、低剂量组分别为28.364 2 mg、14.182 2 mg、2.836 4 mg。实验的溶剂用吐温 80、食用油、蒸馏水以 118 比例混合而成。用药方案：除正常组小鼠外，其余各组动物于第 1 天给药前 1 h 鼠尾静脉注射(静脉注射)BCG 生理盐水溶液(约含 5.0107 个活菌数) 0.2 mL/只，从造模第 1 天起，按 0
14、.2 mL/20 g 体重分别灌胃高、中、低剂量的药物，正常组和模型组给予等量溶媒，每天 1 次，连续 10 d，末次给药 1 h 后鼠尾静脉注射 LPS 生理盐水溶液(含 7.5 g)0.2 mL/只，然后禁食 16 h 后，眼眶采血，测血清ALT、AST，处死动物剖取肝脏、脾脏、胸腺称重，计算其质量指数。1.3.3 小鼠免疫器官指数肝脏指数、脾脏指数和胸腺指数的测定 称小鼠体重，颈椎脱臼处死小鼠，剥离肝脏、脾脏和胸腺，分别称其湿重，肝脏、脾脏和胸腺的质量与小鼠体重的比值为肝脏指数、脾脏指数、胸腺指数。计算公式：肝脏、脾脏、胸腺指数=肝脏、脾脏、胸腺重量(mg)/小鼠体重(g)。1.3.4
15、小鼠生化指标 ALT/GPT 和 AST/GOT 活性的测定赖氏法 小鼠眼眶取血，离心获取血清，按产品说明书操作检测。1.4 统计学处理 本实验所有数据用 SPSS10.0 统计软件包中的 ANOVA 法进行单因素方差分析处理，实验数据均采用均数标准差(s)表示，多组间比较用F 检验，组间两两比较用 q 检验，P0.05 为差异有统计学意义。2 结果2.1 川西獐牙菜对 BCG/LPS 所致免疫性肝损伤脏器指数的影响 与正常组相比较，模型组小鼠的肝脏、脾脏指数均显著升高(P0.01)；而胸腺指数却显著降低(P0.01)。与模型组比较，川西獐牙菜高剂量给药组的肝脏、脾脏指数明显降低(P0.05)，中、低剂量给药组与模型组相比，差异无统计学意义(P0.05)；而川西獐牙菜各剂量给药组的胸腺指数与模型组比较，差异均无统计学意义(P0.05，表 1)。结果表明：BCG+LPS 组小鼠肝、脾脏指数增大，胸腺指数减小，高剂量给药组可使增大的肝、脾脏指数降低，中、低剂量给药组对肝、脾脏指数也有降低的趋势，可见对肝、脾脏肿大的抑制作用与剂量有关。而各剂量给药组对胸腺指数影响不大。表 1 不同组别小鼠脏器指数的变化（略）
