1、藏药镰形棘豆中黄酮类成分山柰素和鼠李素的含量测定【摘要】 目的建立藏药镰形棘豆中山柰素、鼠李素的含量测定方法。方法高效液相色谱（HPLC）法测定镰形棘豆中山柰素和鼠李素的含量。采用 C18，流动相以甲醇-0.4%磷酸溶液梯度洗脱检测波长 362 nm。结果此方法线性关系良好(r=0.999 8)，平均回收率山柰素为99.90%，RSD=1.83%;鼠李素为 99.62%；RSD=1.14%。结论该方法简便、稳定，能有效地控制该制剂的质量。 【关键词】 镰形棘豆 山柰素 鼠李素 高效液相色谱镰形棘豆 Oxytropis falcata Bunge 是棘豆属的一种药用植物，作为藏药材被收载于中华人
2、民共和国卫生部药品标准藏药 第一册1中，主要产于我国青海、甘肃南部、四川西部，藏药称“莪大夏”2，3 ，是我国青藏高原常用药之一。据晶珠本草 4等藏药书籍记载，为全草入药。具有清热解毒、生肌敛疮、涩脉止血、通利大便等功效；内服可治流感、扁桃体炎、高烧、喉炎、气管炎、出血、便秘、炭疽等症以及藏医的黄水病，外敷治疗疮疖肿痛、创伤、骨伤疼痛。民间多用于解毒、镇痛，当地居民有用其粉末撒于患处治疗刀伤，效果甚好。另外，现代研究表明5镰形棘豆总黄酮苷元在治疗慢性气管炎方面也有较好的疗效。本实验采用高效液相色谱法对藏药镰形棘豆中黄酮类成分山柰素和鼠李素的含量进行了测定，为其质量控制标准的制定及其进一步的推广
3、应用提供依据。1 仪器与试药惠普 1100 高效液相色谱仪，惠普 1100 二极管阵列检测器，山柰素对照品（购自中国药品生物制品检定所，纯度 99%以上，供含量测定用，批号：879-200102） ，鼠李素对照品（由中国科学院西北高原生物研究所纪兰菊研究员提供，纯度 98%以上，可供含量测定用） ，水为重蒸馏水，甲醇为色谱纯，其余试剂为分析纯。镰形棘豆样品三批（由青海金诃藏药药业有限公司、央宗藏药药业有限公司、久美藏药药业有限公司提供，药材经作者鉴定为镰形棘豆 Oxytropis falcate Bunge 的全草，均为青海产） 。2 方法与结果2.1 分析溶液的制备2.1.1 对照品溶液的制
4、备精密称取山柰素对照品 0.91 mg，鼠李素对照品 1.02 mg，加入乙醇溶解，并稀释至 50 ml 的量瓶中至刻度，摇匀，作为对照品贮备溶液。精密吸取照品溶液 6 ml，加乙醇稀释至 10 ml 容量瓶中的刻度，摇匀，作为对照品溶液。2.1.2 供试品溶液制备取本品内容物适量，研匀，精密称取 1.0 g，精密加入乙醇 50 ml称定重量，超声处理 30 min，取出，放冷，称定重量，补足减失的重量，摇匀，滤过。精密量取续滤液 25 ml，置锥形瓶中，加盐酸 5 ml，80水浴中加热 1 h，立即冷却，用乙醇洗涤容器，洗液并入 50 ml 量瓶中，加乙醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，作
5、为供试品溶液。2.2 分析方法学考察2.2.1 色谱条件 色谱柱：CAPCELL PAK 4.6 mm250 mm，5 m（日本资生堂） 。流动相：甲醇-0.4%磷酸溶液，110 min（5545） ；1020 min（6040） ，检测波长：362 nm；柱温：25；流速：1 mlmin-1。系统适应性实验 在上述色谱条件下，分别精密吸取供试品溶液、对照品溶液各 10 l，分别注入色谱仪。供试品色谱图中，在与山柰素、鼠李素对照品相应保留时间上，有相同的色谱峰。色谱图见图 1。2.2.2 线性关系考察分别精密吸取照品溶液 2，4，6，8，10 ml，加乙醇稀释至 10 ml容量瓶中至刻度，摇匀
6、。分别精密吸取各 10 l 进样，在上述色谱条件下，测定峰面积，求得回归方程：山柰素 y=91.84+1.31104x，r=0.999 5；鼠李素 y=4.11+1.97104x，r=0.999 9。实验结果表明：山柰素在0.036 40.182g，鼠李素在 0.040 80.204 g 范围内有良好的线性关系。2.2.3 精密度实验精密吸取混合对照品溶液 10 l，连续进样 5 次，测得山柰素峰面积为 1 491.28，1 494.48，1 495.49，1 493.47，1 488.65，平均峰面积为 1 492.67，RSD=0.19%。鼠李素峰面积为 2 423.28，2 419.48
7、，2 425.49，2 423.47，2 418.65，平均峰面积为 2 422.07，RSD=0.12%。2.2.4 重复性实验取同一样品 5 份，按“2.1.2”项下的方法制成供试品溶液，在上述色谱条件下，测定山柰素的含量分别为 0.435，0.438 ，0.442，0.439，0.434 mgg-1，平均含量为 0.438 mgg-1，RSD=0.74%，鼠李素的含量分别为0.525，0.528，0.536，0.529，0.521 mgg-1，平均含量为 0.528 mgg-1，RSD=1.05%。2.2.5 稳定性实验取同一供试品溶液 10 l，每隔 2 h 进样，测得峰面积值，山柰素
8、 RSD=0.81%，鼠李素 RSD=0.96%。结果表明，供试品溶液在 8 h 内所测得结果基本稳定。2.2.6 加样回收率实验精密称取已知山柰素、鼠李素含量的样品 6 份，约 0.5 g，分别加入 10 ml 的对照品贮备溶液，按“2.1.2”项下的方法制成供试品溶液，并按上述色谱条件测定山柰素、鼠李素的含量，计算回收率。结果山柰素平均回收率为 99.90%，RSD=1.83%，鼠李素平均回收率为99.62%，RSD=1.14%。结果见表 1。表 1 回收率实验结果（略）2.2.7 样品测定取 3 个厂家提供的样品 3 批，按“2.1.2”项下的方法制成供试品溶液。精密吸取上述对照品溶液与
9、供试品溶液各 10 l，分别注入色谱仪，按上述色谱条件测定，计算山柰素、槲皮素的含量。结果见表 2。表 2 样品测定结果（略）3 讨论本实验在提取方法上进行了优化，对超声波法、回流提取法进行比较，结果本文选择的超声 30 min 效果最好。同时对流动相进行了优化，峰形的对称性比较好，并消除了峰的拖尾现象，取得了比较好的分离效果。将山柰素、槲皮素、异鼠李素、鼠李素对照品溶液和供试品溶液进行紫外吸收光谱扫描。结果表明镰形棘豆总黄酮成分中含山柰素和鼠李素，而不含槲皮素和异鼠李素，并且采用二极管阵列检测器对峰进行了确认。用乙醇溶解供试品进样检测时，流动相的比例对分离及峰形有一定的影响。在实验中山柰素峰
10、出峰时间短，而鼠李素出峰时间长，经实验摸索，以甲醇-0.4%磷酸溶液为溶剂体系，采用梯度洗脱，可改善分离效果，出峰时间适宜。对 3 个厂家投料的镰形棘豆所测含量基本稳定，为镰形棘豆的复方藏药制剂质量控制提供了一种有效的分析方法，也为其质量控制标准的制定及其进一步的推广应用提供依据。【参考文献】1中华人民共和国卫生部药典委员会.中华人民共和国卫生部药品标准.藏药（第一册） S.1995：330.2中国药品生物制品检定所，云南省药品检验所.中国民族药志M.成都：四川民族出版社，1990：410.3青海省药品检验所，青海省藏医药研究所.中国藏药卷M.上海：上海科学技术出版社，1996：115. 4毛继祖，罗达尚，王振华，等.晶珠本草(汉译本)M.上海:上海科学技术出版社,1986. 5姜华，胡君茹，刘霞，等.镰形棘豆的研究进展J.中草药，2006，37(2):315.
