1、春雨烧伤凝胶剂中盐酸小檗碱的含量测定作者：任卫琼,廖建萍,王诚元【摘要】 目的 建立春雨烧伤凝胶剂中盐酸小檗碱含量测定的高效液相色谱法。方法 色谱柱为 Kromasil C18 柱(4.6 mm250 mm,5 m),流动相为乙腈-1%H3PO4-三乙胺(24760.76),检测波长：345 nm,流速：1.0 mL/min,柱温： 30 。结果 盐酸小檗碱在 0.0880.440 g(r=0.999 7)之间具有良好的线性关系,平均回收率为 98.13%, RSD=0.77%(n =6)。结论 该法检测快速,精密度高,重现性好,可用于春雨烧伤凝胶剂的定量分析。 【关键词】 春雨烧伤凝胶剂；盐
2、酸小檗碱；含量测定Abstract：Objective To establish an HPLC method for determination the contents of berberine hydrochloride in spring rain burns gels. Methods Analytical column was Kromasil C18 (4.6 mm250 mm, 5 m) column with a mobile phase of Acetonitrile-1%H3PO4-Triethylamine (24760.76), the detective wavel
3、ength was 345 nm, the flow rate was 1.0 mL/min and column temperature was 30 . Results A good linearity was obtained in the range of 0.0880.440 g (r=0.999 7), and the average recovery was 98.13% with RSD=0.77% (n=6). Conclusion The method is rapid and reliable, and can be used for the quality contro
4、l of spring rain burns gels.Key words：spring rain burns gels；berberine hydrochloride；content determination春雨烧伤凝胶剂由黄连、大黄、虎杖、栀子、冰片等 9 味中药组成,具有清热泻火、活血化瘀、消肿止痛及排脓生肌的功效,外用于治疗烧、烫伤。黄连为方中君药,主含有效成分为盐酸小檗碱1,法定标准2中收载了盐酸小檗碱含量的测定方法为薄层色谱扫描法。为控制该制剂的质量,本实验采用高效液相色谱法测定盐酸小檗碱的含量,结果准确,方法简便,可作为该制剂质量控制指标。1 仪器、样品与试剂Agilent 1
5、100 高效液相色谱仪；二极管阵列检测器(DAD)。盐酸小檗碱对照品由中国药品生物制品检定所提供,批号 0713-9906。春雨烧伤凝胶剂由湖南中医药大学第一附属医院剂改室提供(批号20060315,20060316,20060317)。乙腈为色谱纯,水为自制重蒸馏水,其他试剂均为分析纯。2 方法与结果2.1 色谱条件色谱柱：Kromasil C18 (4.6 mm250 mm,5 m),流动相：乙腈-1%H3PO4-三乙胺(24760.76),检测波长：345 nm,流速：1.0 mL/min,柱温：30 ,进样量：10 L。2.2 线性范围及标准曲线制备精密称定盐酸小檗碱对照品 4.40
6、mg,加甲醇配制成浓度为 0.044 mg/mL 的对照品溶液。分别精密吸取对照品溶液 2、4、6、8、10 L,按上述色谱条件进行测定,得回归方程为：Y=1.280X+76.411(r=0.999 7)。结果表明,盐酸小檗碱在 0.0880.440 g 之间具有良好的线性关系。2.3 供试品溶液的制备取春雨烧伤凝胶剂 0.3 g,精密称定,置具塞三角瓶中,精密加入盐酸-甲醇(1100)50 mL,称重,控制水温 40 ,密塞,超声处理 2 次。每次30 min,取出,冷却,放至室温后再称定重量,加盐酸-甲醇(1100)补足减失的重量,滤过,弃去初滤液,精密量取续滤液 5 mL,并定容于 10
7、 mL 量瓶中,用 0.45 m 微孔滤膜过滤,作为供试品溶液。2.4 空白试验按处方比例和制法,制成不含黄连的样品,并按“2.3”项下方法制得空白对照品溶液。依法进样测定,结果空白对照溶液在盐酸小檗碱保留时间处无色谱峰,表明在实验条件下,其他药材成分对测定无干扰。见图1。2.5 精密度试验精密吸取同一浓度的对照品溶液 5 L,重复进样 5 次,结果RSD=0.95%(n=5),表明精密度较高,测定可靠。2.6 稳定性试验取样品(批号 20060315)0.3 g,精密称定,按“2.3”项方法制备供试品溶液,分别于 0、1、2、4、8、24 h 依法测定,结果峰面积RSD=1.05%(n=6)
8、,表明供试品液在 24 h 内峰面积积分值基本稳定。2.7 重复性试验取同一批号样品(批号 20060315)各 5 份,精密称定,按“2.3”项下方法制得供试品溶液,并按上述色谱条件进行测定,结果表明,本方法重复性较好,RSD=0.98%(n=5)。2.8 加样回收率试验精密称定已知含量的样品(批号 20060315)0.3 g,各 2 份,各精密加入盐酸小檗碱对照品溶液(浓度为 0.67 mg/mL),分别按“2.3”项下方法制得供试液,测定,计算回收率。结果见表 1。表 1 盐酸小檗碱回收率测定结果(略)2.9 样品含量测定取 3 批样品,精密称定,按“2.3”项下方法制得供试液,以上述色谱条件测定盐酸小檗碱含量,测定结果见表 2。表 2 样品中盐酸小檗碱含量测定结果(略)3 讨论笔者曾对多种流动相进行了比较,考察盐酸小檗碱的分离情况及检测灵敏度,结果采用乙腈-1%H3PO4-三乙胺(24760.76)分离情况最好。曾对超声提取时间进行了考察,发现超声提取 1 h 已能将制剂中盐酸小檗碱提取完全,故选用超声 1 h。3 组样品含量测定结果表明,其含量基本稳定,可作为本品的含量控制方法。【参考文献】1 李家实.中药鉴定学M.上海：上海科学技术出版社,1996.57.2 国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)S .北京：化学工业出版社,2005.213.
