1、莪术微乳凝胶药代动力学研究作者：钟华，尹蓉莉，高剑坤，周淑芳，赵启鹏，文登福，江洪波，田仁君【摘要】 目的建立 HPLC 检测家兔血浆中牻牛儿酮浓度的方法。方法运用 HPLC 研究并比较了经皮给药以及注射给药后牻牛儿酮在家兔体内的药物动力学过程。结果其中经皮给药 Tmax 为(7.3331.633)h，Cmax 为(100.23353.360)ng/ml，t1/2 为(10.2092.393)h,而注射给药后, Tmax 为 0 h 后，Cmax 为(273.45137.189)ng/ml，t1/2 为(14.86710.138)h。结论经皮给药药物代谢较完全，与注射给药相比，具有毒副作用小，
2、且能达到持效、长效的目的。 【关键词】 莪术微乳凝胶; 经皮给药系统; 注射给药; 药代动力学莪术作为传统中药具有活血化瘀的功效, 现代研究表明，其活性成分对皮肤癌、肝癌、卵巢癌、乳腺癌、食管癌、胃癌、直肠癌等等都有一定程度的治疗以及辅助治疗作用，可以改善血液流变学参数以及增强在体对病毒性感染的抵抗能力，起到对实体肿瘤以及病毒性感染的治疗以及辅助治疗作用1。莪术微乳凝胶是将莪术微乳作为中间体形式制成水凝胶剂,该剂型集中了微乳对药物的彻底分散性，凝胶对皮肤的粘合性以及润湿性，使药物直接持续地发挥药效，增强了制剂的疗效、稳定性和靶向性、减小了其毒副作用，使药物以恒定速度 (或接近恒定速度)通过皮肤
3、各层或黏膜,产生全身或局部治疗作用，尤其适宜于皮肤癌的治疗。本实验运用 HPLC 法研究并比较了经皮给药以及注射给药后牻牛儿酮在家兔体内的药物动力学过程，为莪术微乳凝胶的临床应用提供参考依据24。1 仪器与试药莪术微乳凝胶(自制)，牻牛儿酮对照品(中国药品生物制品鉴定所，批号 111665-2000401);乙腈为色谱纯，水为超纯水，三氯醋酸、异丙醇、正丁醇、无水硫酸钠为分析纯，其余试剂均为分析纯。家兔 6 只，体质量(2.50.5)kg，实验动物中心提供。LC-10ATVAP 型高效液相色谱仪，Prostar 325 型二极管阵列检测器。micromax 高速离心机(美国热电)。2 方法与结
4、果2.1 血浆样品的高效液相检测方法2.1.1 沉淀剂的制备称取三氯醋酸 10 g，加到 100 ml 异丙醇正丁醇溶液(51)中，振荡使溶解，得到血浆蛋白沉淀剂。2.1.2 血浆样品预处理家兔耳缘静脉取血 2ml,置于预先加入肝素抗凝的 10 ml 离心管中，3 000 rmin-1 离心 10 min,分离血浆。取血浆 500 l 置于 10 ml 离心管中,旋涡混合 10 s,加入沉淀剂 150 l，旋涡混合 30 s，3 000 rmin-1 离心 10 min,取上清液置于另一离心管中，加入无水硫酸钠 100 mg，旋涡混合 1min,使硫酸钠溶解，3 000 rmin-1 离心 5
5、 min，吸取上层澄清液，取 20 l 进样测定。2.1.3 高效液相分析条件色谱柱为 HypersilCN(250 mm4.6 mm,5 m);流动相为乙腈-水(4060);流速 1.0 ml/min ;检测波长 210 mm;进样 20 l;温度 35。典型色谱图：在上述条件下测得空白血浆、空白血浆加入实验标准品、实验采集血浆样品的典型色谱图 1。最低检测限和最低定量限的测定：通过测定，牻牛儿酮的最低检测限和最低定量限的测定分别 1 ng/ml 和 10 ng/ml。图 1 药代动力学 HPLC 图2.2 标准曲线的制备2.2.1 牻牛儿酮标准溶液的配制精密称取牻牛儿酮标准品 10.0 m
6、g，置于 10 ml 容量瓶中，加异丙醇溶解定溶，得浓度为 1 mg/ml 的标准液储备液。精密吸取储备液于 10 ml 容量瓶中，分别配制成浓度为50，5，0.5 g/ml 的标准液。2.2.2 牻牛儿酮血浆标准曲线的制备取空白血浆 0.5 ml，加入牻牛儿酮标准液适量，制备成浓度分别为 10，20，50，100，500，1000 ng/ml 的标准血浆样品，按样品处理方法项下进行处理测定，计算牻牛儿酮峰面积，以牻牛儿酮的血药浓度进行线性回归，得药物血浆曲线方程。本方法测定血浆中牻牛儿酮的最低检测限为 0.63 ngml-1,最低检测浓度为 1 ng/ml，最低定量限为 10 ng/ml，标
7、准曲线见表 1，图 2。其血药浓度标准曲线方程为：Y= 60.91X + 4 155.1 (r=0.999 0，n=6)。表明牻牛儿酮在血浆中浓度 1010 000 ngml-1 范围内线性良好。2.2.3 分析方法的专属性所测物质牻牛儿酮在上述色谱条件下保留时间适当，血浆内源性物质及所用试剂在待测峰附近无干扰峰产生，满足待测药物的体内含量测定的条件，该分析方法的专属性良好。2.2.4 分析方法回收率配置浓度为 50 ，500，1 000 ngml-1 的牻牛儿酮标准溶液，与对应浓度的血浆样品进行比较，求出绝对回收率。结果见表 2。表 1 牻牛儿酮血浆浓度线性与范围图 2 血药浓度标准曲线图表
8、 2 分析方法回收2.2.5 绝对回收率 配制浓度为 50，500，1 000 ngml-1 的低、中、高 3 种牻牛儿酮标准血浆样品，按上述血浆样品预处理步骤操作，血浆样品中牻牛儿酮色谱峰面积代入标准曲线，通过测得浓度与理论浓度的比值求得相对回收率。结果见表 3。 表 3 样品绝对回收率2.2.6 分析方法精密度配制浓度为 50 ，500，1 000 ngml-1 的低、中、高三种牻牛儿酮标准血浆样品，按上述血浆样品预处理步骤操作，同日内及日间分批测定，计算日内和日间相对标准差，结果见表 4，精密度达到要求。表 4 日内日间精密度测定2.3 莪术微乳凝胶药物动力学研究2.3.1 实验设计及取
9、样方法取家兔 6 只，随机分成两个实验组，每组 3 只。实验前 1 d 小心剃去腹部皮毛(10 cm10 cm),注意不要损伤皮肤，禁食一夜，自由饮水。莪术微乳凝胶经皮给药方案及血样采集：按一定剂量经皮给药，将凝胶贴敷于家兔皮肤上，于给药后0.5，1，2，4，6，8，10，14，18 ，24 h 从家兔耳缘静脉取血 2 ml 至预先加入肝素抗的离心管中，3 000 r/min 离心 10 min 取血浆冰冻保存待测，按样品处理项下方法进行处理测定。得血药数据，表 35。莪术微乳注射给药方案及血样采集：于耳缘静脉按一定剂量注射莪术微乳，于给药后 0.0，0.5，1，2，4，6，8，10，14，1
10、8 ，24 h 另侧耳缘静脉取血 2ml 至预先加入肝素抗的离心管中，3 000 r/min 离心 10 min 取血浆冰冻保存待测，按样品处理项下方法进行处理测定。得血药数据。2.3.2 数据处理单剂量对家兔经皮给药后血药浓度见表 5、图 3，单剂量对家兔注射给药后血药浓度见表 6，图 4。所测数据用 3P97 药动学数据处理软件进行处理，得其动力学参数见表 78。表 5 单剂量对家兔经皮给药后不同时间的血药浓度图 3 单剂量经皮给药血药浓度图表 6 单剂量对家兔注射给药后不同时间的血药浓度图 4 单剂量注射给药血药浓度图表 7 单剂量对家兔经皮给药动力学参数表 8 单剂量对家兔注射给药动力
11、学参数3 结果从实验结果可见，莪术微乳凝胶经皮给药及注射给药在家兔体内均为二室模型，其中经皮给药 Tmax 为(7.3331.633) h，Cmax 为(100.23353.360) ng/ml，t1/2 为(10.2092.393) h,而注射给药后, Tmax 为 0 h 后，Cmax 为(273.45137.189)ng/ml，t1/2 为(14.86710.138) h。莪术微乳凝胶的达峰时间(Tmax)较长，达峰浓度(Cmax)较高，消除半衰期(t1/2)较短，与注射给药相比，经皮给药药物代谢较完全，具有毒副作用小，且能达到持效、长效的目的。【参考文献】1 成晓静,刘华钢,赖茂祥.莪
12、术的化学成分及药理作用研究概况J.广西中医学院学报, 2007, 10(1):79.2 Santibanez JF,Quintanillla M,Martinez J Genistein and curcum.in block TGF.beta 1-induced u.PA expression and migratory and invasive phenotype in mouse epidermal keratinocytesJ. Nutr Cancer 2000,37(1):49.3 Drews J.Drug discovery:a historical perspectiveJ. Science，2000，287(5460)：l960.4 满 伟.莪术油药理研究及临床应用进展J. 时珍国医国药,2000,23(7):156.
