1、肺癌患者外周血淋巴细胞免疫分型检测的临床意义【摘要】 目的 探讨肺癌患者外周血淋巴细胞免疫分型，了解肺癌患者的基线免疫状态。方法 采用流式细胞仪分别检测 60 例肺癌患者（肺癌组）和 20 例正常人（对照组）外周血淋巴细胞免疫分型，并对两组进行比较。结果 肺癌患者 CD3（+） 、CD4（+） 、自然杀伤细胞（NK 细胞）比例及 CD4（+）/CD8（+）比值均低于对照组(P0.05)，CD8（+）细胞比例高于对照组(P0.05)，CD19（+）细胞比例与对照组相比差异无显著性（P0.05） 。结论 肺癌患者免疫功能与正常人群相比存在降低趋势，外周血淋巴细胞免疫分型可作为肺癌患者免疫监测的一种
2、方法。【关键词】 肺肿瘤 淋巴细胞免疫分型 免疫监测 Abstract:Objective To investigate the baseline immunological status in patients with lung cancer by analyzing the changes in peripheral blood lymphocyte subsets.Methods Lymphocyte subsets in the peripheral blood were detected by flow cytometry in 60 patients with lung canc
3、er and 20 healthy controls.Results The lung cancer group had a lower percentages of CD3（+）, CD4（+） lymphocytes, NK cell, and lower CD4（+）/CD8（+） ratio than the control group (P0.05), and had a higher percentage of CD8（+） cells than the control group (P0.05). There was no significant difference in th
4、e percentages of CD19（+） cells between the lung cancer group and the control group (P0.05).Conclusion The immunologic functions in patients with lung cancer were generally compromised in comparison with a healthy population. Detection of the variations of lymphocyte subsets in peripheral blood may b
5、e used in the monitoring of immune function for patients with lung cancer. Key words: pulmonary neoplasms; lymphocyte subsets; immune mornitoring 机体免疫功能在抗肿瘤过程中起着重要的作用，不同淋巴细胞免疫分型在机体免疫的调控和抗肿瘤免疫中起重要作用。肺癌的发生、发展与宿主免疫监视功能低下有关。近年来研究发现，肺癌患者免疫功能低下主要表现为 T 淋巴细胞和 NK 细胞功能紊乱与缺陷。监测肺癌患者免疫状态有助于合理选择最佳的治疗方法并评价疾病的预后。本研
6、究采用流式细胞仪检测了肺癌患者外周血淋巴细胞免疫分型的变化情况，以初步探讨肺癌患者的免疫功能状态变化，评估病情状况，指导免疫治疗。 1 资料和方法 11 研究对象和分组 2006 年 10 月2007 年 4 月在苏州大学附属第二医院经病理确诊为肺癌的患者 60 例（肺癌组） ，其中男性 47 例，女性 13 例，年龄 3482 岁（中位年龄 66 岁） 。根据美国联合癌症分类委员会（AJCC）和国际抗癌联盟（UICC）2002 年制定的肺癌的 TNM 分期标准临床分期如下：期 1 例，期 23 例，期 36 例；病理类型为：鳞癌 23 例，腺癌 20 例，小细胞癌 7 例，未定型 10 例。
7、对照组 20 例均为既往无相关疾病的健康体检者，其中男性 16 例，女性 4 例，年龄5178 岁（中位年龄 64 岁） 。 1.2 实验方法 1.2.1 标本采集及处理 取肺癌组患者及对照组 健康体检者静脉血 3ml 加入含肝素的抗凝管中混 匀后备用。取专用试管 6 支，各试管加入外周血标本 100 l，分别加入 CD45-异硫氰酸荧光素（FITC)/CD14-藻红脘（PE）,IgG1-FITC/IgG2a-PE，CD3-FITC/CD19-PE，CD3-FITC/CD4-PE，CD3-FITC/CD8-PE，CD3-FITC/ CD16（+）56-PE 单克隆双色抗体 15 l，与之充分混
8、匀，室温避光下孵育 15 min，然后每管加入 10FACS(红细胞裂解液)溶血剂2 ml，充分混匀，室温避光下溶血 1015 min（1522）至完全透明，1500 r/min 离心 10 min，弃上清液，PBS 洗涤 3 次，每管加入 0.5 ml PBS 液悬浮，混匀放置室温下待测。 1.2.2 淋巴细胞免疫分型检测 用 Becton-Dickinson 公司生产的FACS Calibur 型流式细胞仪测定。 1.3 统计学处理 本实验数据采用 SPSS 11.0 软件处理，检测结果以s 表示。肺癌患者与对照组之间的比较采用独立样本的双侧 t 检验， P0.05 为差异有显著性。 2
9、结 果 肺癌组外周血 CD3（+） 、CD4（+） 、NK 细胞比例及 CD4（+）/CD8（+）比值均低于对照组（P0.05） ，而 CD8（+）细胞比例高于对照组（P0.05） ，CD19（+）细胞比例与对照组相比差异无显著性（P0.05） 。见表 1。表 1 肺癌患者与正常人淋巴细胞免疫分型的比较与对照组比较：*P0.05 3 讨 论 机体免疫监视功能缺陷可能是肿瘤发生发展过程中的常见事件。随着对肿瘤病因的认识的深入，人们发现淋巴细胞亚群改变导致的免疫功能损害可能与肿瘤的发生、发展和预后相关，目前研究最多的是 T 细胞亚群的测定12 。 T 淋巴细胞不仅是细胞免疫的效应细胞，而且在调节免
10、疫反应中起重要作用。T 细胞亚群表面分子主要包括 CD3（+） 、CD4（+）和 CD8（+）等。CD3（+） T 细胞存在于所有成熟 T 细胞膜上，代表了宿主总的 T 细胞数量和细胞免疫状态。CD4（+）分布在辅助细胞诱导亚群和抑制细胞诱导亚群表面，又称 T 辅助或诱导细胞，在抗肿瘤免疫中起着积极的作用，其主要功能是通过分泌淋巴因子，增加和扩大免疫应答过程，辅助诱导其它免疫细胞共同发挥抗肿瘤作用。CD8（+）分布在抑制性 T 细胞和杀伤性 T 细胞表面，不仅具有负调节效应，同时具有维持抗肿瘤免疫记忆的功能，并能抑制 B 细胞产生抗体。CD4（+）/CD8（+）比例的恒定维持着细胞免疫反应的平
11、衡，肿瘤抗原识别和杀伤分别通过 CD4（+） T细胞和 CD8（+） T 细胞完成。Trojan 等3研究表明，在非小细胞肺癌的患者中，CD8（+） T 细胞虽然能浸润入肿瘤细胞中，但由于不能被充分激活而无法产生有效的抗肿瘤作用。Prado-Garcia 等4发现CD8（+） T 细胞亚群的比例不受 T 细胞产生的细胞因子刺激而改变，这种改变是导致肺癌患者抗肿瘤免疫效应低下的原因之一。此外，NK 细胞也是机体免疫监视系统的主要组成部分，是机体抗肿瘤的第一道防线，参与 T 淋巴细胞、B 淋巴细胞的调节，是细胞免疫中的非特异性成分。在多数情况下，NK 细胞不依赖抗体、补体及预先致敏，可自发启动杀伤
12、功能，并与单核细胞、粒细胞等协同发挥抗肿瘤、抗感染的免疫调节作用，但其活性可被肿瘤细胞分泌的免疫抑制因子抑制，从而降低机体对肿瘤的抵抗力。近年来的研究还表明：NK 细胞不仅在非特异性抗肿瘤免疫中发挥重要作用，并且具有激活和增强重要的抗原递呈细胞树突状细胞（DC）的功能，因此，NK 细胞起到连接非特异性免疫和特异性免疫的桥梁作用5 。我们的研究发现，和对照组相比，肺癌患者机体免疫活性细胞比例存在异常，主要表现为淋巴细胞免疫分型比例失调，如 CD3（+） 、CD4（+） 、NK 细胞比例下降，CD8（+）细胞比例上升，CD4（+）/CD8（+）比值下降。提示肺癌患者存在免疫抑制和免疫调节功能紊乱，
13、CD4（+） T 细胞辅助诱导其它免疫细胞发挥抗肿瘤作用的功能减弱，CD8（+） T 细胞数量增多，负调节效应增强；CD4（+）/CD8（+）比值下降，有利于肿瘤增殖。 CD19 是 B 淋巴细胞膜表面标志，B 淋巴细胞主要介导体液免疫。本研究结果显示，肺癌患者与正常人相比 CD19（+）细胞比例差异无显著性，显示体液免疫在肿瘤免疫中并非处于主要地位。 我们认为，肺癌患者细胞免疫功能较正常人群存有降低趋势，外周血淋巴细胞免疫分型测定可用于肺癌患者的免疫功能监测。研究肺癌患者的免疫功能状况在指南个体化治疗、疗效评价、功能状态评分及预后中的作用有待于更多前瞻性的临床研究。 【参考文献】 1 任秀红
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15、-Garcia H, Aquilar-Cazares D, Flores-Verqara H, et al. Effector, memory and nave CD+8 T cells in peripheral blood and pleural effusion from lung adenocarcinoma patients J. Lung Cancer, 2005, 47(3):361-371. 5 Degli-Esposti MA, Smyth MJ. Close encounters of different kinds: dendritic cells and NK cells take centre stage J. Nat Rev Immunol, 2005, 5(2):112-124.
