1、高良姜药材中 4 种有效成分的含量测定作者：陈平 郭晓玲 梁汉明 冯毅凡 【摘要】 目的 建立评价高良姜药材质量的含量测定方法。方法 采用 DiamonsilTMC18 柱（4.6 mm200 mm，5 m） ，流动相为乙腈0.2 磷酸溶液，梯度洗脱，流速 1 mL/min，柱温 30 ，检测波长为220 nm。结果：高良姜素、山柰素4 甲醚、5 羟基7(4 羟基3 甲氧苯基）1 苯3 庚酮、5 羟基1,7 双苯3 庚酮的线性范围分别为 0.2671.328 g、0.103 40.517 g、0.310 81.554 0 g、0.247 31.236 g，平均回收率分别为100.9、970、9
2、68、990，RSD 值分别为1.7、14、18、0.6。结论 该方法准确、简便，具有良好的重复性和稳定性，可用于高良姜药材的质量控制。 【关键词】 高良姜；高效液相色谱法；黄酮；庚烷；质量控制 Abstract:Objective To develop an HPLC method for characterizing the active constituents, namely, galangin, kaempferol4methyl ether, diphenylheptane A and diphenylheptane C, in Alpinia officinarum Hance.
3、 Method Samples were analyzed on an HPLC Diamonsil C18 column(200 mm4.6 mm，5 m) by using gradient elution of acetonitrile (A) and 0.2 aqueous phosphoric acid (B) at a flow rate of 1.0 mLmin-1The diodearray detection was set at 220 nm. Results Galangin, kaempferol4methyl ether, diphenylheptane A and
4、diphenylheptane C had good linearity over the ranges of 0.267-1.328，0.1034-0.517， 0.3108-1.554 and 0.2473-1.236 g， respectively, and the average recoveries were 100.9（RSD=1.7） 、970（RSD=14） ，968 （RSD=18） and 990（RSD=0.6） ，respectivelyConclusionThe method is rapid，accurate and reproducible, which is h
5、elpful in the quality control of Alpinia officinarum Hance. Key words:Alpinia officinarum Hance；HPLC；flavonoids；diarylheptanoids；quality evaluation 高良姜为姜科山姜属植物高良姜 Alpinia officinarum Hance 的干燥根茎，其性热味辛，归脾、胃经,具温胃散寒、消食止痛的功效，用于脘腹冷痛、胃寒呕吐、嗳气吞酸等 。高良姜黄酮和庚烷均具有调节钙离子释放、抗氧化应激、抗炎、调节免疫、抗病原微生物、抑制平滑肌刺激收缩、镇痛止呕等药理作用2
6、5 。高良姜含有十多种黄酮类成分6和十多种二苯基庚烷类物质7 ，其中高良姜素、山柰素4 甲醚、5 羟基7(4 羟基3 甲氧苯基)1 苯3 庚酮 (DPHA)、5 羟基1,7 双苯3 庚酮 (DPHC)含量比较高，因此本文选择这 4 个成分作为监控指标，采用 HPLC 法同时测定不同批号和来源的高良姜药材中的以上的 2 种黄酮类成分和 2 种庚烷类成分的含量，为全面准确控制药材质量提供了可行的依据。 1 仪器、试剂与材料 Waters2695/2996 高效液相色谱仪，Empower 工作站； BP210D 型电子分析天平(德国 Sartorius 公司)；高良姜素对照品、山柰素4 甲醚对照品、
7、DPHA、DPHC 对照品均为自制，经 UV、NMR、MS 确定化合物结构，以 HPLC 法按面积归一化法计，质量分数98.0；乙腈(色谱纯)；超纯水；高良姜药材为各地收集的市售产品，经广东药学院中药鉴定教研室王凤云老师鉴定均为姜科植物高良姜的根茎。 2 方法与结果 21 溶液的制备 211 对照品溶液的制备 分别精密称取高良姜素、山柰素4 甲醚、DPHA、DPHB、DPHC 对照品，加甲醇制成每 1 mL 含1.068、0.414、1.243、0.248、0.989 mg 的对照品储备液。分别精密量取上述对照品储备液各 1 mL，置 20 mL 容量瓶中，加甲醇稀释并定容至刻度，摇匀，制成对
8、照品溶液。 212 供试品溶液的制备 取不同批号的高良姜药材细粉约 0.2 g，精密称定，加甲醇约 40 mL回流提取 2 h，放冷，过滤，滤液加甲醇定容至 50 mL。摇匀，用 045 m 微孔滤膜滤过，取续滤液，作为供试品溶液。 22 色谱条件 广东药学院学报，2008，24(5)第 5 期 陈平,等.高良姜药材中 4 种有效成分的含量测定 色谱柱：Diamonsil TMC18 色谱柱(200 mm4.6 mm，5 m)；流动相：乙腈（A）0.2 磷酸水(B)，梯度洗脱030 min，AB （3942） ；3035 min，AB （4555） ，检测波长：220 nm；流速：1.0 mL
9、/min；柱温：30 ，进样量：20 L。 2. 3 系统适应性试验 分别精密吸取对照品溶液及供试品溶液各 20 L 注入液相色谱仪，计算理论板数及分离度，结果见表 1、图 1、图 2。 24 线性关系的考察 分别精密吸取对照品溶液 5、10、15、20、25 L 注入液相色谱仪，按“2.2”色谱条件测定，以峰面积积分值为纵坐标，对照品进样量为横坐标绘制标准曲线，结果见表 1。表 1 系统适应性试验结果 成分线性方程 r 线性范围/g 高良姜素 Y=4.0106 X+5.11040.999 80.267 01.328 0 山柰素4 甲醚Y=4.0106X+2.51040.999 90.103
10、40.517 0DPHAY=2.0106X+2.01040.999 90.310 81.554 0DPHCY=8.2105X+4.71030.999 40.247 31.236 0 25 重复性试验 取高良姜药材细粉（批号 20080315）约 0.2 g，精密称定，共6 份，按“212”项下的方法制备供试品溶液后，按“22”色谱条件下测定各组分的含量，结果高良姜素、山柰素4 甲醚、DPHA、DPHC 的 RSD 值(n=6)分别为 0.92、1.60、0.45、1.8，表明方法重现性良好。 26 稳定性试验 取供试品溶液(批号 20080315)1 份，分别间隔4、12、24、36、48 h
11、 进样，连续测定 2 d，计算含量，结果高良姜素、山柰素4 甲醚、DPHA、DPHC 的 RSD 值(n=6)分别为0.71、1.51、1.7、1.9，表明供试品溶液在 48 h 内测定结果稳定。 27 加样回收率试验 取高良姜药材粉末（批号 20080315）约 0.1 g，共 6 份，精密称定，置 100 mL 锥形瓶中，精密加入“2.1.1”项下的高良姜素、山柰素4 甲醚、DPHA、DPHC 对照品储备液溶液各 1 mL，按“2.1.2”项下方法制备溶液，按“22”项色谱条件操作并计算，结果见表 3。 表3 回收率试验结果 28 样品测定 对 11 批样品按上述方法进行含量测定，以外标法
12、计算高良姜中各成分的含量。结果见表 4。表 4 样品中的 4 种成分的含量 3 讨 论 3.1 提取方法的选择 比较了超声提取法、索氏提取法和回流提取法对药材中各成分的提取效果，并对不同的提取条件进行优化，结果发现回流提取法对两类成分的提取效果最好，操作简单，因此选用回流提取法提取高良姜药材制备供试品溶液。 3.2 测定波长的选择 PAD 检测器全波长扫描发现，DPHA 在 220 nm 和 285 nm 均有较大吸收峰，但是 DPHC 仅在 220 nm 处有最大吸收峰，高良姜素和山柰素4 甲醚在 267 nm 和 360 nm 处有较大吸收峰，在 220 nm 处也有末端吸收。所以选择 2
13、20 nm 作为测定波长，在无 PAD 检测器的条件下也可以应用该法，便于推广。 3.3 色谱柱和流动相的选择 比较了 DiomonsilTM C18 柱、WatersTM C18 柱和 XterrexTM C18 柱3 种色谱柱的保留行为，发现 WatersTM C18 柱保留时间过长，XterrexTM C18 柱对黄酮类物质存在严重的拖尾现象，而 DiomonsilTM C18 柱适用范围广，分离效果好，保留时间相对较短，所以选择 DiomonsilTM C18 柱。同时考察了甲醇 水、乙腈 水、乙腈 磷酸溶液、甲醇 磷酸溶液体系等，最终选用 0.2磷酸溶液 乙腈体系进行梯度洗脱，取得较
14、好峰形和较高的理论塔板数，效果满意。 3.4 指标成分的确定 7 （4 羟基3 甲基苯基）1 苯庚基4 烯3 酮（DPHB）是高良姜中二苯基庚烷类物质中的一种成分，药理作用与 DPHA和 DPHC 的药理作用相似， 但因其含量较低，不作为考察指标，所以未进行该成分的方法学考察和药材中的含量测定。 【参考文献】 1 国家药典委员会.中华人民共和国药典:2005 年版一部S.北京：化学工业出版社，2005:212. 2 BLONSKA M.Effects of ethanol extract of propolis (EEP) and its flavoneson inducible gene e
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