1、宫颈癌组织 SLeX、CD44v6 和 E Cad 表达及其临床意义【摘要】 目的 探讨细胞黏附分子唾液酸化路易斯X(SLeX) 抗原、CD44v6 和 E 钙黏附素(ECad) 在浸润性宫颈鳞癌(ICC)中的表达及其临床意义。方法 应用免疫组织化学方法，检测 60 例 ICC 组织和 20 例慢性宫颈炎（CCV）组织中 SLeX、CD44v6 和 ECad 蛋白的表达水平, 并结合临床病理特征进行分析。结果 ICC 组织中 SLeX、CD44v6 和 ECad 蛋白阳性表达率分别为 60.0%（36/60） 、66.7%（40/60）和 45.0%(27/60)。ICC 组织 SLeX 及
2、CD44v6 阳性表达率均显著高于 CCV 组织(2=18.11、10.58，P0.05)，而 ECad 阳性表达率显著低于 CCV组织(2=15.11，P0.05)。ICC 组织 SLeX 和 CD44v6 高表达及ECad 低表达与 ICC 的分化程度和淋巴转移有关（2=4.1514.61,P0.05)，但与临床分期无关（2=1.643.21，P0.05） ；SLeX 和 CD44v6 表达与 ECad 表达有关(2=7.87、7.58,P0.05)。结论 ICC 侵袭转移过程中，SLeX、CD44v6 和 ECad 表达可能具有正、负协同效应，联合检测三者表达可作为判断 ICC 预后的参
3、考指标。 【关键词】 宫颈肿瘤；肿瘤转移；唾液酸化路易斯X 抗原；CD44v6; E 钙黏附素;免疫组织化学 ABSTRACT Objective To investigate the expression and clinical significance of adhesion molecules sialyl LewisX (SLeX) antigen, CD44v6 and Ecadherin (ECad) proteins in invasive carcinoma of cervix (ICC). Methods Immunohistochemical method was use
4、d to examine the expressions of SLeX,CD44v6 and ECad in 60 cases of ICC and 20 cases of chronic cervicitis (CCV), and their association with clinical pathological features were analyzed. Results In ICC, the positive expression rates of SLeX,CD44v6 and ECad proteins were 60.0%(36/60), 66.7%(40/60) an
5、d 45.0%(27/60), respectively; which were significantly higher than those in CCV (2=18.11,10.58;P0.05). The positive ECad protein in ICC was lower than that in CCV (2=15.11,P0.05). The high expression of SLeX,CD44v6 and the low expression of ECad were positively correlated with the tumor grading and
6、lymph node metastasis of ICC (2=4.15-14.61,P0.05), but not significantly correlated with FIGO staging (2=1.64-3.21,P0.05). The expression of SLeX and CD44v6 were correlated with ECad (2=7.87,7.58;P0.05). Conclusion In the process of invasion and metastasis of ICC, the expressions of SleX, CD44v6 and
7、 ECad may have a positivenegative synergistic effect. Combined detection of the above three items can be used as a reference to predict the prognosis of ICC. KEY WORDS uterine cervical neoplasms; neoplasm metastasis; sialyl LewisX antigen; CD44v6; Ecadherin; immunohistochemistry 肿瘤的侵袭与转移是一个复杂的生物学过程，
8、受多种基因的调控，其中细胞黏附分子（CAM）异常表达在肿瘤形成、侵袭和转移过程中起着关键作用。唾液酸化的路易斯X （SLeX） 、CD44v6 和 E 钙黏附素（ECad ） 均为 CAM 成员，其表达与许多肿瘤的侵袭和转移密切相关17 。本文应用免疫组化方法检测宫颈鳞癌（ICC）和慢性宫颈炎（CCV）组织中 SLeX、CD44v6 和 ECad 蛋白表达情况，探讨这 3 种 CAM表达与 ICC 的发生发展、临床分期、分化程度及转移的关系。现将结果报告如下。 1 材料和方法 1.1 材料 1.1.1 标本及其来源 取我院 2004 年 1 月2008 年 12 月间手术切除、并经病理诊断为I
9、CC 标本 60 例，病人年龄 2378 岁，平均（57.678.32）岁。按细胞分化程度分为高分化癌 25 例，中、低分化癌 35 例。无淋巴结转移者 26例，有淋巴结转移者 34 例。临床病理分期采用国际妇产科联盟（FIGO,2000）宫颈癌的分期法：a 期 9 例，b 期 20 例，a 期 31 例。取同期 CCV 组织 20 例作为对照。所有标本均经 40 g/L 甲醛固定，石蜡包埋，连续切片，片厚 45 m。 1.1.2 试剂 鼠抗人 SLeX（CD15s） 、CD44v6 和 ECad 单克隆抗体和 LSAB 试剂盒均为丹麦 Dako 公司产品（均为即用型） 。 1.2 方法 1.
10、2.1 SLeX、CD44v6 和 ECad 蛋白检测 采用免疫组织化学 LSAB 法，将切片常规脱蜡水化后，放入枸橼酸缓冲液(10 mmol/L,pH 6.0)内，用微波仪 170 W 辐射 5 min，冷却后水洗。其他操作流程同常规 LSAB 法，不同之处为 3 步抗原孵肓和正常血清封闭使用微波仪 130 W 分别辐射 5 min，保温 2 min 即可。实验用已知SLeX、CD44v6 和 ECad 阳性食管癌组织作为阳性对照，用磷酸盐缓冲液（PBS）代替一抗作为阴性对照。H2O2DAB 显色。 1.2.2 结果判断 SLeX、CD44v6 和 ECad 阳性表达者细胞质和细胞膜显示棕黄
11、色染色颗粒，凡无棕黄色染色颗粒者为阴性。 1.2.3 统计学处理 采用 2 检验，以 P0.05 为差异有显著性。 2 结果 2.1 SLeX、CD44v6 和 ECad 在宫颈良恶性病变组织中的表达 免疫组织化学染色显示，SLeX 和 CD44v6 阳性产物定位于细胞膜和细胞质，背景清晰；ECad 阳性产物位于细胞质，背景清晰。20 例 CCV 中，SLeX 均为阴性表达；5 例(25.0%)CD44v6 阳性表达，阳性染色主要表达于基底层细胞膜上，表层细胞无表达；20 例的 ECad 均呈不同程度阳性表达。ICC 组织中，SLeX、CD44v6 和 ECad 的阳性表达率分别为60.0%（
12、36/60） 、66.7%（40/60）和 45.0%(27/60)。ICC 组织中 SLeX 和CD44v6 阳性表达率显著高于 CCV（2=18.11、10.58，P0.05） ，ECad 阳性表达率显著低于 CCV（2=15.11，P0.05） 。 2.2 SLeX、CD44v6 和 ECad 表达与 ICC 临床病理特征的关系 ICC 组织 SLeX 和 CD44v6 高表达及 ECad 低表达与 ICC 的分化程度和淋巴结转移有关（2=4.1514.61,P0.05)，但与临床分期无关（2=1.64 3.21，P0.05） 。见表 1。表 1 SLeX、CD44v6 和ECad 与
13、ICC 临床病理特征的关系临床病理特征 nSLeX 阳性（略） 2.3 ICC 组织 SLeX、CD44v6 和 ECad 表达之间的关系 在 SLeX 阳性表达的 36 例 ICC 中，CD44v6 和 ECad 的阳性表达分别为 29 例(80.6%)和 11 例(37.6%)；而在 SLeX 阴性表达的 24 例 ICC 中，CD44v6 和 ECad 阳性表达分别为 11 例(45.8%)和 16 例(66.7%),差异均有显著意义(2=7.81、7.87,P0.05)。在 CD44v6 阳性表达的 40 例ICC 中, ECad 阳性表达 13 例(32.5%)；在 CD44v6 阴
14、性表达的 20 例 ICC病人中，ECad 阳性表达 14 例(70.0%)，差异有显著性(2=7.58,P0.05)。 3 讨论 SLeX 抗原是表达在胚胎和肿瘤组织细胞膜表面的糖脂及糖蛋白聚糖上的一组唾液酸化糖缀合物,是糖蛋白的末梢寡糖，为 CAM 选择素 P 和 E（CD62P 和 CD62E）所识别的配基1，属 CAM 成员。SLeX 可诱导血管内皮细胞黏附，介导肿瘤细胞与基质成分或内皮细胞相关受体结合，从而在肿瘤的侵袭和转移过程中起着关键性作用2。研究证实，SLeX 表达增强常出现在细胞的致癌和肿瘤的进展过程中，SLeX 阳性表达的肿瘤侵袭性强，转移及复发率高，病人存活率低23 。C
15、D44v6 是最早被发现的含有变异型外显子 v6 编码序列的 CD44 分子，也是近年来研究较多的黏附分子,其在人体组织中分布极为广泛，被认为是肿瘤转移促进基因，可赋予肿瘤细胞以转移能力。CD44v6 的过量表达与多种人体恶性肿瘤的发生发展、侵袭转移和不良预后密切相关，是判断肿瘤生物学行为及预后因素的重要标志36 。ECad 是钙黏附蛋白分子家族中跨膜蛋白亚型的一种，主要存在于人和动物的上皮细胞，对维护上皮细胞的形态和结构完整性起着重要作用。ECad 主要介导同型细胞的黏附功能，当其表达下降或缺失时，同种细胞无法相互粘连，进一步使细胞易于分散而向外周浸润，可导致肿瘤细胞侵袭性生长与转移，这已在
16、许多恶性肿瘤的研究中得到证实3,69 。本研究结果显示，在 CCV 组织中 SLeX 不表达,CD44v6 仅表达于基底细胞和（或）内基底细胞，阳性表达率为25.0%；ECad 均呈不同程度阳性表达。在 ICC 组织中 SLeX 和 CD44v6 阳性表达率均显著高于 CCV，ECad 阳性表达率则显著低于 CCV。随着 ICC分化程度减低和淋巴结转移，SLeX 和 CD44v6 阳性表达率显著增高，而ECad 阳性表达率则显著降低。表明 SLeX 和 CD44v6 表达的上调和ECad 表达的下调与 ICC 的发生密切相关,并在 ICC 的细胞分化和转移过程中起重要的作用。检测三者基因蛋白表
17、达，不仅是研究 ICC 发生发展的较可靠的重要标志物,而且对宫颈良恶性病变辅助诊断、判断肿瘤恶性程度、生物学行为及病人预后也是一个较可靠的、具有较大价值的参考指标。 本研究结果还显示，ICC 组织中 SLeX、CD44v6 和 ECad 表达之间有关。提示 SLeX、CD44v6 和 ECad 表达在 ICC 的发生、细胞增殖、分化和转移的病理过程中具有相互诱导的调节或负调节的协同作用。因此，深入探讨它们之间的作用及机制，将对阐明或阻断肿瘤侵袭转移具有重要意义。 【参考文献】 1YAMAGUCHI A, GOI A, SEKI K, et al. Clinical significance o
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