1、黄芪多糖对环磷酰胺致小鼠骨髓抑制及毒性的保护作用作者：张琰, 程建峰, 贺建荣, 覃华 【摘要】 目的： 研究黄芪多糖（Astragalus Polyaaccharidcs, APS）对环磷酰胺(Cyclophosphamidecy, Cy)所致小鼠骨髓抑制及其毒性的保护作用. 方法： 用流式细胞仪测定 CD4/CD8 T淋巴细胞亚群及其比值，常规计数外周血白细胞数量及骨髓有核细胞数量，观察 25, 50和100 mgkg-1的 APS对小鼠 Cy骨髓抑制的保护作用；同时采用LD50剂量法，观察 APS对小鼠 Cy毒性的保护作用. 结果： 给予 3种不同剂量 APS后，小鼠 Cy毒性明显下降；
2、存活率分别提高 20%，30%和50%，其中以 100 mgkg-1 APS保护作用最为明显(P0.05）. 与对照组相比，100 mgkg-1 APS组小鼠 Cy有核细胞和外周血白细胞数量分别升高(1.40.3 vs 2.50.5)104L-1 (P0.01)和(4.60.7 vs 8.61.2)109L-1 (P0.01)，CD4/CD8 T淋巴细胞比值接近正常对照组. 结论： APS对 Cy致小鼠骨髓抑制及其毒性有明显保护作用,该作用呈剂量依赖性. 【关键词】 黄芪多糖；环磷酰胺；骨髓抑制； 小鼠 0 引言 黄芪多糖（astragalus polyaaccharidcs, APS）是从黄
3、芪根中提取的一类大分子活性成分，自 1981年提取以来，一系列药理研究表明，APS可使环磷酰胺（cyclophosphamidecy, Cy）所致免疫低下小鼠的溶血空斑计数增加；提高小鼠粒系祖细胞数量1 ；APS 还能增强 NK细胞活性，刺激 NK细胞增殖，增强人体免疫力和抗应激反应能力，对机体的免疫和造血系统具有明显的保护作用2,3. 本实验旨在研究 APS对 Cy所致小鼠骨髓抑制及其毒性的保护作用，以及该作用的量效关系，为 APS临床期药理研究提供实验依据. 1 材料和方法 1.1 材料昆明种小鼠 100(75,25)只，体质量(20.02.0) g（中国科学院实验动物中心提供 No. 0
4、05）. 分笼饲养，采用标准化光照及喂食，自由饮水，实验前 12 h开始禁食. APS由西安医科大学药学院天然药化研究室提供；注射用 Cy：0.2 g/瓶(江苏恒瑞医药股份有限公司生产，批号 0009153)，醋氨酚(Aldrich 公司产品，批号 2005330), CD4, CD8 mAb购于晶美生物工程有限公司, CD4FITC(批号 010640，克隆号 RM45)；CD8FITC(批号 MC A1108；克隆号 YTS105.18). BP650型流式细胞仪，美国 BP公司制造（Becton Dickiusoh Facscan）. 1.2 方法 1.2.1APS 对 Cy小鼠毒性的影
5、响小鼠 50只，随机分成 5组，每组10只，适应期 1 wk. Cy+APS组小鼠以灌胃法按 25 mgkg-1给予 1.25 gL-1的 APS；Cy+APS组小鼠以灌胃法按 50 mgkg-1给予 1.25 gL-1的 APS ；Cy+APS组小鼠以灌胃法按 100 mgkg-1给予 1.25 gL-1的 APS；正常组与Cy组以灌胃法给予等量注射用水；连续给药 4 d后，除正常组给予注射用水外，其余 4组腹腔注射 10 gL-1的 Cy 200 mgkg-1. 其后，观察 48 h内小鼠死亡只数. 1.2.2APS 对 CY致小鼠骨髓抑制及 T淋巴细胞亚群改变的影响 50只小鼠，, 各半
6、，随机分成 5组，每组 10只，, 各 5只. 适应 1 wk后，除正常组与 Cy组给予等量注射用水灌胃外，Cy+APS组小鼠以灌胃法按 25 mgkg-1给予 1.25 gL-1的 APS；Cy+APS组小鼠以灌胃法按 50 mgkg-1给予 2.5 gL-1的APS；Cy+APS组小鼠以灌胃法按 100 mgkg-1给予 5 gL-1的 APS；其连续给药 13 d. 于给药后 4 d开始，除正常组给予等量注射用水外，其余 4组均以腹腔注射方法按 25 mgkg-1给予 1.25 gL-1 的 Cy，1 次d-1，连续 7 d. 于给予APS后第 14日，眶后取血，采用流式细胞仪检测外周血
7、 CD4/CD8 T淋巴细胞亚群数量，计算其比值，常规计数外周血白细胞数量;并取双侧股骨行骨髓有核细胞计数. 统计学处理： 所有资料采用 xs表示，用单因素方差分析加Dunnett法组间两两比较，进行显著性检验. 定性资料采用 2 分析进行显著性检验. 2 结果 APS 可引起 Cy所致小鼠 T淋巴细胞亚群的改变，同时可缓解 Cy对小鼠外周血白细胞和骨髓有核细胞的抑制作用（表 1） ， APS对 CY所致小鼠的毒性有影响(表 2）. 表 1APS对 Cy致小鼠 T淋巴细胞亚群、白细胞及骨髓有核细胞的影响（略） 表 2APS对 CY小鼠毒性的保护性试验结果（略） 3 讨论 Cy 是一种免疫制剂，
8、临床上主要用于治疗肿瘤、自身免疫性疾病和器官移植等. Cy 的主要不良反应是对免疫功能和造血系统具有抑制作用，对其目前尚无有效防治手段. 黄芪具有补气益卫，托毒生肌等功效，是诸多补血或补气方剂中的重要组成成分. 我们的试验结果表明，给小鼠口服 APS后，其对 Cy毒性的耐受性明显增强，依照给药剂量的大小，存活率提高 20%, 30%和 50%. 与阳性对照组相比，100 mgkg-1 APS组小鼠骨髓有核细胞和外周血白细胞分别升高了 86%和 72%，说明 APS对 Cy所致的小鼠免疫和骨髓抑制毒性有明显保护作用，且该作用呈剂量依赖性. 本次实验结果为APS的临床期药理研究提供了实验依据. 提
9、示临床联用 Cy和 APS治疗肿瘤的疾病时，可降低 Cy的毒副作用且可起到协同作用. 小鼠腹腔注射 Cy后，外周血白细胞和骨髓有核细胞明显减少，CD4/CD8T淋巴细胞亚群比值降低，说明这些小鼠的免疫系统和造血功能受到抑制，Cy 模型的建立是成功的. 其 48 h死亡率为 80，说明我们选择的 Cy剂量符合实验要求. APS 调节免疫功能、保护造血系统的作用机制仍不十分清楚. 最近，Shon等4采用内毒素诱导人膜细胞炎性变，研究了 APS的抗炎作用. 发现 APS对内毒素诱生的白介素 6、前列腺素 E2和白三烯 C4有明显抑制作用，但对肿瘤坏死因子 无影响，APS 药理作用的确切机制，有待进一
10、步研究. 【参考文献】 1 Shan JJ, Wang SC, Liu D, Hu ZB. Progress of chem.ical and pharmacyological study of astagaluspolysaccaride J. Shanghai Zhongyiyao Xuebao (Acta Univ Tradit Med Sin Pharmacol Shanghal), 2000; 14(3): 41-43. 2 Xia HS, Li KS, Zhang YF, Jia XQ, Li YH. Effect of astragalus polysaccharides onD
11、XMinducedspleen lymphocyte apoptosis J. Shengzhen Zhongxiyijiehe Zazhi (Shenzhen J Integ Tradit Chin West Med), 2001;11(4):193-196. 3 Zang XM, Miao RS, Tang Y, Li Y. The effect of interleukin2 and astragalus polysccharide on the activity and proliferation of human natural killer cells J. Beijing Zhongyiyao Xuebao (Chin J Beijing Unive TCM), 2000；23（Suppl）：37-39. 4 Shon YH, Kim JH, Nam KS. Effect of Astragali radix extract on lipopolysaccharideinduced inflammation in human amnion J. Biol Pharm Bull, 2002; 25(1): 77-80.
