1、口腔鳞癌中 Ets-2、MMP-9 表达及其意义【摘要】 目的 探讨 Ets-2、MMP-9 在口腔鳞癌中的表达。方法 应用PV-9000 两步免疫组织化学染色法检测 Ets-2、MMP-9 在 68 例口腔鳞癌组织、19 例口腔粘膜上皮异常增生组织和 15 例正常口腔粘膜组织的表达情况，分析其在口腔粘膜癌变过程中的变化趋势及在各组间表达的差异。结果 1.Ets-2 三组总体及组间比较均有显著性差异(P0.05)；在 OSCC患者按年龄、性别、瘤体大小等分组间比较 Ets-2 的表达无显著性差异(P0.05)；在按有无淋巴结转移、临床分期等分组间比较 Ets-2 的表达差异有显著性差异(P0.
2、05)。2. MMP-9 的表达三组总体差异及组间差异均有统计学意义(P0.05)。在 OSCC 患者按年龄、性别、瘤体大小等分组间比较 MMP-9 表达无显著性差异(P0.05)；在按有无淋巴结转移、临床分期等分组间比较 MMP-9 的表达差异有显著性差异(P0.05)。3.在口腔鳞癌组织中，Ets-2 与 MMP-9 的表达存在正相关关系(r=0.153，P0.05)。结论 Ets-2、MMP-9 的异常表达可能在口腔鳞癌的发生发展中起重要的作用。【关键词】 口腔鳞状细胞癌 Ets-2 MMP-9 免疫组织化学【Abstract】 Aim To investigate the expres
3、sion of Ets-2、MMP-9 in oral squamous cell carcinorma.Methods The two-step immunohistochemistry technique (PV-9000), was used to discover the expression of Ets-2 and MMP-9 in 68 OSCC tissues, 19 DOM tissues and 15 NOM tissues, and to analyze their expressions in different tissues. Results 1 As to the
4、 expression of Ets-2,statistical significance was observed between the highly and moderately as well as poorly groups (P0.05),but not between moderately and poorly groups(P=0.534).The results showed there was no significant difference between the groups divided by sex, age and size of tumor(P0.05),b
5、ut it linked with lymph node metastasis and TNM stage (P0.05).2 As to the expression of MMP-9,statistical significance was observed between the highly and moderately as well as poorly groups (P0.05),but not between moderately and poorly groups(P=0.589).The results showed there was no significant dif
6、ference between the groups divided by sex, age and size of tumor(P0.05), but it related with lymph node metastasis and TNM stage(P0.05).3 There was positive correlation between Ets-2 and MMP-9 in oral squamous cell carcinorma(r=0.153,P0.005). Conclusion The imbalance of Ets-2、MMP-9 may play an impor
7、tant orl in the occurrence and development of oral squamous cell carcinorma.【Keywords】 Oral squamous cell carcinoma Ets-2;MMP-9 immunohisto- chemistryEts-2（人红血细胞增多症病毒致癌基因同源体 2）是 Ets 家族转录因子的一员，它在肿瘤、骨发育和免疫应答中扮演重要角色1。它在膀胱癌、肝癌、乳腺癌等中高表达，故而有学者把它列为一种致癌基因。MMP-9 则属于型胶原酶或明胶酶。在正常的生理情况下，基质金属蛋白酶和基质金属蛋白酶组织抑制因子(Ti
8、ssue Inhibitors of Metalloproteinases，TIMPs)保持在一定的平衡状态，从而维持机体的正常状，使组织屏障的完整性得以维护2。在肿瘤发展的过程中，MMP-9 通过降解细胞外基质(Extracellular Matrix, ECM)中的型胶原使癌细胞突破原发部位正常的基底膜(Basement Membrane, BM)而发生浸润及转移。1 资料与方法1.1 临床资料选取郑州大学口腔医学院、河南省肿瘤医院、郑州大学第一附属医院 2005-2008 年手术切除的，且术后经病理检查确诊的原发口腔鳞状细胞癌(Oral Squamous Cell Carcinoma，O
9、SCC )石蜡包埋标本 68例。其中患者年龄 35-79 岁，男性 40 例，女性 28 例；所有患者均为首次治疗，且手术前未行放疗或化疗。全部标本均经常规福尔马林固定，石蜡包埋，4m 连续切片，分别用 HE 染色及免疫组化染色。肿瘤直径小于 4cm 者 44 例，不小于 4cm 者 24 例；有淋巴转移 38 例，无颈淋巴结转移 30 例；按鳞癌病理分级法，其中高分化鳞癌 29 例、中分化鳞癌 25 例、低分化鳞癌 14 例；肿瘤分期根据 UICC2002 标准，按 TNM 分期，期-期 38 例、期-期 30 例。1.2 主要试剂 鼠抗人 Ets-2 单克隆抗体（即用型） ，鼠抗人 MMP
10、-9 单克隆抗体浓缩液，PV-9000 通用型两步法免疫组化染色试剂盒，均购自北京中山生物技术有限公司。1.3 免疫组化检测 采用 PV-9000 两步免疫组织化学染色法检测，用已知阳性切片作为阳性对照，均以 PBS 液代替一抗作为阴性对照。1.4 结果判定 Ets-2:阳性染色定位于细胞浆；MMP-9 阳性染色于细胞胞膜或胞浆。于显微镜下随机记数 4 个视野(1040 倍)，至少计数共 400个细胞，计算平均每个视野下的阳性染色细胞数。用 LI 评价其表达水平。以阳性细胞比率5%为(-)，阳性细胞比率 5-20%为(+)，阳性细胞比率20%为 (+)3。1.5 统计学处理应用 SPSS13.
11、0 统计软件，两组间比较、多组间的两两比较采用秩和检验(Wilcoxon 两样本比较法)，x2 检验，相关性分析采用Spearman 等级相关分析。取 =0.05 为显著性检验水准。2 结果2.1 Ets-2 在正常组织、上皮异常增生和口腔鳞癌组织的表达，差异有统计学意义（x2=49.575，P0.05） 。MMP-9 在正常组织、上皮异常增生和口腔鳞癌组织的表达，差异有统计学意义（x2=59.346，P0.05） 。2.2 OSCC 中 Ets-2、MMP-9 的表达呈正相关。表 1. Ets-2 在正常黏膜、上皮异常增生黏膜、口腔鳞癌中的表达图 1Ets-2 在 OSCC 中的表达 （40
12、0） 图 2MMP-9 在 OSCC 中的表达 （400）Fig.1 Expression of Ets-2 in OSCC Fig.2 Expression of MMP-9 in OSCC 3 讨论目前己明确 Ets 家族具有诸多的生物学功能，其中有参与细胞的生长分化、血管生成、肿瘤发生以及细胞迁移等过程4。Ets-2 基因定位与 21号染色体，是原癌基因家族中的一员，能够抑制细胞凋亡5。诸多研究表明，在多种肿瘤中组织中，Ets-2 有异常的表达6,7。本研究结果显示， 在 OSCC 中 Ets-2 的表达与分化程度和临床分期有关。提示 Ets-2在 OSCC 的发生发展中发挥关键的作用。
13、因此，提示 Ets-2 有可能作为一个评价 OSCC 生物学行为的指标，检测 Ets-2 有助于口腔鳞癌的早期诊断及预后评定，指导临床治疗。MMP-9 属于型胶原酶，相对分子量较大，达到 92KD；其人类基因定位于 20q12-q13。研究表明8MMP-9 与人体许多疾病有关，包括心血管疾病及癌症。Chen 等9等研究表明 MMP-9 可以作为一个有效的指标作为判定口腔扁平苔藓潜在癌变的可能性。李珊昌等10认为 MMP-9 可以作为舌鳞癌早期诊断的指标。本研究验证了 MMP-9 在 OSCC 的高表达，能够反映肿瘤组织的侵袭力，能够评定肿瘤恶性程度及预测预后等。口腔鳞癌中 Ets-2、MMP-
14、9 的表达呈正相关关系，提示 MMP-9 作为蛋白水解酶，能够降解 ECM 及 BM，促进癌细胞的转移，而 Ets-2 可能通过某种机制调控MMP-9 的表达来影响肿瘤的生物学特性。总之,Ets-2 和 MMP-9 在口腔鳞癌的发生发展中发挥着重要的作用，探讨两者者在 OSCC 发生发展中所发挥的作用，能够为 OSCC 的早期诊断、治疗以及及评估预后提供重要的参考价值。参考文献1Andrea P,Mario C,Aristoteles N,et al.Gene expression profiles of CD34+ cells in myelodysplastic syndromes: in
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