1、雷公藤和昆明山海棠植物根中化学成分的薄层色谱对比研作者：黄耀峰， 龚受基， 黄林， 秦秀英， 裴蕾【摘要】 目的研究雷公藤和昆明山海棠两种植物在临床疗效上存在相似性的原因。方法采用乙醚、氯仿、醋酸乙酯等有机溶剂对雷公藤和昆明山海棠根顺序热提取。通过对其提取液经浓缩后的相对应部位进行薄层色谱对比、化学成分的预测和熔点的测定来判别两种植物的差异。结果雷公藤和昆明山海棠两种植物所含的化学成分基本一致。其薄层色谱法的对比结果，可作为雷公藤和昆明山海棠植物的生药鉴定，以及判断质量的指标。结论雷公藤和昆明山海棠两种植物在临床疗效上具有相似性，主要原因是这两种植物具有很多相同的化学成分。 【关键词】 雷公藤
2、; 昆明山海棠; 化学成分; 薄层色谱法雷公藤 Triptergiumwilfordii Hook.f.和昆明山海棠T.hypoglaucum (Levi.) Hutch.是属于卫茅科雷公藤属植物，药用部位为根，临床用于治疗类风湿性关节炎、红斑狼疮、多型肾炎及麻风病等13，均有一定疗效，且两者在临床上疗效有许多相似点。从植物形态上看，两者也十分相似，雷公藤被面为绿色，而昆明山海棠被面为粉白色4。据文献报道，雷公藤根中主要含有生物碱，卫茅醇，二萜内酯，三萜类化合物等5,6。两者目前国内研究取得重大进展的是抗生育及抗癌研究方面79。本研究是以乙醚、氯仿、醋酸乙酯等有机溶剂对雷公藤和昆明山海棠植物根
3、顺序热提取。其提取液经浓缩后的相对应部位进行薄层色谱对比、化学成分的预测和熔点的测定来判别两种植物的差异，寻找雷公藤和昆明山海棠两种植物在临床疗效上具有相似性的原因，供临床研究需要。1 材料与仪器1.1 药物与试剂雷公藤根购自桂林市药材站。昆明山海棠根由桂林市药品检验所提供。两种药品均已按照文献方法，作生药学鉴定。乙醚为广州化学试剂二厂生产，批号 081014。氯仿由上海试剂一厂生产，规格 GB-682-65，批号 081216。醋酸乙酯由上海试剂一厂生产，批号080916。其它试剂均为分析纯。1.2 仪器高速粉碎机，上海中药机械厂，型号 SF-1703;烘箱，上海市实验仪器厂，型号 101-
4、2 型;干燥器，上海玻璃仪器一厂生产。2 方法与结果2.1 薄层色谱板的制备取 E.meick 硅胶 27.5 g，加 0.5%(W/V)羧甲基纤维素钠的上清液80 ml，充分拌匀，加数滴乙醇，倒入清洁的两块 3 mm 厚的玻璃中间，另取一块边缘光滑的玻片，从一端刮向另一端而成，室温空气干燥后，置 105烘箱活化 30 min，然后放入干燥器中备用。2.2 实验样品的制备取雷公藤根粉(或昆明山海棠根粉)分别置于连续提取器中，顺次以乙醚，氯仿，醋酸乙酯连续提取，每种溶剂在更换之前，使提取液呈无色透明为止。提取液过滤浓缩，浸膏干燥除去溶剂，分别得到相应的乙醚，氯仿，醋酸乙酯等 3 个提取部分，供分
5、离、鉴别。2.3 工艺流程图见图 1。图 1 工艺流程图2.4 乙醚提取液的薄层对照雷公藤根(或昆明山海棠根)粉经乙醚连续提取后，乙醚液过滤，浓缩至浆状物，分别称取 0.1 g 加入乙醚至10 ml，用血色素管点样 30 l,薄层对照，点好样的薄层板：置于盛有石油醚醋酸乙酯=82 的展开缸内饱和 1 h，然后展开，展距 14 cm，展毕除去展开剂,于紫外灯下观察萤光。结果见图 2。由图 2 可知，采用乙醚提取液，石油醚和醋酸乙酯为展开剂的薄层对照，雷公藤有 8个斑点，昆明山海棠有 10 个斑点，表明雷公藤从 18 的斑点与昆明山海棠的 18 斑点相同，这说明含有相同的化学成分;置于盛有环己烷醋
6、酸乙酯冰醋酸=202.50.7 的展开缸内直接展开，展距 14 cm，展毕除去展开剂后于紫外灯下观察萤光。结果见图 3。由图 3 可知，采用乙醚为提取液，环己烷、醋酸乙酯及冰醋酸为展开剂的薄层对照，雷公藤及昆明山海棠均有 11 个斑点，说明化学成分相同。 图 2 雷公藤和昆明山海棠乙醚 图 3 雷公藤和昆明山海棠乙醚提取液的薄层对照(展开剂：石 提取液的薄层对照(展开剂：环油醚和醋酸乙酯) 己烷、醋酸乙酯及冰醋酸)2.5 氯仿提取液的薄层对照雷公藤根(或昆明山海棠根)经乙醚提取后的根粉继续用氯仿连续提取，提取液过滤，浓缩呈浆状物，分别称取 0.1 g 加入氯仿至 10 ml，用血色素管点样 2
7、0 l 薄层对照，点好样的薄层板：置于盛石油醚醋酸乙酯=82 的展开缸内饱和 1 h，然后展开，展距 14 cm，展毕除去展开剂后于紫外灯光下观察萤光。结果见图4。由图 4 可知，采用氯仿提取液，石油醚和醋酸乙酯为展开剂的薄层对照，雷公藤含有 8 个斑点，昆明山海棠含有 6 个斑点，表明雷公藤 16的斑点与昆明山海棠 16 的斑点相同，这说明含化学成分相同;置于盛环己烷醋酸乙酯冰醋酸=202.50.7 的展开缸内直接展开，展距14 cm，展毕除去展开剂后于紫外灯下观察萤光。结果见图 5。由图 5 可知，采用氯仿为提取液，环己烷、醋酸乙酯及冰醋酸为展开剂的薄层对照，雷公藤和昆明山海棠均含有 8
8、个斑点，说明化学成分相同。氯仿浓缩的浆状物加入石油醚(6090),反复洗涤分得石油醚部分和不溶的黄色固体物。黄色固体物的熔点为 92112。对三氯化铁，铁氰化钾，重氮化试剂，4-氨基安替匹林-铁氰化钾，酸酐-浓硫酸，氯仿-浓硫酸呈阳性反应，提示内含酚性化合物和萜甾类。图 4 雷公藤和昆明山海棠氯仿 图 5 雷公藤和昆明山海棠氯仿提取液的薄层对照(展开剂：石 提取液的薄层对照(展开剂：环油醚和醋酸乙酯) 己烷、醋酸乙酯及冰醋酸)2.6 醋酸乙酯提取液的薄层鉴别和薄层对照雷公藤根(或昆明山海棠根)经乙醚、氯仿连续提取后，继以醋酸乙酯连续提取，过滤浓缩至小体积，放置析出沉淀物，过滤，滤饼洗涤干燥得(
9、A)样品,母液连续浓缩至干呈浆状物，加入乙醚分得乙醚可溶部分(B)和乙醚不溶部分(C)。2.6.1 A 样品的鉴别对照雷公藤根(或昆明山海棠根)的醋酸乙酯提取部分 A 样品为砖红色粉末，熔点295能溶于乙醇，氢氧化钠和碳酸氢钠，对三氯化铁-铁氰化钾，重氮化试剂呈阳性反应，提示为多元酚类化合物。2.6.2 B 样品的薄层对照 B 样品为醋酸乙酯提取液中的可溶于乙醚部分，除去乙醚至浆状物，分别称取 0.1 g 加入乙醚至 10 ml，用血色素管点样 20 l,薄层对照，点好样的薄层板:置于盛有石油醚醋酸乙酯=82 的展开缸内饱和 1 h，然后展开，展距 14 cm，展毕除去展开剂后于紫外灯下观察萤
10、光。结果见图 6。由图 6 可知，采用醋酸乙酯为提取液，石油醚和醋酸乙酯为展开剂的薄层对照，雷公藤及昆明山海棠均含有 6 个斑点，提示化学成分相同;置于盛有环己烷醋酸乙酯冰醋酸=202.50.9 的展开缸内直接展开，展距 14 cm，展毕除去展开剂于紫外灯光下观察萤光。结果见图 7。由图 7 可知，采用醋酸乙酯为提取液，环己烷、醋酸乙酯及冰醋酸为展开剂的薄层对照，雷公藤有 11 个斑点，昆明山海棠有 10 个斑点，提示雷公藤第 11 个斑点与昆明山海棠不同外，其他相同，说明所含化学成分相同。2.6.3 乙醚不溶部分 C 样品对照 雷公藤根和昆明山海棠根的醋酸乙酯提取液中的乙醚不溶物能溶于乙醇，
11、氯仿，氢氧化钠的稀液中，加酸后又使液体浑浊产生沉淀，加热后先软化，然后燃烧发出浓烟，并具有松节油类的味，故认为是树脂。图 6 雷公藤和昆明山海棠醋 图 7 雷公藤和昆明山海棠酸乙酯提取液的薄层对照 醋酸乙酯提取液的薄层对照(展开剂：石油醚和醋酸乙酯) (展开剂：环己烷、醋酸乙酯及冰醋酸)3 讨论本实验采用乙醚、氯仿、醋酸乙酯等有机溶剂分别对雷公藤和昆明山海棠植物根顺序热提取。其提取液经浓缩后的相对应部位的酯溶性部分进行预试，观察到它们这三部分对 5%磷钼酸乙醇液，1%香兰素-盐酸试剂，酸酐-浓硫酸，三氯化铁-铁氰化钾，氯仿-浓硫酸，重氮化试剂，4-氨基安替匹林-铁氰化钾，斐林试剂，2，4-二硝
12、基苯肼，氨性硝酸银均呈阳性反应。结果提示，酯溶性成分中含萜甾类、酯性物质、醛酮化合物、酚类化合物和不饱和化合物。通过实验可以看出雷公藤根和昆明山海棠根在各相对应的分离过程中均能取得相对应的化学成分，这可从薄层色谱(见图 27)预试、熔点的对比上反映出来，我们认为雷公藤和昆明山海棠植物根中所含的化学成分基本是一致的10,11。因此，雷公藤和昆明山海棠在临床上的用途以及产生的副作用显然有相似之处。若要提取、分离雷公藤中某种单体有效成分供研究之用，要注意选用药材的品种、部位和质量，以降低生产成本。实验结果对进一步研究雷公藤及昆明山海棠在临床上的应用，对进一步分离、提纯雷公藤及昆明山海棠所含的化学成分
13、及研究各化学成分的结构将起到一定的参考作用。其薄层色谱层析法的检查结果可作为雷公藤和昆明山海棠植物的生药鉴定，以及判断质量的指标。薄层鉴定结果也可以作为临床用药参考，提高治疗效果和减少用药毒性。【参考文献】1 苗抗立，张晓康，董 颖.雷公藤属植物化学成分的药理研究J.中国现代临床学,2005，4(4)：35.2 周激文，周争立，李文琦.昆明山海棠提取物的活性研究及其成分分析J.中国中医药信息杂志，2002，9(5)：44.3 张航行，耿会玲，杨维霞. 昆明山海棠的化学成分及药理活性研究进展J.动物医学进展，2002，23(6) :122.4 黄先石，邹忠梅，刘新平.昆明山海棠的鉴别研究J.中草
14、药，1986，17(1) :33.5 阙慧卿, 耿莹莹.雷公藤化学成分的研究J.中草药，2005，36(11) ：52.6 夏 焱，高文远.雷公藤属药用植物的研究进展J.中草药，2005，36(7)：39.7 尹新芹，张东升.雷公藤的临床作用进展J.医学综述，2001，7(7)：438.8 王瑶瑶，于俊生.中药拮抗雷公藤多甙抗生育活性的研究J.吉林中医药, 2008，28(2):143.9 李贤光.昆明山海棠与雷公藤药理学对照研究J.昆明医学院学报，2006，27(2)：107.10 Jiny,Wei Y,Xiong L,et al.Differential regulationof survivin by p53 contributes to cell cycle dependent-apoptosisJ.Cell Res ,2005,15(5) :361.11 Carter BZ,Makd H,Schober WD,et al .Triptolideinduces caspasedependent cell death mediated viathe mitochondrial pathwayinleukemic cellsJ.Blood,2006 ,108(2) :630.
