1、冷沉淀制备方法及质量影响因素【关键词】 冷沉淀; 制备; 质量冷沉淀是用新鲜冰冻血浆为原料制备的一种成分血，主要用于血友病甲、血管性血友病、纤维蛋白原缺乏症患者，也可用于手术后出血、严重外伤及 DIC 等1 。因冷沉淀中的因子为不稳定因子，受多种因素影响，所以每袋冷沉淀因子含量各不相同，现将本中心的冷沉淀制备方法及质量因素影响分析汇报如下。1 材料与方法1.1 材料与仪器大容量低温离心机(CrYOFUge6000),日本日立公司生产的速冻冰箱(SanYO ),美国 CYTOTHERM 公司生产的 CT-4T.6C 型自动摇摆式恒温水浴溶化箱，日本产 SYSMaX(CA-50)凝血因子分析仪，韩
2、国产热合机(SE250)。1.2 冷沉淀原料浆制备采用费森尤斯卡比(广州)生产的密闭四联袋，采集 400ml 全血 6h内离心分离制成血浆 60 袋(20010ml)，将血浆迅速置-80速冻机内，冻结后置-30冰箱备用。1.3 制备冷沉淀取 60 袋血浆置室温中放置 3min，待连接两袋的塑料管变软后分两组(A、B)放入低温水浴箱中(46)，A 组 30 袋用水浴虹吸法制备冷沉淀，B 组 30 袋用快速溶化离心法制备冷沉淀，计时。A 组新鲜冰冻血浆融化时固定于恒温摇摆式水浴箱的血袋夹中，垂直浸没于恒温的循环水浴中，水浴箱自动摇摆，血浆溶化，上清液虹吸流入空袋，袋中心剩余(255)ml 未溶化的
3、血浆及吸附在上面的冷沉淀。B 组新鲜冰冻血浆融化时去掉固定夹，融化过程中人工给力捏碎血浆冰块，血浆溶解到尚存少许冰碴后，用大容量低温离心机离心，温度 4，相对离心力 3200g,离心 20min，分离血浆，袋内存留(255)ml 血浆冷沉淀，将 A、B 组冷沉淀快速置于速冻冰箱中冻结。A 组平均用 1.2h，B 组平均用 2.0h。1.4 质量检测用血凝仪对不同方法制备的冷沉淀进行凝血因子、纤维蛋白原的测定,t 检验分析。2 结果用相同的溶化设备，采用不同制备方法制备所得冷沉淀质量有差异，见表 1。结果显示：快速溶化离心法每袋中凝血因子80IU，纤维蛋白原150mg，符合国家标准1，水浴虹吸法
4、凝血因子80IU，符合国家标准，纤维蛋白原150mg，不符合国家标准1 。表 1 冷沉淀质量检测结果3 影响冷沉淀质量的关键因素冷沉淀制备经历了全血、新鲜冰冻血浆、冷沉淀三个阶段，有些可控，有些不可控，任何一个环节的误差都会影响冷沉淀的质量。3.1 采集个体冷沉淀中凝血因子、纤维蛋白原的收集率与献血者个体有关。正常个体中凝血因子水平相差在 50%200%之间;与血型有关;O 型含量最少，已知服用一些药物如避孕药可增加凝血因子水平，血管作用肽1-脱氨-8-D 精氨酸血管加压素(DDAVP)可增加血循环中凝血因子水平达300%2。3.2 采集速度血液采集过程中应注意采集速度，要求 200ml 全血
5、采集时间3min，400ml 全血采集时间6min，如采血不畅，出现凝块及溶血均会影响全血中冷沉淀凝血因子的含量。3.3 制备过程冷沉淀中的主要成分凝血因子是一种不稳定的凝血因子，新鲜冰冻血浆的溶化温度直接影响产品质量，在 46水浴中溶化回收率较高，在 8以上产生自溶 。快速溶化离心法制备冷沉淀的质量优于水浴虹吸法，分析原因，前者在于溶化新冰时人工捏碎血浆冰块，加快溶化速度，再通过低温重离心，使新鲜冰冻血浆中 90%的冷沉淀沉淀在浆袋底部，流失少;而水浴虹吸法在虹吸过程中，一部分凝血因子及纤维蛋白原也随血浆进入空袋。4 讨论近几年，由于成分输血的大力推广及凝血因子制品的缺乏，我市各医院冷沉淀用量明显增多，不仅用于治疗血友病 A，在烧伤外科手术止血、产后大出血、外伤、DIC 治疗中起到关键作用。制备冷沉淀时，要控制各环节影响因素，在把握好水浴温度和溶化速度这两个关键点的同时，采用快速溶化离心法制备冷沉淀，临床疗效会更好。【参考文献】1 全血及成分血质量要求，中华人民共和国国家标准 GB18469-2001.中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 2001-10-22 批准.2 高锋.临床输血与检验.北京：人民卫生出版社，2008:139-140.
