1、连环蛋白 P120 在肝细胞癌中的表达及其意义作者：张毅 朱瑾 杨占宇 杨世忠 李晓武 董家鸿 【摘要】 目的 检测肝细胞性肝癌(hepatocellular carcinoma，HCC)中连环蛋白 P120(P120 catenin，P120ctn)的表达，分析其与临床病理特点之间的关系。方法 用免疫组化技术检测 58 例 HCC、17 例癌旁肝硬化及8 例正常肝组织中 P120ctn 的表达。结果 58 例 HCC 组织中有 34 例P120ctn(58.6%)膜表达弱阳性或缺失，30 例(51.7%)胞质表达，异常表达总比例为 65.5%(38/58)；17 例癌旁肝硬化组织中有 6 例
2、(35.3%)膜表达弱阳性，8 例(47.1%)胞质表达，异常表达总比例为 47.1%(8/17)；8 例正常肝组织全部表现为胞膜正常表达，无胞质表达。P120ctn 的异常表达与HCC 的包膜形成、淋巴浸润、有无卫星灶、肿瘤分化等相关(P0.05)，而与性别、年龄、瘤体积大小、分期等无关(P0.05)。结论 HCC 中存在较高比例的 P120ctn 异常表达，主要表现为胞膜表达缺失伴胞质异常染色，P120ctn 可以作为预测 HCC 转移潜能和预后状况的有价值的指标。 【关键词】 连环蛋白 P120 肝细胞癌【Abstract】 Objective To investigate in viv
3、o expression of P120ctn in hepatocellular carcinoma (HCC) and analyze its relationship with pathological characteristics. Methods Immunohistochemical method was performed to detect expression of P120ctn in tissues from 58 cases with HCC, 17 with hepatic cirrhosis and eight healthy controls. Results
4、Of 58 cases with HCC, reduced membranous expression of P120ctn was seen in 34 cases (58.6) but cytoplasmic expression in 30 (51.7%), with abnormal expression rate of 65.5 (38/58). Of 17 cases with hepatic cirrhosis, six cases (35.3) had decreased expression of P120ctn and eight (47.1%) with cytoplas
5、mic expression, with abnormal expression rate of 47.1. There could be seen normal membranous expression of P120ctn rather than cytoplasmic expression in eight healthy controls. Abnormal expression of P120ctn was associated with capsule integrity, nodal metastasis, satellite focus and tumor cell diff
6、erentiation (P0.05), but not with gender, age, tumor size and disease stage (P0.05). Conclusions In HCC, there exists high rate of abnormal expression of P120ctn, which is mainly reduced membranous expression combined with abnormal cytoplasmic staining. P120ctn can be used as a valuable index for pr
7、edicting metastasis and prognosis condition of HCC.【Key words】 P120 catenin; Hepatocellular carcinoma早期侵袭和转移是肝细胞性肝癌(hepatocellular carcinoma，HCC)的重要特征以及不良预后的关键因素。E 钙黏连素(Ecadherin) 作为主要的上皮细胞黏附分子，其介导的细胞间黏附在HCC 转移的过程中扮演了十分重要的角色。Ecadherin 正常黏附功能的维持需要与 连环蛋白 (catenin) 、 连环蛋白(catenin) 、连环蛋白 P120(P120 caten
8、in，P120ctn)及细胞骨架形成一个完整的复合体。P120 是近期发现的连环蛋白家族成员1 ，和已被研究颇多的经典连环蛋白(catenin 、catenin) 相比，其生物学功能了解不多。本研究通过免疫组化法探讨 P120ctn 表达与 HCC 临床病理之间的关系。1 材料与方法1.1 临床资料收集 2003-2005 年手术切除经病理证实为 HCC 的标本 58 例，其中男 47 例，女 11 例；年龄 2869 岁。肿瘤分期根据国际抗癌联盟 TNM 确定，肿瘤分化按照 Edmonson 分级。肿瘤体积按直径分为 2 类(5 cm、5 cm)。所有病例术前均未接受任何放射治疗或化学治疗。
9、对照组17 例癌旁肝硬化组织和 8 例正常肝组织(原发病为肝胆管结石、肝腺瘤等)，经过 HE 染色病理切片证实无癌变。张毅，等. 连环蛋白 P120 在肝细胞癌中的表达及其意义 1.2 主要试剂鼠抗人 P120ctn 蛋白单克隆抗体购自 BD Clontech；PV9000 免疫组化试剂盒、DAB 试剂均购自北京中山生物制品公司。1.3 方法采用非生物素化辣根酶标记免疫组织化学染色法。操作步骤按试剂盒说明书进行，显微镜下观察染色强度。每次实验均以已知阳性切片为阳性对照，以 PBS 代替一抗作阴性对照。1.4 阳性结果判断染色评估分别由两位病理医生完成，一致性达 95%以上。对染色评估有异议的切
10、片，两位病理医生同时复习求得一致。评估标准参照文献2 ，每例组织切片随机观察 5 个高倍(HPFs400)视野，并计数 200 个肝细胞或肝癌细胞：(1)正常表达：此时细胞呈连续的膜染色，强度与正常肝细胞相同，且膜阳性细胞90%，而胞质无染色；(2)异常表达：阴性，即膜表达缺失；弱阳性，即膜表达减弱、不连续或膜阳性细胞90%；胞质表达，即胞质出现棕黄色颗粒。1.5 统计学处理采用 SPSS 10.0 软件对阳性率进行 2 检验(Fishers exact test)和相关性分析，P0.05 为差异有统计学意义。2 结果2.1 P120ctn 在 HCC、癌旁肝硬化组织、正常肝组织中的表达由表
11、1 可见，58 例 HCC 组织中有 34 例(58.6%)膜表达弱阳性或缺失，30 例(51.7%)胞质表达，异常表达总比例为 65.5%(38/58)；17 例癌旁肝硬化组织中有 6 例(35.3%)膜表达弱阳性，8 例(47.1%)胞质表达，异常表达总比例为 47.1%；8 例正常肝组织全部表现为胞膜正常表达，无胞质表达。三者比较差异有统计学意义(P0.05)。见图 1、2。2.2 P120ctn 的表达与 HCC 的临床病理特征关系由表 2 可见，P120ctn 的异常表达与 HCC 的包膜形成、淋巴浸润、有无卫星灶、肿瘤分化等相关，而与性别、年龄、瘤体积大小、分期等无关。表 1 P1
12、20ctn 在各组织中异常表达情况表 2 P120ctn 表达与 HCC临床病理因素关系3 讨论连环蛋白是一组与跨膜黏附分子家族钙黏连素(cadherin)的细胞质结构域密切相关的胞内糖蛋白家族，能与 cadherin 的胞内肽段及细胞骨架结合，形成一个完整的复合体，共同介导细胞黏附和信号转导功能，在形态学发生和维持组织形态的完整性方面起着重要的作用3 。多数与连环蛋白家族结合或有功能联系的蛋白都属于肿瘤相关基因，如 Src家族激酶、受体酪氨酸激酶、Wnt1 、APC 等。与最早发现的 、 连环蛋白不同，P120ctn 结合在cadherin 的胞内肽段近膜端(juxtamembrane do
13、main，JMD)，并不和细胞骨架相连。由于 cadherin 家族的 JMD 具有高度保守性，而 P120ctn 与cadherin 又是一种相对松散、可逆的结合关系，提示 P120ctn 在调控cadherin 功能中可能起着重要的作用。已知 P120ctn 最重要的功能是维持 cadherin 的数量，P120ctn 缺失将会导致膜上 cadherin 被迅速降解，而且这种调节是蛋白质水平的，P120 并不影响 cadherin 的 mRNA 水平，只是延长 cadherin 在膜上的“半衰期” 4 。正常情况下，P120ctn 与 catenin 相似，主要分布在细胞膜上。本实验 58
14、 例 HCC 组织中有 34 例(58.6%) P120ctn 膜表达弱阳性或缺失，这显然可能导致膜上 cadherin 数量的减少，从而降低细胞间黏附，促进HCC 转移。还有 30 例(51.7%)出现明显的 P120ctn 胞质异常分布。已知P120ctn 在胞质中可以经 RhoA 途径的活化而诱导乳腺癌细胞的侵袭活性5 ，还可以通过其氨基端激活驱动蛋白将 Ncadherin 转送到细胞膜上，提高 Ncadherin 的胞膜表达，降低细胞间的黏附6 。我们推测，HCC 中 P120ctn 的胞质分布可能也通过类似的机制促进瘤细胞侵袭转移。P120ctn 出现细胞内异常分布可能与其自身磷酸化
15、状态有关。肿瘤细胞的微环境中常高表达 EGF、PDGF、CSF1 、VEGF、NGF 等 SRC 家族激酶，均能使之磷酸化7 。SRC 激酶涉及促有丝分裂信号转导过程，因而P120ctn 的磷酸化及其异位分布很可能是细胞分裂增殖过程中一个重要的信号途径。此外，近年还发现异位分布的 P120ctn 可以进入细胞核，与一种核内转录抑制因子 Kaiso 结合，间接参与 Wnt 通路中Siamois、wnt11 等基因的调控，在脊椎动物胚胎发育的原肠胚形成中起着重要作用8-9 。由于 Wnt 信号通路与肿瘤的发生和转移关系密切，可以推测 P120ctn 的核内异常分布极有可能参与调控某些癌相关基因。P
16、120ctn 与肿瘤的关系研究方兴未艾，P120ctn 的表达及功能状态改变很可能导致细胞黏附与增殖的失调。我们的实验发现 HCC 中存在较高比例的 P120ctn 异常表达，主要表现为胞膜表达缺失伴胞质异常染色，且与 HCC 的浸润和转移关系密切，P120ctn 可以作为预测 HCC 转移潜能和预后状况的有价值的指标。进一步探讨 P120ctn 异常表达在 HCC 转移中扮演的角色，比如是否参与某些肿瘤相关基因的调控，对于深入理解 HCC转移的分子机制显然具有十分重要的意义。【参考文献】1 Reynolds A B, Herbert L, Cleveland J L, et al. P120
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