1、两种不同离心方法对脐血单个核细胞回收率的影响作者：罗伟琼 李沈容 邹翠贤 罗小珍 朱美玲【关键词】 脐血【摘要】 目的 探讨不同离心条件下对脐血造血细胞回收率的影响。方法 运用 6%羟乙基淀粉（HES）沉降，二次离心法可离心脐血浓缩单个核细胞（MNC） ，此法具有不受标本体积大小的影响、无细菌污染的优点。结果 通过分析两种离心方法发现制备 MNC 时，离心力与 MNC回收率有密切关系。结论 加大离心力可增加 MNC 的回收率。【关键词】 脐血;造血细胞/单个核细胞;离心法;回收率【Abstract】 Objective To investigate the effect of differen
2、t centrifugal methods on returns-ratio of Mononuclear cell（MNC） in umbilical cord blood.Methods After sedimentated with 6% hydroxyethyl starch（HES）,two centrifugating processes was employed to separate and concentrate MNC,which was not affected by specimen volume and not polluted by bacterium.Result
3、s There was significant relationship between different centrifugal force and recovery rate of MNC.Conclusion Recovery rate of MNC will increase by increasing centrifugal force.【Key words】 fetal blood;mononuclear cell;centrifugation;retrieving rate造血干细胞移植（HSCT）已经成为迄今为止医治各种恶性血液病、肿瘤、遗传性疾病、重度放射病及重症联合免疫缺
4、陷等顽症的最有效方法之一1,2 ，而采用脐血替代骨髓及外周血进行 HSCT 已成为近 10 年来 HSCT 领域的最重大进展之一2,3 。最初的脐血 HSCT 使用的均为未经分离的全血，这种全脐血移植虽然能减少造血干/祖细胞的损耗，但因含有大量的红细胞等成熟血细胞，不但给冷冻保存带来困难，同时还可能会给移植病人造成严重的不良后果。因此，对脐血库来讲，高效快速分离脐血造血细胞,对单个核细胞（MNC）进行分离浓缩,最大限度地降低其终体积显得尤为重要。这不仅涉及到尽量减低造血细胞的丢失问题，而且还牵涉到降低脐血库库容的成本问题。所以，探索出一种行之有效理想的分离方法就成了该领域研究的热点。为此，笔者
5、做了一些探索，现报告如下。1 材料与方法1.1 材料与仪器 6%羟乙基淀粉（HES）购自美国 Dupontpharma公司;无菌、无热源，含有 ACD 保养液三联采血袋（长春泰尔茂医用器具公司）;落地式低温离心机（SORVALL-PC3C plus）;血细胞计数仪：2%冰醋酸结晶紫染色，计数有核细胞数。1.2 MNC 的制备方法1.2.1 脐血来源 40 份脐血均无菌，采自深圳市宝安区西乡人民医院妇产科，均为足月产，胎儿无窒息。供者均为身体健康、发育良好的非高龄产妇。1.2.2 分离提取 将采集的脐血留样 1ml 用计数仪将 MNC 计数。参照纽约脐血库操作规程4按 6%HES脐血=15 的比
6、例加入，并充分混匀 10min,两次离心法。第一种方法以 10 430r/min 离心 6min 做第一次离心；第二种方法以 10 460r/min 离心 6min 做第一次离心；利用三联袋将上层富含 MNC 的血浆及少许 RBC 移入转移袋内，去除剩余的RBC，再次以 10 1300r/min 离心 12min。去除上层血浆获得脐血有核细胞悬液 1822ml，留样 1ml 计数 MNC。2 结果两种离心转速与离心时间见表 1；两种离心方法制备 MNC 获得率的比较见表 2。表 1表 2 （略）3 讨论脐血与骨髓及外周血相比有诸多优点57：富含更原始的造血细胞，增殖能力强；可进行 HLA 13
7、 个抗原不合的同胞或无关者的移植；单份脐血中的造血细胞量可满足 65%的儿童（35kg） 、25%体重较轻（50kg）成人患者的移植需要；来源丰富，采集过程简单，新生儿及产妇均无任何痛苦及不良反应。从脐血中分离造血细胞是脐血库进行库存脐血干细胞的必备程序，鉴于每份脐血采集的容量有限，它所含的 MNC 的数量也是有限的，况且新的资料研究显示脐血移植的成功率与 TNC、MNC 的数量呈正相关8 ，因此脐血细胞分离的方法是建立高品质脐血库的关键技术之一；目前主要采用 6%HES 沉降离心法分离。根据脐血中各种成分密度不同，经不同离心力作用后可将血浆成分和血细胞成分中的红细胞、粒细胞、淋巴细胞及血小板
8、分层、分离，提取所需要的成分9 。MNC 的密度为 1.060，小于红细胞的密度，脐血在 HES 沉降后通过轻离心，使红细胞团向下沉降而推动白细胞向上运动，达到分离的目的。本试验利用白细胞和红细胞在沉降过程中的速度差异来实现分离。在离心时间不变的情况下加大离心力，红细胞因快速沉降而导致周围液体的向上运动，带动白细胞的向上运动，产生对流现象10 ，更有利于提高白细胞的回收率，增加MNC 的获得率。【参考文献】1 奚永志，唐佩弦.深入展开脐血干细胞的基础与临床研究.中华血液学杂志，1999，20（8）：397.2 Rubinstein P,Carrier C,Scaradavou A,et al.
9、Outcomes among 562 recipients of placental-blood transplants from unrelated donors.New Engl J Med,1998,339（22）:1565.3 奚永志，吴祖泽.积极稳妥地建立和健全我国的脐血造血干细胞库.中华医学杂志，1999，79（11）：885.4 Rubinstein P,Dobrila L,Rosenfield RE,et al.Processing and cryopreservation of placental/umbilical bord blood for unrelated bone
10、 marrow reconstitution.Proc Natl Acad Sci USA,1995,92（22）:10119.5 Susan FL,Ehzabeth JR.Hematopoietic progenitor cells.Seminar in Hematology,1996,33:341-358.6 Kogler G,Callejas J,Sorg RV,et al.The effect of different thawing methods,growth factor combinations and media on the ex vivo expansion of umb
11、ilical cord blood primitive and committed progenitors.Bone Marrow Transplantation,1998,21:233-241.7 刘爽，奚永志.端粒/端粒酶系统与人类造血细胞.中国实验血液学杂志，1999，7：171-174.8 朱美玲，任新尧，陈汝光，等.不同分离方法分离脐血造血细胞效率的比较.中国输血杂志，2002，15（3）：179-180.9 王培华.输血技术学.北京:人民卫生出版，2002,38-39.10 迟占有，姜华，蔡海波,等.羟乙基淀粉沉降法分离脐血过程的深入分析及条件优化.中国输血杂志，2004，17（2）：71-74.
