1、流式细胞术检测九节龙皂甙对 Hela 细胞凋亡的诱导作用作者：梁克明 王四旺 谢艳华 王晓娟 【关键词】 九节龙皂甙 关键词: 九节龙皂甙;细胞凋亡;流式细胞术;Hela 0 引言 细胞凋亡（Apoptosis）是一种生理性细胞程序化死亡，与肿瘤的发生、发展密切相关，已成为当前肿瘤研究的新热点.九节龙皂甙是从川产九节龙全草中提出的单体1 ，我们观察九节龙皂甙诱导 Hela 细胞凋亡，采用流式细胞术（flow cytometry，FCM）进行分析，结果如下: 1 材料和方法 1.1 细胞系及细胞培养 人宫颈癌细胞株（Hela）为上皮样癌细胞，本校 403 研究所提供.细胞培养方法见参考文献2.
2、1.2 细胞凋亡的诱导和分析 实验组分别以1.5650.0gmL-1 九节龙皂甙（本校药物研究所提供）作用Hela 细胞（106 mL-1 ）072h，未经过药物处理的细胞为阴性对照组，加入等量培养液（100mLL-1 胎牛血清的 RPMI1640 培养液）中细胞常规培养，按作用不同时间，分别收集细胞，经 PBS 洗涤2 次，加入-4700mLL-1 乙醇固定过夜，离心收集细胞，再经PBS 洗涤后，依次加入膜穿孔剂，溴化乙锭（PI）和 Rnase4染色30min，350 目筛网过滤，Epics-profile流式细胞仪（美国 Coulter 公司）上进行 DNA 含量及细胞周期分析. 2 结果
3、 细胞凋亡过程中，核内 DNA 被降解成寡核苷酸片断，经 PI 染色后可直接观察到细胞 DNA 含量变化.染色的小分子 DNA 在细胞周期分布图中，形成正常二倍体细胞 DNA 峰（G1 峰）之前的亚二倍体峰，即 Apoptosis峰（亦称 Ap 峰） ，是凋亡细胞核固缩及 DNA 降解的结果，根据 Ap 峰可测凋亡细胞占细胞总数的比例.图 1 示 6.25mgL-1 作用 48h 后 G1 峰前出现凋亡峰，占细胞总数的 34.5%，而阴性对照组细胞 G1 峰无凋亡峰出现（图 2）. 图 1 图 2 略 3 讨论 九节龙皂甙各剂量处理组随时间的增加 S 期（DNA 合成期）及 G2 期（DNA 合成后期）细胞数少于阴性对照组，G1 期（DNA 合成前期）细胞数较阴性对照组增加，表明九节龙皂甙抑制了癌细胞 DNA 合成，使癌细胞增殖活性受到抑制.同时在计算机显示屏上动态观察到，九节龙皂甙处理 48h 后，随电压增高，大部分细胞碎片移动，但有部分细胞并不移动，这一现象可能是药物使 Hela 细胞改变了形态，体积减小所致，至于确切其机制有待进一步阐明. 参考文献: 1张清华，王晓娟，缪振春.川产九节龙皂甙的化学研究J.药学学报，1993;28（9）:673-678. 2司徒镇强，吴军正主编.细胞培养M.西安:世界图书出版公司，1996:127-134.
