1、马兰对动物离体子宫的兴奋作用及促凝血的实验研究【摘要】 目的探讨马兰乙醇提取物对己烯雌酚预处理后大鼠、小鼠离体子宫的兴奋作用和对家兔体外凝血功能的影响。方法常规方法制备动物离体子宫标本，采用 BL-420 生物机能实验系统记录离体子宫平滑肌的活动, 以子宫收缩的幅度、频率及收缩力作为指标, 观察马兰乙醇提取物对注射己烯雌酚后大鼠、小鼠离体子宫兴奋作用，计算兴奋子宫的 IC50，以益母草为阳性对照。促凝血采用家兔体外复钙和对凝血酶原(PT)的影响。结果马兰 95%乙醇提取物和 50%乙醇提取物对大鼠和小鼠离体子宫平滑肌有明显地兴奋作用，可加快收缩频率、提高收缩张力和子宫活力(P0.05，P0.0
2、1)，并呈量效关系。马兰 50%乙醇提取物能明显缩短复钙凝血时间(P0.01)，对凝血酶原时间无明显影响。结论马兰95%乙醇和 50%乙醇提取物对大鼠和小鼠离体子宫平滑肌具有兴奋作用，其兴奋子宫平滑肌的作用强度较益母草稍强。并具有促凝血作用。 【关键词】 马兰； 离体子宫； 兴奋作用； 凝血时间； 凝血酶原马兰 Kalimeris indica (L.)Sch-Bip 为菊科马兰属植物，全草可入药。据本草纲目记载：马兰可“破宿血、养新血, 止鼻吐血、合金疮、断血痢、解酒疸、诸菌毒、蛊毒”及治“腹中急痛, 痔疮”等病症。马兰又称鱼鳅串、鸡儿肠、路边菊、田边菊等，分布于我国的江苏、浙江、江西、福建
3、、湖南 、湖北 、广东、广西、四川、贵州等地1 。马兰味苦、辛，性温、寒，以全草或根入药，有清热解毒，散瘀止血，温肺止咳，散寒止痛，消积之功效，主治感冒发热，咳嗽，急性咽炎，扁桃体炎，流行性腮腺炎，传染性肝炎，胃、十二指肠溃疡，小儿疳积，肠炎、痢疾、吐血、崩漏、月经不调、外用治疮疡肿毒、乳腺炎、外伤出血、肺寒喘咳、胃脘冷痛等2 。广西少数民族有用马兰治疗功能性子宫出血，崩漏等妇女出血性疾病之经验，并获得良好的疗效。据报道全叶马兰乙醇提取物，对蛋清所致大鼠足趾肿胀及二甲苯所致小鼠耳廓肿胀有抑制作用，对大鼠钾离子皮下透入致痛法与小鼠扭体法有抑制作用，显示出良好的抗炎镇痛作用3 。药效学还研究表明马
4、兰具有良好的镇咳和中枢抑制作用4 。而马兰兴奋子宫和对凝血功能的实验研究未见报道。本文采用 BL420 生物机能实验系统，观察马兰乙醇提取物对注射己烯雌酚后的大鼠、小鼠离体子宫的影响及对凝血功能的影响。现报道如下。1 材料与仪器1.1 药品与试剂 马兰采自桂林地区（经桂林医学院药学系生药教研室王育生副教授鉴定） ，晒干备用。益母草购自桂林市药材市场。取马兰 1 000 g，用中药材粉碎机粉碎后置于 5 000 ml 圆底烧瓶中加 95%乙醇浸没，加热冷凝回流 1 h，抽滤，重复上述操作 3 次；另取马兰 800 g 加 50%酒精浸没，加热冷凝回流 1 h，抽滤，重复 3 次。分别用旋转蒸发仪
5、将两种组分浓缩，45烘干后置冰箱备用。益母草提取方法与马兰相同。己烯雌酚注射液，天津金耀氨基酸有限公司，批号 200801241；凝血酶原(PT)时间试剂盒，上海太阳生物技术有限公司，批号 105035；云南白药，批号 20081113，云南白药集团股份有限公司。1.2 动物 Wistar 大鼠，雌性，未孕，体质量（22020）g；昆明种小鼠，体质量（302）g；家兔，体质量（2.20.2）kg；均由桂林医学院实验动物中心提供，许可证号：SCXK(桂)2007-0001。1.3 仪器 SYC-15 超级恒温水浴，北京桑力电子设备厂产品；旋转蒸发器（RE-52AA） ，郑州长城科工贸有限公司产品
6、；BL420 生物机能实验系统，成都泰盟科技有限公司产品。2 方法2.1 大鼠和小鼠离体子宫平滑肌张力的测定取正常未孕大鼠 12 只、小鼠 12 只，实验前 24 h 腹腔注射己烯雌酚，剂量分别为大鼠 1 mgkg1，小鼠 2 mgkg1，人工造成动物动情前期或动情期，以提高子宫敏感性。实验时大鼠、小鼠脱颈椎处死，迅速剖腹取出子宫，分离子宫壁上附着的结缔组织和脂肪组织，立即置于盛有营养液的玻璃皿中。将上述动物离体子宫标本阴道端系在盛有 20 ml 营养液（大鼠用DeJaion 氏液5 、小鼠用 Tyrode5氏液）的麦氏浴槽 L 型通气管上，另一端与张力换能器（大鼠用 05 g 张力换能器、小
7、鼠 03 g 用张力换能器）相连，通入氧气，每秒 1 个小气泡，麦氏浴槽控温在（360.5）。将 BL-420 生物信号采集系统，定标，调零，时间常数T=DC，G=20 mv，滤波调节 F=20 Hz（小鼠 F=50 Hz） ，扫描速度 S=12.50 s/div5 。实验前负荷（小鼠 0.5 g、大鼠 1 g） ，待稳定 15 min 后，开始实验。加入马兰或益母草 95%乙醇组分和 50乙醇组分溶液，由低浓度到高浓度。给药后记录 10 min 离体子宫的收缩活动，每加入一个浓度药物待子宫平滑肌收缩达高峰后，更换营养液，冲洗 3 次，待离体子宫平滑肌稳定后，再加下一个药物浓度。直到测出该段子
8、宫平滑肌收缩的最大效应（此时增加剂量不再增加收缩高度） 。用 Windows2007, Microsoft Excel 数据分析工具，计算 IC50，并计算子宫收缩强度、频率和子宫收缩活力。数据用 t 检验进行统计学处理。2.2 体外凝血实验取家兔 6 只，心脏取血，加入 3.8%枸橼酸钠抗凝管(抗凝剂与血按 19)中， 轻轻混匀，制备抗凝血液。抗凝血浆的制备：抗凝血液经 3 000 r/min，离心 10 min，取上清液备用。将马兰 50%乙醇提取物、云南白药粉剂溶于生理盐水，配制成 1浓度，进行凝血时间(全血复钙时间，血浆凝血酶原时间)的测定6 。以云南白药为阳性对照，生理盐水为空白对照
9、。全血复钙试验：取抗凝兔血 0.7 ml 加生理盐水或马兰或云南白药药液 0.1 ml 于试管内，置 37水浴中孵育 5 min，加入 1/40 mol 氯化钙 0.1 ml，每隔 30s 轻轻倾斜试管 1 次，观察有无凝血，从加入氯化钙溶液开始记时，到倾斜试管血块凝固于管底而不流动时为止，即为凝血时间7，8 。凝血酶原测定：按凝血酶原试剂盒说明操作，血浆 0.1 ml，加 PT 试剂 0.1 ml，对照组加30 l 生理盐水，给药组加药液 30 l，在有机玻璃板的凹坑内 37孵育 3 min，用大头针混匀，每隔 3 s 挑 1 次，直至出现凝块即为凝血酶原时间。每药重复试验 3 次，取其平均
10、值，与生理盐水组比较求出凝血时缩短的程度。用 t 检验进行统计学处理。3 结果3.1 马兰 95%乙醇和 50乙醇提取物对大鼠和小鼠离体子宫平滑肌兴奋的 IC50 测定结果 以马兰 95%乙醇组分和 50%乙醇组分对每个动物离体子宫标本收缩最高振幅为 100%，依次计算出不同浓度收缩子宫百分率，以振幅的百分数为 y 轴，以最终浓度（mgml-1）为 x 轴，代入回归方程 y=ax+b，经计算机（Windows2007, Microsoft Excel 数据分析工具）求出 a 和 b，再求出平均 50%的效应即 IC50。见表 1。结果可见马兰 95%乙醇组分对大鼠离体子宫的兴奋作用比益母草稍强
11、。表 1 马兰和益母草兴奋大鼠和小鼠离体子宫平滑肌的 IC50 结果(略)3.2 马兰 95%乙醇和 50乙醇提取物对大鼠和小鼠离体子宫平滑肌兴奋强度、频率与活力的影响按文献方法5测定马兰 95%乙醇和 50%乙醇组分对大鼠和小鼠子宫收缩强度和频率，并计算子宫活力（子宫活力平均强度频率，单位 g次数/10 min） ，结果见表 23。表明马兰95%乙醇和 50乙醇提取物对大鼠和小鼠离体子宫平滑肌收缩强度均明显增强，子宫活力明显增加（P 0.05 或 P0.01） ，收缩频率大鼠与小鼠明显增加。表 2 马兰乙醇提取物对大鼠离体子宫收缩强度、频率与活度的影响，表 3 马兰乙醇提取物对小鼠离体子宫收
12、缩强度、频率与活度的影响(略)3.3 对家兔体外凝血的影响体外凝血试验，按文献计算凝血时间(凝血酶原时间)缩短率，即凝血时间(凝血酶原时间)缩短率=对照组血凝时间 给药组血凝时/对照组血凝时间100。以药物凝血时间比空白对照组缩短 30以上者认为有效6 。结果见表 4，表明马兰 50%乙醇提取物能明显缩短凝血时间(P0.01)，而对凝血酶原时间无缩短作用。表4 马兰 50%乙醇提取物对家兔体外凝血的影响(略)4 讨论马兰既是药物也是一种食品，南方有的地方用马兰作野菜食用的习惯。营养学研究表明，马兰含 20 种氨基酸，多种微量元素如锌、锰、镁、硒等。天然药化研究表明马兰含木栓酮、木栓醇、达玛二烯
13、醇乙酸酯、月桂酸、-谷甾醇、脱镁叶绿甲酯酸等1 。民间用于治疗鼻炎、鼻出血、牙龈出血、皮下出血、黄疸、肝炎、痢疾、小便涩痛、痔疮、宫颈炎、前列腺炎等多种疾病。我们的研究表明马兰的乙醇提取物对动物子宫有明显的兴奋作用，增加子宫收缩强度和频率，提高子宫收缩活力。凝血试验研究表明，马兰可明显缩短凝血时间，可能是治疗功能性子宫出血、崩漏等出血性疾病的药理学基础。对马兰兴奋子宫平滑肌和促凝血的有效成分和作用机制值得深入研究。【参考文献】1林 材，曹佩雪，梁光义. 马兰化学成分的研究J. 中国药学杂志，2006，41(4):251.2康文艺，赵 超，穆淑珍，等.马兰挥发油成分的研究J.中草药，2003，3
14、4(3):210.3徐庆荣，张保功，刘 娟，等.全叶马兰的抗炎镇痛作用研究J.中国现代应用药学杂志，2002，19(3)：199.4石乐鸣，吕世杰，张连凯，等.全叶马兰镇咳作用的实验研究J.中药材，1990，13(11)：36.5唐祖年，梁成钦，覃文科，等.棕叶花提取物对动物子宫的兴奋作用J.时珍国医国药，2008，19(5)：1139.6王秀琴，伍素华，苏踊跃，等. 一种促凝血草药有效部位的初步确定及其凝血试验的研究J.第三军医大学学报，2004，26（20）：1841.7都述虎，全继曙. 仙桃草主要化学成分体外促凝血作用J.中草药，1996，27(7)：416.8刘 俭，田 泽，刘振秀，等.止血散对凝血系统的影响J.中国实验方剂学杂志，2001，7(4)：31.
