1、梅毒螺旋体 IgM 抗体检测的临床意义作者：李步荣，贺军涛，张毅，岳天海，李丽华，张小玉 【Abstract】 AIM: To evaluate the clinical significance of detection of IgM antibody against Treponema pallidum in diagnosing syphilis. METHODS: The serum samples of 90 syphilitic patients were collected and treated with IgG/RF immunoabsorbent, then were de
2、tected for TPIgM with Treponema pallidum particle agglutination(TPPA) assay. The serum samples were also detected for TPDNA by RTPCR method. RESULTS: The TPIgM positive rates were 75.9%, 100% and 77.8% in primary syphilis, secondary syphilis and latent syphilis, respectively. The total positive rate
3、 of TPIgM was 81.1%(73/90) in syphilis sera. The positive rates were statistically different between the 3 different syphilis groups（2=90.20, =2, P0.05）. The TPDNA positive rate was 78.9%（71/90）. There was no significant difference between the positive rates of TPIgM and TPDNA(2=0.5, =1, P0.05). CON
4、CLUSION: The detection of IgM antibody against Treponema pallidum in serum is important for the clinical diagnosis of syphilis. 【Keywords】 syphilis; IgM antibodies; treponema pallidum 【摘要】目的： 评价检测梅毒螺旋体 IgM型抗体的临床意义. 方法： 收集经临床确诊为梅毒患者的血清标本 90例，用 RTPCR 方法进行 TPDNA 检测，用 IgG/RF吸收剂处理血清，然后应用梅毒螺旋体明胶凝集试验进行 TPI
5、gM 的检测. 结果： 一期梅毒的 TPIgM 抗体阳性率 75.9%，二期梅毒的阳性率 100%，隐性梅毒的阳性率 77.8%. 总阳性率为 81.1%（73/90）. TPIgM 在不同时期梅毒组中检测阳性率差异有统计学意义（2=90.20, =2, P0.05）. TPDNA 的检测阳性率为78.9%（71/90）. TPDNA 和 TPIgM 的阳性检出率统计学上无统计学差异(2=0.5, =1, P0.05). 结论： 检测血清中梅毒螺旋体 IgM型抗体对于梅毒的鉴别诊断具有重要的临床意义. 【关键词】 梅毒；IgM 抗体；密螺旋体，苍白 0 引言 梅毒是由梅毒螺旋体(trepone
6、ma pallidum, TP)引起的一种慢性传染病,主要通过性行为和血液传播,也可通过胎盘母婴垂直传播. 近年来，梅毒的发病率有不断升高的趋势. 梅毒患者是梅毒的惟一传播源，及早发现梅毒感染者对控制梅毒的传播显得尤为重要. 为了进一步了解TPIgM 抗体在梅毒诊断中的意义，我们对经临床确诊的梅毒患者血清标本进行了 TPIgM 梅毒螺旋体明胶凝集试验和实时荧光定量 RTPCR 试验，探讨检测 TPIgM 抗体逐步应用于梅毒的早期诊断的可行性. 1 材料和方法 1.1 材料收集经临床确诊为梅毒患者的血清标本 90份,其中一期梅毒29份，二期梅毒 16份,潜伏梅毒 45份，临床诊断标准参照“梅毒诊
7、断标准及处理原则 GB 159741995”. 血清标本如在 24 h内检测则血清标本置于 4冰箱，否则置于-70冰箱内保存待测，避免反复冻融. 梅毒螺旋体明胶凝集试验（TPPA）试剂盒由日本富士公司生产，IgG/RF 因子吸附剂购于德国欧蒙公司. 梅毒螺旋体核酸扩增荧光检测试剂盒由中山大学达安基因股份有限公司生产，试剂盒均在有效期内使用. 主要仪器有美国 PE公司生产的 GeneAmp 5700全自动实时荧光定量 PCR扩增仪，高速离心机，恒温水浴箱，微量振荡器. 1.2 方法 1.2.1TPIgM 的检测按照 IgG/RF 因子吸附剂说明书对被测血清进行 IgM提取，再做 TPPA试验，所
8、有操作步骤都严格按照操作说明进行. 1.2.2TPDNA 检测按试剂盒说明书进行血清样本的处理，提取 DNA. 将待检 DNA样本或标准阳性模板加入后，放入 PE5700荧光 PCR仪，93 2 min预变性后，按 93 45 s和 55 60 s，先进行 10个循环，再按93 30 s和 55 45 s反复 30个循环. 以扩增前后的荧光差值为纵坐标，拷贝数为横坐标，用 ABI Prism 7300自动作标准曲线，由电脑软件自动计算出样本 TPDNA 初始拷贝数定量结果. 由于 TPIgM 检测结果为定性结果，因此将 TPDNA 检测结果用定性方式表示（拷贝数2103/mL 为阴性，2103
9、/mL 为阳性）. 统计学处理： 所有数据均采用 SPSS10.0统计软件处理，统计方法为 2 检验，P0.05 为有统计学意义. 2 结果 2.1 梅毒患者血清 TPIgM 和 TPDNA 检测 TPIgM 的检出阳性率为81.1%（73/90） ，TPDNA 的检出阳性率为 78.9%（71/90）. 有两例标本TPIgM 阳性，而 TPDNA 检测阴性. 71例标本检测两者都是阳性，17例标本检测都是阴性，符合率 97.8%（88/90）. 进行配对四格表资料的2 检验，无统计学差异（2=0.5, =1, P0.05）. 2.2 不同分期梅毒患者 TPIgM 检测 TPIgM 检测阳性率
10、在二期梅毒患者组中最高，达到 100.0%，在一期梅毒患者组中阳性率较低，为 75.9%.实验结果经 2 检验，差异有统计学意义（2=90.20, =2, P0.05, 表 1）. 表 1不同时期梅毒组 TPIgM 检出阳性率比较（略） 3 讨论 梅毒是严重危害人类健康的性传播疾病，其实验室诊断主要依靠血清学方法. 隐性梅毒患者由于不能及早发现，成为梅毒的重要传染源. 人体感染梅毒螺旋体后，血清产生两种抗体，一种是非梅毒螺旋体特异性抗体，是梅毒螺旋体在破坏组织时释放的抗原性物质(心磷脂)刺激机体产生的有抗体性质的反应素(抗心磷脂抗体)，检测这种抗体的试验称非梅毒螺旋体非特异性血清学方法，如 R
11、PR, TRUST等，长期被作为初筛试验；一种是梅毒螺旋体特异性抗体，包括 IgM和 IgG，检测这种抗体的试验称梅毒螺旋体血清试验，为确认试验，如 TPHA, TPPA, TPELISA和免疫印迹等方法. 目前，临床实验室大多数仍然采用快速血浆反应素环状卡片试验（Rapid plasma regain circle card test, RPR）作为梅毒的筛查试验，虽然 RPR作为过筛试验具有操作简便、快速、价格低廉的特点，但是对于一些自身免疫性疾病患者，RPR 试验容易产生假阳性，对于潜伏期梅毒又容易产生假阴性结果，所以分析 RPR试验结果应充分考虑这些因素. 梅毒螺旋体酶联免疫吸附试验（
12、enzymelinked immunosorbent assay, TPELISA ）检测梅毒螺旋体抗体最早出现于 1975年，是用双抗原夹心法测定梅毒特异性抗体. TPELISA 方法检测操作简便，不受样本中纤维蛋白和溶血等影响，一次可进行多份样本的检测，用酶标仪分析，客观准确，结果便于保留及标准化管理，可用作筛查和确认试验. 但是，TPELISA 检测的是梅毒螺旋体总抗体，在梅毒患者治愈后相当长时间仍为阳性，不利于临床判定是近期感染还是曾经感染和疾病状态1-2. IgM 梅毒螺旋体明胶凝集试验(treponema pallidum particle agglutination, IgMTP
13、PA) 采用梅毒螺旋体天然抗原作为诊断抗原，有很高的特异性，作为确证试验在世界许多国家被广泛使用3. 近年来，随着分子生物学的不断发展，实时荧光定量聚合酶链反应（RTPCR ）技术用于 TP的检测，极大的提高了梅毒感染者的检出率4. 本研究结果表明：TPIgM 和 TPDNA 在梅毒患者的检出阳性率无显著性差异（P0.05） ，两者检测符合率高达 97.8%. 由于 TPDNA阳性表明检出梅毒螺旋体，因此，TPIgM 的阳性可以说明已经感染了梅毒螺旋体. 本研究中两例标本 TPIgM 阳性而 TPDNA 阴性，可能是由于患者经过治疗，血液中梅毒螺旋体很快消失，而 TPIgM 还没有完全转阴所致
14、，也有可能是梅毒螺旋体潜伏于人体其他脏器而在血液中检测不到. 实验结果表明：TPIgM 在不同期梅毒患者检出率不同，在二期梅毒检出率最高，高达 100.0%，可能与本研究所用样本量较小有一定关系. 由于潜伏梅毒无明显临床症状，因此 TPIgM 的检测对潜伏梅毒的诊断具有重要意义. TPIgM 是梅毒感染后，机体最先出现的体液免疫应答，一般感染 2周即可从血清中检出. 并且只要有活的梅毒螺旋体存在，不断予以抗原刺激，其 TPIgM 将会维持在一定的水平. 因此，TP IgM 可以看作是梅毒早期感染并活动的一项血清学标志5. 本研究随机收集样本，不同期梅毒患者的比例有一定代表性. 潜伏梅毒患者 4
15、5例，占 50%. 提高潜伏梅毒患者的检出率对控制梅毒的传播具有重要意义. 有文献报道，梅毒螺旋体 IgM抗体阴转在一期梅毒为 3个月，二期梅毒为 9个月，潜伏梅毒为 2年. TPIgM 的消失，提示体内没有活的梅毒螺旋体存在，可以推断已经丧失传染性，可以继续随访或判愈. TPIgM 在治疗后若不转阴，提示体内可能残存梅毒螺旋体或治疗不彻底. 抗梅毒螺旋体 IgM抗体阴转者随访时再转阳性，表明再次感染梅毒. TPIgM 抗体随病情的好转而逐渐消失，可作为判断梅毒疗效的指标6. 此外，TPIgM 对诊断新生儿先天性梅毒具有重要意义. 由于梅毒螺旋体 IgG分子量小，可以通过胎盘，被动免疫胎儿，且
16、可持续多年甚至终生，因此不能区分母体梅毒与胎儿梅毒，而 IgM 不能通过胎盘. 新生儿血液中如果检测到 IgM抗体，表明有先天性感染，可诊断为先天性梅毒. 在胎盘中检测到高浓度的梅毒螺旋体特异性 IgM抗体，说明胎儿感染梅毒7. 脑脊液中检测出梅毒螺旋体 IgM抗体，可以诊断为神经性梅毒. 【参考文献】 1 Castro R, Prieto ES, Santo I, et al. Evaluation of an enzyme immunoassay technique for detection of antibodies against Treponema pallidum J. J Cl
17、in Microbiol, 2003,41(1):250-253. 2 Manavi K, Young H, McMillan A. The sensitivity of syphilis assays in detecting different stages of early syphilisJ. Int J STD AIDS, 2006,17(11):768-771. 3 Castro R, Prieto ES, Joao Aguas M, et al. Evaluation of the Treponema pallidum particl agglutination techniqu
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19、的检测及其临床意义J. 新医学，2004,35(3):165-166. 6 Rawstron SA, Mehta S, Bromberg K. Evaluation of a Treponema pallidumspecific IgM enzyme immunoassay and Treponema pallidum western blot antibody detection in the diagnosis of maternal and congenital syphilis J. Sex Transm Dis, 2004,31(2):123-126. 7 杨帆，张荣，周华，等 . 梅毒螺旋体 IgM抗体蛋白印迹试验诊断新生儿胎传梅毒的探讨J. 中华皮肤科杂志，2004,37( 6):326-328.
