1、门静脉高压症大动物模型的研制进展【关键词】 门静脉高压症 大动物 模型用于制造门脉高压症动物模型最常用的动物为鼠与兔，但如欲对门静脉高压症的手术方式进行研究，则小动物模型难以达到预期的效果且操作不方便，因此选择一种理想的大动物门静脉高压症模型，对于评价外科治疗效果非常重要。多年来，国内外学者探讨了多种制备门静脉高压症大动物模型的方法，每种方法都有其优点，但也有其局限性，现综述如下。1 肝前型门脉高压症模型的制作1.1 缩窄门静脉主干制作模型 将门静脉主干部分缩窄可减少门静脉口径，使血液回流受阻从而导致门脉压力升高。1980 年 Van Thiel1首次报道此方法：把一个 20号钝头直针纵向置于
2、门静脉主干旁，用丝线将门静脉和直针结扎后抽出直针，可造成门静脉一定程度的狭窄，从而建立门脉高压症动物模型。理论上讲，完全阻断门静脉可使门静脉压力升高最多，但一次完全结扎门静脉可导致严重的胃肠淤血及肝脏缺血，除恒河猴外几乎毫无例外地会导致实验动物死亡。国内学者李宗芳2采用门静脉主干缩窄 1/2 加丝线慢性栓塞的方法，成功通过一次手术而逐渐完全阻断门静脉，成功制成犬的肝前型门静脉高压症模型。术后动物存活率为 95.5%，术后 2 周门静脉造影见主干已闭塞，术后 34 周门静脉压力升为(2.830.66)kPa，胃镜检查食管胃底静脉曲张形成率为 80.9%。此后赵莉等3对实验犬部分结扎门脉使其截面积
3、缩小 95%后，分别在术后不同时间再次开腹观察，发现 28 周门脉压较高，但随着侧支循环的建立，压力逐渐下降，1216 周门脉压才趋于稳定。门静脉主干部分结扎形成门脉高压症动物模型具有制作简单、可复制性强、门脉压力升高迅速，侧支循环形成明显等特点。但该类模型肝脏组织学几乎正常，门脉压力随侧支循环的开放而逐渐下降，主要适于门静脉系统高动力循环状态的研究，以及门静脉高压症前向性学说的探讨。1.2 门-腔静脉吻合制作模型 Saku 等4提出用血流量较大的下腔静脉与门静脉吻合制作犬门静脉高压症模型，由于压力形成不稳定，效果不理想。Dennis 等5在此基础上又同时缩窄门静脉主干，使模型制作效果有很大提
4、高。其方法是，开腹行下腔静脉和门静脉主干的侧侧吻合，吻合口长度约 2.53.0 cm，于吻合口上方的门静脉内置入 1 个内含琼脂环的钢圈起固定作用。琼脂吸水后不断膨胀而逐渐阻塞门静脉，在吻合口上方双重结扎腔静脉，使其下方的血液完全注入门静脉系统。用此法 36 周后全部成模，无死亡，门静脉压力明显增高，食管胃底静脉丛呈不同程度曲张，肝脏组织学改变不明显。秦云峰等6对上述方法做了改进，在下腔静脉-门静脉侧侧吻合、下腔静脉结扎及门静脉部分缩窄的基础上，采用介入放射学经导管栓塞技术处理门静脉，经导管用自制不锈钢丝卷阻塞门脉肝端。该方法造模的犬全部成活，吻合口通畅，术后门脉压力高，胃镜和 X 线门脉造影
5、以及病理切片证实食管下段黏膜下曲张静脉形成。黄莚庭等7也在犬上施行大口径门腔侧侧吻合术，然后在吻合口的近心侧结扎下腔静脉，做成腔门转流术后门静脉高血流状态的动物模型，结果发现门静脉尽管可以稳定地保持高血流状态，门静脉压力也持续不同程度地升高，但无明显侧支形成，肝脏也无组织学变化，肝功能良好，可见单纯的门静脉高血流状态并不能很好地形成门静脉高压症。而徐辉等8采用改良 Stiegmann 方法，对实验犬门静脉结扎，使门静脉管径缩小 40%60%，同时在肾上水平横断下腔静脉，近段关闭，远端与门静脉行端侧吻合，建立稳定的门静脉高压食管静脉曲张动物模型。门-腔静脉吻合制作的门脉高压症动物模型，门静脉压力
6、高，且相对稳定，形成明显的侧支静脉曲张，是具有食管胃底静脉曲张的门静脉高压症大动物模型，成功率高，重复性好，死亡率低，为食管胃底静脉曲张及内窥镜注射硬化剂治疗出血的研究提供了便利条件。2 肝内型门静脉高压症动物模型2.1 四氯化碳诱导肝硬化门静脉高压模型 1936 年 Cameron 和 Karunaratne9首次报道应用四氯化碳制作肝硬化动物模型。大动物最常见的给药途径是口服和腹腔注射。1993 年国内学者吕明德等10采用复合致病因子法成功制备了狗肝硬化模型，通过腹腔注射 CC14，外加高脂低蛋白饮食与饮用乙醇水增加了肝细胞对CC14 敏感性，促进肝脏病变。于实验第 8 周末肝硬化形成率达
7、 91%。 此后国内学者刘小玲11通过经胃管胃肠灌注 CC14 法建立稳定的犬肝硬化门脉高压模型，死亡率为 27%。曹罡等12采用门脉置管四氯化碳注射法制备狗肝硬化模型，即选取犬脾静脉属支插入硅胶管至近脾静脉主干处固定后，定期经导管缓慢滴注四氯化碳脂肪乳的葡萄糖稀释液。此给药方式不仅可根据动物体重及一般情况变化灵活调节药量、浓度及给药速度，而且对腹腔干扰轻微，非常有利于进一步进行外科学研究。而周忠信等13采用 CC14 与加苯巴比妥钠配合高脂低蛋白低胆碱饮食制备小型猪肝硬化门脉高压症模型，实验成员以广西巴马小型猪为实验对象，每日饲以经调配的高脂低蛋白低胆碱饮食，由 65%米饭加 35%猪油和胆
8、固醇混合组成，无水乙醇稀释成 10%作为唯一饮料。12 头小型猪于实验 16 周末均成功诱导出肝硬化，按 Madden 分级法14，17 头达到 I 级，5 头达到 IV 级，成功率为100%，死亡率为零。CCl4 所诱导的肝硬化模型有一定程度的门体分流，与人类营养障碍型肝硬化较为相似，经常被用来研究肝硬变后门脉高压症的血流动力学变化，但是该模型的纤维化和肝结节形成程度相对较轻，并且全身毒性作用大，可导致多器官功能衰竭，因此存在死亡率高的缺点，影响了其应用范围。2.2 二甲基亚硝胺（DMNA）诱导肝硬化门脉高压症动物模型 DMNA 主要在肝内微粒体药物氧化酶系统进行氧化代谢后，产生活性甲基、酯
9、酰烷基亚硝、甲烷亚硝胺胺等中间代谢产物，具有肝细胞毒性，导致肝细胞坏死，造成实验动物弥漫性、特异性损害。1937 年，英国学者 Freund 首先报道了 2 例有明显 DMNA 接触史的肝硬化病例，因而国内学者金树根15以此采用 DMNA 蒸汽吸入对犬进行染毒，成功复制类似上述病例的肝脏再生结节性肝硬化，首次用 DMNA 成功地制备出大动物肝硬化模型，其后通过口服16、静脉内给药17成功复制出门脉高压动物模型。一般形成门脉高压状态需 5 周左右，但出现明显的肝硬化及腹水需要 3、4 个月18-19。该种方法不足之处是：DMNA 本身是一种致癌物质，毒性大、易挥发，影响周围环境和人群，近年来，选
10、用此种方法制备动物肝硬化模型很少见。2.3 胆总管结扎法致肝硬化门脉高压症动物模型 通过结扎缩窄胆总管，使胆汁排出受阻，肝内胆汁淤积，制作肝硬化的模型。 Gliedman 等20发现肝内血管系统结构的扭曲和变形是该模型形成门脉高压症的重要原因。Shasha 等21以犬作为实验对象，结扎胆管，4 周后成功地制备了狗胆汁性肝硬化、门脉高压模型，用于研究胆汁性肝硬化血液动力学变化。此后 Bosch 等22对犬进行胆总管结扎，并对全身及门静脉区的血流动力学进行研究发现，经过 8 周后模型的门静脉压力达到(1.770.08)kPa，制成了门脉高压模型，证实胆汁性肝硬化血液动力学变化与人类相似的观点，并用
11、于评价肝硬化、门脉高压药物治疗效果。此外，这种大动物门脉高压模型也适合观察胆汁性肝硬化的外科手术治疗效果，国内史留斌等23、裘法祖24先后采用此方法复制出大动物肝硬化模型，并用于药物及手术治疗效果的评价。此建模方法较成熟，在猴等其他大动物身上也取得成功25。胆总管结扎法制作的门脉高压症模型，门静脉压力升高显著，并可出现广泛的门体分流。该模型与人类肝硬化患者在门脉及全身血流动力学方面有较好的相似性，适合对门脉高压症病理生理进行研究，是验证药物对门脉高压症作用的有效模型，还适合用于胆汁性肝硬化研究。但是存在以下缺陷：死亡率高达 50%，腹腔黏连，不利于下一步外科手术操作，胆管解剖变异导致建模失败。
12、2.4 门脉末梢栓塞制备门静脉高压症模型 1957 年 Tay-lor 首先介绍门静脉注入二氧化硅混悬液建立犬肝硬化门脉高压症模型的方法。此后 Buergener26用聚乙烯醇(polyvinylalcohol，PVA)以狗为对象制作门静脉高压症模型。PVA 是一种永久性血管阻塞因子，与血吸虫卵相似，阻塞于门静脉分支末梢，引起汇管区炎症，逐渐产生肝硬化。其方法是经皮肤穿刺，将套管置入门静脉主干，注入 PVA，每次 0.10.9 g，每隔 12 周 1 次，每次由 0.1 g 开始，逐渐加量至门静脉压达到或超过 20 cmH2O，并稳定于此。3 个月后成模，随着肝内门静脉较大分支被阻塞，狗存活率
13、下降。成模后门静脉压力显著增高，34 周后，出现门体侧支循环，8 个月后肝脏呈不同程度增生。此后，大西久仁彦等27用大肠杆菌成功地制作出狗门静脉高压症模型。其方法是将非致病性大肠杆菌用 1%福尔马林杀灭，再将其煮沸，使其只具有 O 抗原，并制成 O 抗体血清，将该血清和被杀死的大肠杆菌按比例混合后置于 50 培养箱内孵育，再把此种混合液以 4 mL/kg，由肠系膜上静脉插管注入到门静脉， 2 周内注入 710 次，1 个月后再注入 1 次，2.5 个月后即可成模。成模后门静脉压力显著增高，血流量增大，阻力增高；脾脏重量增加，血流量增大，阻力下降；空肠、回肠、结肠及网膜血流量增大，同时阻力下降；
14、病理检查示门静脉末梢纤维化、萎缩及狭窄，门静脉区血管紊乱，该模型适用于特发性门静脉高压症的研究。国内学者王瑞祥等28在犬上用埋入式药泵置入门静脉主干后，按 100 mg/kg 的剂量经药泵分批次注入 100400m PVA 颗粒，3 个月后形成不同程度肝纤维化门静脉高压症，并有不同程度的脾大及腹水。考虑到 PVA 主要依赖进口，陈军等29采用 300500m 的葡聚糖微球以10 mg/kg 的剂量，每 5 天注射葡聚糖微球 1 次，经门静脉留置导管注入猪门静脉，22 d 制成猪窦前型门静脉高压症模型，而葡聚糖微球是一种长效栓塞剂，球与血液等比重，栓子不易结块，使用方便，疗效持久。门静脉末梢栓塞
15、法制备门静脉高压症模型，方法简单，动物存活率及成功率较高，并可经药泵反复进行门静脉造影，了解侧支循环开放情况。所制备的动物模型，其肝内门静脉血流梗阻更符合临床，门静脉压力升高迅速，适合窦前型肝硬化与肝硬化血流动力学改变及门体分流的研究。3 肝后型门静脉高压症动物模型肝后型门脉高压症临床上最常见的疾病为 Budd-Chiari syndrome，即肝流出道阻塞引起的病理生理学改变。通过置入缩窄环于肝上段下腔静脉或肝静脉与下腔静脉汇合处，逐渐形成肝静脉流出道阻塞。结扎肝静脉或肝静脉汇入腔静脉处下游的下腔静脉，可造成肝充血及腹水为特征的肝后型门静脉高压模型，单纯使用本方法，并不能或仅能产生暂时性门静
16、脉高压。国内学者白殿卿等30在犬上用进腹途径采用左肝静脉缩窄的方法建立肝后性门脉高压动物模型，此模型在术后平均 7 d 即出现腹水，适用于门脉高压症腹水方面的研究。此后，王春喜等31通过介入技术找出犬肝右静脉和肝左静脉，保留一支主干肝静脉，通过注入无水乙醇破坏肝静脉的内膜，送入钢丝圈和明胶海绵进一步阻塞肝静脉和局部血栓形成，逐渐形成肝静脉闭塞或严重狭窄，造成肝脏血液回流障碍，瘀血性肝脏肿大，逐渐形成肝硬化门静脉高压，并出现胃底食管静脉迂曲扩张现象，病理切片下形态学结构与人类肝静脉阻塞引起的肝硬变即布加氏综合征形成的肝硬变一致。但介入方法的实施需要专门的技术与特殊的设备，限制了模型的广泛使用，而
17、且这种模型血流动力学干扰大，不适于这方面研究。综上所述，制备门脉高压症大动物模型的方法虽多，但是与人们预期目标存在较大差距。理想的大动物门脉高压症模型应具备以下条件：与人类肝硬化门脉高压的特征相同，造模成功率高，死亡率低，周期短，方法简单易行；造模因素对人体无害或者较少危害，环境污染小；腹腔干扰少，利于外科手术操作等。然而目前尚无一种理想的大动物门脉高压症模型能够满足上述要求，因而，寻找理想的门脉高压症大动物模型需要进一步探索和研究。【参考文献】1 Van Thiel DH, Gavaler JS, Slone FL, et al.Is feminization in alcoholic me
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