1、人脑脊液吲哚类物质的快速高效液相色谱检验法作者：陈亚琼 黄艳红 王健 辛晓燕 叶雪清 【关键词】 高效液相色谱 关键词: 高效液相色谱;脑脊液;吲哚类 0 引言 5-羟色胺（5-HT）是重要的中枢神经递质，与其前体色胺酸（TRP） 、5-羟色胺酸（5-HTP）和代谢产物 5-羟吲哚乙酸（5-HIAA）统称为吲哚类物质，是研究中枢 5-HT代谢的重要指标1，2 .为了了解中枢 5-HT的代谢状况，我们采用高效液相色谱法3，4 测定妇女脑脊液中四种吲哚类物质获得满意效果. 1 材料和方法 1.1 材料 1.1.1 仪器 日本日立公司的高效液相色谱仪包括 638-53型主机;650-10LC荧光检测
2、器;色谱柱:YWG-C18 H37 ，150mm4mm;颗粒直径5m;预柱:YWG-C18 H37 ，50mm4mm. 1.1.2 标准品及试剂 标准品:色胺酸（BDH，批号 5507760，AG） 、5-羟色胺酸（FLUKA，批号 56590，AG） 、5-羟色胺（Switzerland，批号，AG） 、5-羟吲哚己酸（5-HIAA，批号 Fluka，AG）.试剂:磷酸二氢钾（西安化学试剂厂） 、甲醇（西安化学试剂厂 AG）. 1.2 方法 1.2.1 储备液、标准液的配制 精确称取不同量的 4种标准品，用甲醇（V）水（V）=8020 稀释成不同浓度的混合储备液（TRP710mgL-1 ，5
3、-HTP310mgL-1 ，5-HT380mgL-1 ，5-HIAA230mgL-1 ） ，测定样品前稀释1000倍成为工作液. 1.2.2 工作条件 流动相 A液:甲醇 800mLL-1 ;流动相 B液:KH2 PO4 （0.02molL-1 ，pH4.75）:甲醇 955mLL-1 .线形梯度:流动相从 0增加到 35%，分析时间 30min.柱温 30，荧光波长290/330nm，狭缝 10，灵敏度 1. 1.2.3 样品预处理 取妇女腰池脑脊液 30L 以 5000rmin-1 ，4离心 5min，上清液置于带盖聚已稀塑料管内，储于-20冰箱在2wk内测定或立即测定.取 20L 标准品
4、混合工作液或 20L 脑脊液样品进样分析. 2 结果 2.1 标准曲线 各标准品的线性范围、相关系数、直线回归方程、标准品峰高的变异系数和相对误差见表 1，取标准品峰高均值按相关关系计算可得相应品峰浓度. 表 1 各标准品的线性范围、相关系数和直线回归方程（略） 2.2 回收率和灵敏度 回收率平均为（98.34.1）%.最低检测线10pg. 2.3 色谱分离图及样品检测结果 标准品和脑脊液样品色谱分离见图 1，对 2组不同年龄妇女脑脊液检测结果见表 2. 图 1 略 表 2 妇女脑脊液中吲哚类物质浓度 （略） 3 讨论 我们采用高效液相色谱反相梯度结合洗脱结合自然荧光检测法，一次进样 20L
5、同时分析人脑脊液中 TRP，5-HTP，5-HT，5-HIAA 等 4种物质.分析时间仅 30min，分离效果好.线性范围较广 015g，线性关系的相关系数平均为 0.9920.本法精度高，各标准品峰高的平均变异系数2.850.94.被测物质在脑脊液中的回收率平均为（98.34.1）%，表明准确性较高.最底检测限为 10ng.实验发现更年期妇女脑脊液中色氨酸水平显著低于育龄组，是否与卵巢功能衰退有关须进一步研究.实验表明，本法样本预处理及操作过程简便，经济实用，可直接应用于临床检验. 参考文献: 1Sjogren M， Minthon L，Passant U et al.Decreased m
6、onoamine metabolites in frontotemporal dementia and Alzheimers disease J.Neurobiol Aging，1998;19（5）:379-384. 2Martinez M，Arnalich F，Vazquez JJ etal.Altered cerebrospinal fluid amino acid pattern in the anorexia of aging:Relationship with biogenic amine metabolism J.Life Sci，1993;53（21）:1643-1650. 3Traiffort E，Hubert P，Tayeb N etal.Rapid determination of5-hydroxytryptamine in whole blood by liquid chromatography with fluorescence detection J.J Chromatogram，1991;571:231-234. 4陈亚琼，叶雪清.高效液相色谱法测定妇女血浆吲哚类神经递质J.第四军医大学学报，1995;16（4）:309-310.
