1、妊娠期肝内胆汁淤积症患者胎盘组织中肿瘤坏死因子- 表达的免疫组化研究【摘要】 目的 研究妊娠期肝内胆汁淤积症（ICP）患者胎盘组织中肿瘤坏死因子-（TNF-）的表达情况。方法 采用免疫组织化学染色技术, 检测 37 例 ICP 患者（ICP 组）及 33 例正常妊娠妇女（正常妊娠组）胎盘组织中 TNF- 的表达情况。结果 ICP 组胎盘组织 TNF- 的表达显著高于正常妊娠组（P0.05） 。结论 TNF- 的表达与 ICP 的发生、发展有关。 【关键词】 妊娠期肝内胆汁淤积症 肿瘤坏死因子- 免疫组织化学 Abstract: Objective To study the significan
2、ce of TNF- expression in the placenta in patients with intrahepatic cholestasis of pregnancy （ICP）. Methods The expression of TNF- in placenta was investigated in 37 patients with ICP and 33 normal pregnant women by immunohistochemical method. Results The level of TNF- expressed in ICP patients was
3、higher than that in normal pregnant women （P0.05）. Conclusion The expression of TNF- in placenta is related to the development of ICP, with its pathogenetic mechanism to be explored. Key words: intrahepatic cholestasis of pregnancy； tumor necrosis factor-alpha; immunohistochemistry 妊娠期肝内胆汁淤积症（intrah
4、epatic cholestasis of pregnancy, ICP） 是好发于妊娠中、晚期的妊娠并发症,表现为孕妇肝内胆汁淤积、血胆汁酸增高、皮肤瘙痒和（或）黄疸, 在分娩后迅速消失，通常被认为是产科高危因素。细胞因子在 ICP 的研究中越来越受到人们的重视。肿瘤坏死因子（tumor necrosis factor, TNF） 系统,特别是 TNF- 是近年来被认识的一种重要的细胞因子，参与多种生理与免疫过程。为进一步了解 TNF- 在 ICP 中的作用，本实验采用免疫组织化学（免疫组化）染色技术进行了胎盘组织中 TNF- 表达的研究, 现将结果报道如下。 1 资料和方法 1.1 病例及
5、分组 ICP 组共 37 例,纳入标准参照参考文献1:妊娠中、晚期出现局部或全身皮肤瘙痒,排除皮肤病;血清甘胆酸水平升高,转氨酶轻、中度升高;妊娠是引起皮肤疾病及生化异常的惟一原因;排除乙肝、丙肝等造成的转氨酶升高;症状、体征及生化异常在产后迅速消失或恢复正常。对照组为 33 例正常孕妇。2 组孕妇均在我院就诊，其年龄、分娩孕周无显著性差异，排除了感染、血液病、肿瘤及肝肾疾病等。 1.2 方法 1.2.1 胎盘标本的采集 胎盘娩出后立即在直视下剪取胎盘中央母体面、血管少的一小块组织（约 30 mm30 mm）,生理盐水冲洗干净后,切成约 15 mm15 mm 组织块,常规固定。 1.2.2 制
6、片 将固定的标本石蜡包埋 ,制成 5 m 厚的切片,TNF-免疫组化试剂盒由上海天呈生物技术有限公司提供，严格按说明书操作进行免疫组化染色。TNF- 在细胞质中表达,染色后呈现棕黄色颗粒。 1.2.3 TNF- 的阳性判断及分级标准 阴性对照用 PBS 代替一抗进行对照。TNF- 表达阴性和阳性根据细胞染色强度和染色细胞所占面积,即两者积分之和来判断。染色强度分为:不染色= 0,轻度染色=1,中度染色=2,强染色=3。染色面积分为:无细胞染色=0,25%细胞染色=1,25%50%细胞染色=2,50%细胞染色=3。若积分之和=0,则表达为（-） ；积分之和=1、2 则为（+） ；积分之和=3、4
7、,则为（+） ；积分之和=5、6,则为（+） 。 1.3 统计学处理 应用 SPSS 软件包进行统计学检验，临床资料进行配对 t 检验，TNF- 免疫组化数据进行 Wilcoxon 秩和检验，P0.05 为差异有显著性。 2 结 果 正常妊娠组及 ICP 组胎盘组织 TNF- 的免疫组化检测结果见表 1 和图 1、2。表 1 2 组胎盘组织 TNF- 的免疫组化检测结果 3 讨 论 ICP 是妊娠期特有并发症, 因其可导致早产、胎儿宫内窘迫增加围生儿死亡率,而备受关注2 。ICP 的发生、发展及临床过程较为复杂，至今其母婴死亡率仍较高。国外许多学者从不同方面对其发病机制进行探讨，目前仍无明确的
8、结果3 。妊娠时胎盘作为内分泌器官产生大量重要的细胞因子,这些细胞因子进入母体及胎儿血液循环，对代谢、免疫、血管等系统发挥多种作用。在整个妊娠期,这些细胞因子进行着复杂的平衡调节,维持了正常妊娠的过程。近年来研究表明，细胞因子作为参与免疫反应的重要介质，在 ICP 的发生、发展过程中起重要的作用4-5 。TNF- 主要是由单核-巨噬细胞分泌,其他类型的细胞,如淋巴细胞、平滑肌细胞、成纤维细胞等在一定条件下也具有产生和释放 TNF- 的能力，其主要通过受体发挥作用,参与多种生理与免疫过程。妊娠期 TNF- 主要由胎盘和脂肪组织合成和分泌6 。 本实验结果提示,TNF- 在 ICP 胎盘中的表达较
9、正常胎盘组织明显增强,TNF- 在 ICP 胎盘中表达上调。是何种原因导致 TNF- 在 ICP 胎盘中表达升高尚不清楚。推测，TNF- 可能引起胎盘滋养细胞凋亡增加,使螺旋动脉受损,导致胎盘缺血缺氧,进而引起胎盘代谢障碍；ICP 患者胎盘合成和分泌 TNF- 功能失调, 可能是 ICP 的发病原因之一。 【参考文献】 1 Arrese M, Reyes H. Intrahepatic cholestasis of pregnancy: a past and present riddleJ. Ann Hepatol, 2006,5（3）:202-205. 2 Beuers U, Pusl T.
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