1、视网膜色素变性不同证型红细胞免疫功能及 T 淋巴细胞表面抗原表达的改变作者：易细香，李传课，余杨桂 【关键词】 眼科 摘要：【目的】研究原发性视网膜色素变性(RP)的自身免疫发病机理及与中医证型的关系。 【方法】对 52 例不同中医证型的原发性视网膜色素变性患者及 22 例健康人进行红细胞免疫功能的两项指标即红细胞 c3b 受体花环结合率(RCR)、免疫复合物花环结合率(RICR)，及免疫复合物(CIC)、外周血 T 淋巴细胞表面人类白细胞 DR 抗原(HLADR)表达率的测定。 【结果】RP 患者 RCR、RICR 均降低，CIC 值增高，HLADR 表达增高，与正常组比较差异有显著性(P0
2、05 或 P001)；RP 患者的 RCR与 CIC 呈显著负相关关系(P001)；而脾肾阳虚组与肝肾阴虚组比较，RCR、RICR 下降更低、CIC 值和 HLADR 表达更高，差异均有显著性(P001)。 【结论】RP 患者红细胞免疫功能原发性低下，CIC 和 HLADR 抗原表达增高，提示了自身免疫性疾病 RP 因虚致瘀的发病过程。 关键词：视网膜炎，色素性/免疫学；视网膜炎，色素性/中医病机；肝肾阴虚；脾肾阳虚；红细胞/免疫学；T 淋巴细胞/免疫学 原发性视网膜色素变性(retinal pigmentation,RP)，属中医眼科的“高风内障”范畴，是一种以视网膜色素上皮和光感受器结构与
3、功能进行性受损的遗传性眼病。临床上以夜盲、进行性视野缩窄、中心视力逐渐减退，最终导致失明为主要表现。RP 在一般人群中的发病率约为1/40001/2000，在我国的群体患病率为 1/3467。目前其发病机理尚不明了，可能涉及多方面的因素。近年来围绕免疫功能与 RP 发病机理间的联系，已从不同侧面和层次进行了较多的研究，研究表明 RP 患者存在细胞免疫和体液免疫功能的异常，不少学者认为可能是自身免疫反应所致。本研究从红细胞免疫功能改变的角度来探讨 RP 的发病机理，并初步探讨其与中医证型间的关系。 1 资料与方法 11 研究对象 为湖南中医学院第一附属医院视网膜色素变性中心 19992001 年
4、的门诊及住院患者，具有典型的 RP 临床表现，经详细检查排除合并感染、肿瘤、贫血及其他自身免疫性疾病等，确诊 RP 者共 52 例。其中男 32 例，女 20 例；年龄最大者 65 岁，最小为 13 岁，平均年龄(3767287)岁；双眼无色素沉着者 2 例，单眼色素变性者 1 例，结晶样色变性者 5 例；视力下降、夜盲时间最长者 37 年，最短者 4 年，平均病程(1797 979)年。健康对照组为来自我院研究生、大专生和职工，排除全身性疾病及眼部疾病，共 22 例。其中男 14 例，女 8 例；年龄最大者 62 岁，最小者15 岁，平均年龄为(36341176)岁。 12 分组 52 例
5、RP 患者中属肝肾阴虚者 41 例，平均年龄为(4115852)岁；属脾肾阳虚者 11 例，平均年龄为(4360962)岁。根据病情分为病轻组和病重组，视力小于 02、视野小于 15(颞侧)者为病重组共 24 例，视力大于 02、视野大于 15(颞侧)者为病轻组共 28 例。 13 诊断及辨证标准 131 诊断标准 参考高等医学院校第 3 版教材眼科学和宋振英主编的眼科诊断学 1制定。 132 辨证参考标准 参考中医眼科学第 5 版教材2及中医虚证辨证参考标准3 ，结合导师经验制定。 肝肾阴虚型：眼局部症状：夜盲、进行性视野缩窄，中心视力逐渐减退，两眼干涩不适，具备两项以上；全身症状：头昏耳鸣
6、，腰膝酸软，五心烦热，颧红咽干，女子月经量少色红，男子遗精，舌红少苔或无苔，脉细数，具备 1 项以上。 脾肾阳虚型：眼局部症状：与肝肾阴虚型相同，但无两眼干涩不适，具备任意两项以上；全身症状：形寒肢冷，面色白，腰酸神疲，懒言食少，大便溏泄，五更泄泻，小便清长，或夜尿频多，女子白带多且质地清稀，男子阳萎早泄，舌淡胖有齿印或脉沉迟，具备 1 项以上。 14 观察指标及方法 141 红细胞 c3b 受体花环结合率(RCR)及免疫复合物花环结合率(RICR)的测定 采用郭峰法4 。主要试剂酵母多糖冻干试剂及补体致敏酵母多糖冻干试剂，均由第二军医大学长海医院免疫室提供。025%戊二醛(含主要成份 OHC
7、CH2CH2CH2CHO 23g/L)、甲醇、瑞氏染液等均由湖南中医学院第一附属医院中心实验室提供。 142 血清中免疫复合物(CIC)含量测定 用 PEG 沉淀法。主要试剂 PEG-6000 由天津天泰精细化工学品有限公司经销。 143 外周血 T 淋巴细胞表面人类白细胞 DR 抗原(HLADR)的测定 采用外周静脉血 3mL 以肝素抗凝，加 Hanks 液对倍稀释，经FicollHypaque 密度梯度离心 20min，取外周血单核细胞(PBMC)层经Hanks 液洗 2 遍，加 PRMI-1640 洗 1 遍，用 RPMI-1640 完全培养基(内含10mol/L Hgpes buffe
8、r，青霉素 100 U/mL)调细胞浓度至 5106/mL 于小试管，取 100L 于小试管内加 DR 单克隆抗体，后置 4温度下 1h 洗 2次，弃上清液悬浮至 20L，取样滴于载玻片上加盖玻片，置荧光显微镜下观察，计算 200 个细胞及其中荧光阳性细胞数，计百分率。 2 结果 研究结果显示，RP 患者的 RCR、RICR 均降低，CIC 和 HLADR 均增高，与正常组比较差异有显著性意义(P001)；RP 患者的 RCR 与 CIC 呈显著负相关关系(r=-0358 6，P001)，说明 RP 患者的红细胞免疫功能原发性低下，免疫复合物却增多。见表 1。表 1 RP 红细胞免疫功能及 H
9、LADR抗原表达与正常人比较（略） 研究还显示，其中脾肾阳虚组比肝肾阴虚组的 RCR、RICR 下降更低，CIC 值与 HLADR 表达更高(组间比较均 P001)，见表 2。表 2 RP 不同证型的红细胞免疫功能及 HLADR 抗原表达的比较（略） 红细胞免疫与 HLADR 抗原表达之间的相关分析结果表明，RP 患者RCR 与 HLADR 之间无显著性相关关系(r=-0233，P005)，说明红细胞免疫与 HLA-DR 抗原表达虽与自身免疫均密切相关，但两者之间可能不相关。3 讨论 31 从红细胞免疫功能改变探讨 RP 的发病机理 研究证明红细胞参与机体反应与免疫调控，具有识别、粘附、杀伤抗
10、原和传递抗原信息，促吞噬细胞吞噬功能，增强 T 细胞依赖性反应，清除免疫复合物的能力，并参与机体的免疫调控，有完整的自我调控作用5 。Siegel9等认为红细胞最重要和最主要的免疫功能是免疫粘附功能，通过其膜表面的型补体受体(CR1)功能粘附 CIC，即体内 CIC主要由红细胞清除。CIC 的形成是机体正常免疫的一部分，有利于破坏和清除对机体有害的抗原，但 CIC 过多沉积于局部组织，又会激活补体系统，释放出血管活性物质，引起免疫性损害。在自身免疫性疾病中由于自身抗原持续刺激机体产生自身抗体，待抗体的产生达到一定水平时，便出现 CIC，而 CIC 主要由红细胞清除。因此，红细胞免疫与自身免疫性
11、疾病的发生及病理过程密切相关。 Rahi10曾用免疫荧光法在 RP 患者血清中检出抗视网膜抗体，同时发现血清抗体水平的高低与 RP 的视网膜病变呈相关关系。RP 患者视网膜组织中光感受器特别是杆体细胞外段选择性地破坏的组织病理学也说明了主要存在于视网膜视杆细胞和视锥细胞外段的视网膜可溶性抗原(S-Ag)致病的可能性。因此，RP 可能是一种自身免疫性疾病，但目前尚缺乏公认的科学证据。 本研究结果显示：RP 患者与正常对照组比较 RCR、RICR 均降低，证明 RP 患者红细胞免疫功能原发性低下，而且 CIC 增高，从而为 RP 的自身免疫发病机理提供了新的依据。 32 HLADR 抗原与 RP
12、的发病机理 HLADR 是人类 MHCII 类抗原，位于 6 号染色体短臂 3P23 区段，资料显示：疾病易感性由 MHC 基因赋予6 ，50%以上遗传因素均与类抗原连锁基因相关。HLADR 抗原主要存在于抗原提呈细胞表面，静息的 T 细胞膜上不存在，具有控制免疫识别和应答反应始动环节等重要的生物学功效。HLADR 抗原在免疫应答中的主要作用与抗原的提呈、引起 T 细胞活化有关7 ，是 T 细胞活化的必需信号，抗原量的多少与免疫应答程度有关，这揭示了 HLADR 抗原异常表达在自身免疫过程的重要性。HLADR 抗原有异常表达在 Graves Sjogrens 综合征等自身免疫性疾病中普遍存在，
13、其作用可能与自身抗原触发自身免疫有关11 。 本研究结果显示 RP 患者外周血 T 淋巴细胞表面 HLADR 抗原异常表达，提示：HLADR 抗原与 RP 发病相关联，它可能参与了 RP 的免疫应答、免疫调节过程；DR 抗原可能作为一种自身抗原，为 RP 自身免疫反应中的关键环节；HLA 决定的免疫反应基因或疾病的易感基因与 RP 的发生相关联。 33 红细胞免疫功能与 HLADR 抗原表达的相关性 红细胞免疫、HLADR 抗原表达均与自身免疫反应密切相关。本研究RP 患者红细胞免疫功能原发性低下，其外周血 T 淋巴细胞表面 HLADR 抗原表达增高，研究显示两者之间无相关关系，说明 RP 患
14、者红细胞免疫功能低下不是 HLADR 抗原表达异常的直接原因。由于本研究病例不多，它们两者之间究竟有无相关关系、是如何相互影响的，有待今后进一步充实病例研究。 34 RP 中医证型与红细胞免疫功能改变的关系 审视瑶函有“夫目之有血，为养目之源，充和则发生长养之功，而少有亏滞，目病生焉” 。RP 类似中医“高风内障” ；傅仁宇认为：“此症俗呼鸡盲盖元阳不足之病” 。根据 RP 的临床病理特征，大多学者认为是“以虚为本” ， “虚”指先天不足，命门火衰；肝肾亏损，精血不足或脾胃虚弱，清气不升导致目失濡养。本实验结果证明 RP 患者红细胞免疫功能原发性低下，从新的角度证实 RP“虚”的病理本质；脾肾
15、阳虚组和肝肾阴虚组 RP 患者与正常对照组比较均有 RCR、RICR 降低，CIC、DR 增高；而脾肾阳虚组与肝肾阴虚组比较，RCR、RICR 下降更低，提示 RP 的红细胞免疫功能改变与中医证型有关；CIC 增多、HLADR 表达更高，似乎提示 RP“因虚致瘀”的发病过程。RP 发病具有遗传倾向，患者由于先天不足，肝肾先虚，致脾肾阳虚，命门火衰，使气血失利，目络瘀阻，最终表现为眼底血管普遍变细，甚则闭塞而发病，这一过程是一个以虚为本，因虚致瘀，最终发展为虚中夹瘀的缓慢病理过程，故在全身辨证的基础上，借助微观检测手段，将有利于预防和控制疾病的发展。该结论有待进一步证实。 参考文献 1宋振英眼科
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