1、野生松乳菇菌丝在不同培养基上的分离试验摘要以野生松乳菇的子实体作为分离材料,取子实体的柄基进行组织分离,分别接入不同配方的培养基上进行培养试验,结果表明,葡萄糖20g、酵母 1g、MgSO47H2O 0.5g、琼脂 20g、松根液 100mL(100g 松根+500mL 水煮沸过滤)、腐殖土水 100mL(100g 腐殖土+500mL 水煮沸过滤),加水至 1 000mL 的培养基上菌丝生长最好。 关键词松乳菇;培养基;菌丝生长 松乳菇(Lactarius deliciosus),别名松菇,其质脆味美,营养丰富,深受人们喜爱,每年 56 月和 1011 月有松乳菇上市,商品价值较高。近年来,野
2、生松乳菇产量逐年下降,人工开发已成发展趋势1-6。通过对野生松乳菇子实体进行分离,筛选出适合菌丝生长的培养基,以期为开发利用松乳菇奠定基础。 1 材料与方法 1.1 试验材料 野生菌株采自江西省吉安县凤凰镇松树林中,采摘朵形正常、生长健壮、内菌幕刚破、无虫害、成熟的新鲜子实体。 1.2 试验方法 1.2.1 母种培养基的配制。配方:葡萄糖 20g,酵母 1g,MgSO47H2O 0.5g,琼脂 20g,松根液 100mL(100g 松根+500 mL 水煮沸过滤),腐殖土水100mL(100g 腐殖土+500mL 水煮沸过滤),水加至 1 000mL。腐殖土液200mL(200g 腐殖土+1
3、000mL 水煮沸过滤);青松针液 200mL(300g 青松针+1 000mL 水煮沸过滤),松根液 200mL(300g 松根+1 000mL 水者沸过滤);啤酒糟 200mL(200g 干啤酒糟+1 000mL 水煮沸过滤);叶酸 0.01g;琼脂 20g;水加至 1 000mL。除未加入叶酸 0.01g,其他配方同。去皮马铃薯200g(切薄片加水 1 000mL 煮沸过滤),葡萄糖 20g,琼脂 20g,水加至 1 000mL。将以上 4 种配方分别装入 15mm 试管,每支 10mL,每组 100 支,于121下灭菌 30min,冷却做成斜面培养基。 1.2.2 组织分离。将子实体反
4、复冲洗干净,取柄基用酒精处理表面,在无菌条件下取中间部分切成小薄片,用接种针接入不同的培养基斜面上,每个处理接种 30 支试管。将接好种的试管置入人工气候箱内,在恒温25下进行培养,3d 后观察菌丝萌发生长情况,每天检查 1 次,将污染的试管拣出。 1.2.3 孢子分离。将一菌盖厚实、菌柄粗壮、外观光洁、无病虫危害的野生松乳菇切除柄基,反复冲洗,用干纱布吸去表面水分后,喷洒 75%酒精进行消毒,再用自来水反复冲洗,用纱布擦干,放在消好毒的玻璃钟罩内进行孢子收集。获得孢子后,用蒸馏水稀释,用滴管接入不同的培养基斜面上,每个处理接种 30 支试管。将接好种的试管置入人工气候箱内,在恒温 25下进行
5、培养,3d 后观察菌丝萌发生长情况,每天检查 1 次。 1.2.4 原母种扩大再生母种。将分离获得的纯菌丝体分别接入上述培养基斜面上,每种培养基各接 10 支试管,置于 25下培养,3d 后每天观察1 次。 2 结果与分析 2.1 不同培养基的分离效果 组织分离除培养基、外,培养基、均获得了菌丝纯培养物,但在不同的培养基上组织分离的成功率不一致。菌丝长势因培养基不同而异,培养基菌丝浅灰色,浓密,绒毛状生长;培养基菌丝浅灰色,较疏,匍匐生长。孢子分离因污染未获成功。培养比较适合用于松乳菇组织分离,分离的菌丝较粗而浓密,成功率为 40%;培养基上菌丝分离成功率高达 60%,但菌丝体纤细而稀疏(见表
6、 1)。 2.2 母种转接培养观察 接入培养基、上的菌丝体均能生长。以培养基、上的菌丝生长较好,菌丝体呈浅灰白色,较粗而浓密,放射型绒毛生长;培养基上的菌丝体长到第 4 天全部停止生长,未长满斜面;培养基上的菌丝体生长速度快,比、培养基提早 1.5d 长满斜面,但菌丝体稀而细。3 结论 试验结果表明,葡萄糖 20g、酵母 1g、MgSO47H2O 0.5g、琼脂20g、松根液 100mL(100g 松根+500mL 水煮沸过滤)、腐殖土水100mL(100g 腐殖土+500mL 水煮沸过滤),水加至 1 000mL 的培养基上松乳菇菌丝生长最好。 4 参考文献 1 施秀娟,孙东明,邱韩英,等.姬菇品种及其培养基筛选试验J.上海农业学报,2009(3):137-139. 2 徐瑞雅,齐志广,贾耐兵,等.食用菌最佳母种培养基的筛选J.河北农业科学,2007(1):23-24,45. 3 梁磊.食用菌液体菌种培养基与栽培料配方筛选研究J.宁夏农林科技,2006(6):38. 4 赵俊霞,王立安.四种食用菌母种培养基的筛选J.食用菌,2003(2):18,20. 5 陈文强,邓百万.两种食用菌液体发酵培养基筛选的初步研究J.氨基酸和生物资源,2000(3):29-32,41. 6 林娟,周选围.鸡腿菇母种培养基筛选研究初报J.中国食用菌,1998(2):22-24.
