1、液相色谱-质谱联用测定抗风湿类中药中非法添加化学药物成分【摘要】 目的建立快速、准确、高灵敏度的测定抗风湿类中药制剂中非法添加阿司匹林、氨基比林、布洛芬、双氯芬酸钠、吲哚美辛分析方法。方法采用 HPLC-DAD、UPLC/MS/MS 法对非法掺入的化学药物进行定性鉴别，并以 HPLC 测定含量。结果受试制剂中检测到掺有氨基比林、布洛芬、双氯芬酸钠、吲哚美辛。结论此方法灵敏准确，可作为抗风湿类中药制剂中非法添加阿司匹林、氨基比林、布洛芬、双氯芬酸钠、吲哚美辛的有效检测方法。 【关键词】 高效液相色谱仪; 超高效液质联用仪; 抗风湿类制剂; 阿司匹林; 氨基比林; 布洛芬; 双氯芬酸钠; 吲哚美辛
2、风湿性及类风湿性关节炎是常见病、多发病，而抗风湿类中药多数显效慢，需长期服用，但安全性高。解热镇痛抗炎药亦称非甾体抗炎药，其中除苯胺类药物外，绝大多数药物兼有抗风湿作用，此外糖皮质激素类亦具有抗风湿及类风湿作用。这些西药的共同特点是疗效迅速，长期服用副作用大。患者希望服用副作用小，见效有快的药品，造假者为迎合患者的这一需求，在中成药中非法添加解热镇痛抗炎类或糖皮质激素类西药。若患者在毫不知情的情况下长期、大量服用这种所谓的纯中药制剂，势必造成身体健康的损伤。为有效打击此种制假掺伪的不法行为，保证临床用药安全，本文参考有关文献15，研究建立了测定阿司匹林、氨基比林、布洛芬、双氯芬酸钠、吲哚美辛的
3、检验方法，通过 HPLC-DAD、UPLC/MS/MS 确认，可快速准确地判断中药制剂中是否非法掺入上述化学药物，可供药监、药检部门开展工作时参考。1 仪器与试药Agilent 1100 高效液相色谱仪，沃特世(Waters)ACQUITY UPLC Quattro MicroTM 超高效液相色谱串联三重四极杆质谱联用仪，MassLynxTM 4.1 质谱工作站软件;AL204 型电子天平(Mettler Toledo)。UP 超纯水制备系统。流动相所用甲醇、乙腈为色谱纯，水为超纯水，其余所用试剂为分析纯。阿司匹林、氨基比林、布洛芬、双氯芬酸钠、吲哚美辛对照品由中国药品生物制品检定所提供，抗风
4、湿类中药样品为市场监督抽样。2 方法与结果2.1 色谱条件色谱柱为 Watres Sunfire C18(4.6 mm150 mm, 5 m);以乙腈为流动相(A)，以 0.02 mol/L NH4Ac-0.05%HAc 溶液为流动相(B)，按下表中的规定进行梯度洗脱;检测波长 230 nm;体积流量 1.0 ml/min;进样量 10 l，柱温 30;理论板数按 5 个峰计均不低于 3 000;分离度应大于 3。梯度洗脱表见表 1。表 1 梯度洗脱时间 t/min 流动相 A(%)流动相 B(%)01090860402030702.2 质谱条件电喷雾电离源(ESI)，毛细管电压 3.5 kV
5、，孔电 30 V，萃取电压 2.0 V，透镜电压 1.0 V;源温 120，脱溶剂温度 350;脱溶剂气体流速 500 L/h，孔气体流速 50 L/h，正、负离子同时检测，扫描方式采用全扫描一级质谱、全扫描二级质谱(MS/MS)，质量采集范围100500。2.3 对照品溶液的制备精密称取阿司匹林、布洛芬对照品各 60 mg，氨基比林、双氯芬酸钠、吲哚美辛对照品各 20 mg 置同一个 100 ml量瓶中，加甲醇至刻度，超声处理 10 min,摇匀，作为对照品贮备溶液，精密量取对照品贮备溶液 1 ml 置 10 ml 容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。2.4 供试品溶液的制备若供试品为片剂或
6、丸剂，应细致研磨粉碎，称取约 0.3 g，置具塞锥形瓶中,精密加入甲醇 50 ml,称重,超声处理 20 min,放冷,用甲醇补足减失重量;若供试品为胶囊，取出内容物,细致研磨粉碎，称取约 0.3 g，置具塞锥形瓶中,精密加入甲醇 50 ml，称重,超声处理 20 min,放冷,用甲醇补足减失重量;若供试品为液体，量取 5 ml 于50 ml 容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀。取上述样品溶液适量，用 0.45 m 滤膜滤过，取续滤液，即得。2.5 线性关系考察精密称取阿司匹林 61.47 mg，布洛芬 38.41 mg，氨基比林 20.25 mg,双氯芬酸钠 20.07 mg,吲哚美辛 20.09
7、 mg 置 100 ml 量瓶中，加甲醇至刻度，超声处理 10 min,摇匀，作为对照品储备溶液，精密量取对照品储备溶液适量稀释成系列浓度的溶液，作为对照品溶液，分别精密吸取系列对照品溶液 10 l，注入液相色谱仪，测定，即得。见表 2。表 2 对照品标准曲线对照品回归方程 r 线性范围/gml-1 阿司匹林 Y=2.92e+004X + 1.35e+0050.995 630.735307.35 氨基比林 Y=9.00e+003 X - 2.45e+0020.999 810.125101.25 布洛芬 Y=5.20e+004 X + 1.10e+0040.999 519.205192.05 双
8、氯芬酸钠 Y=1.83e+004 X + 5.57e+0030.999 610.35100.35 吲哚美辛 Y=1.82e+004 X + 5.24e+0030.999 510.45100.452.6 回收率实验取抗风湿中药样品 0.15 g，各 6 份，精密称定,置 25 ml 量瓶中,分别加上述对照储备溶液 6,7.5,9 ml 分别加甲醇至刻度,超声处理 20 min,放冷,摇匀,滤过, 进行测定，计算加样回收率，阿司匹林、氨基比林、布洛芬、双氯芬酸钠、吲哚美辛的平均回收率分别为 94.25%，99.67%，95.31%，97.68%，98.09%，RSD 分别为3.12%，1.45%，
9、1.99%，1.19%，1.38%。2.7 检测限取“2.5”项下低浓度混合对照品溶液，逐渐稀释，依法测定，当信噪比(S/N)为 3 时，阿司匹林、氨基比林、布洛芬、双氯芬酸钠、吲哚美辛检测限分别为 91 ng，252 ng，1.056g，558 ng，1.092 g。2.8 样品测定经对多批次对抗风湿类中药制剂进行检测，结果在风湿灵胶囊、风痛宁片及某私人诊所配制的抗风湿制剂供试品溶液的液相色谱中呈现与对照品色谱图保留时间有相一致的色谱峰，同时对与对照品色谱保留时间一致的色谱峰，利用 DAD 分析紫外光谱图，结果光谱图也与对照品一致，对检测到的成分进行了定量，结果是：风湿灵胶囊含布洛芬 2.0
10、8%、双氯芬酸钠 1.94%、吲哚美辛 1.05%;风痛宁片含双氯芬酸钠 1.27%;某私人诊所配制的抗风湿制剂含氨基比林 0.89%。对照品色谱图及 UV 光谱图见图 12。2.9 质谱确证为保证检验结果准确无误，对可疑阳性样品进行了质谱确证，供试品中在与氨基比林、布洛芬、双氯芬酸钠、吲哚美辛对照品色谱保留时间及光谱图都相一致的样品进行质谱分析，结果供试品中一级质谱分子离子峰及二级质谱主要碎片离子都与对照品的一级质谱分子离子峰及二级质谱主要碎片离子相一致，即氨基比林(232.1、159.1、113.1)、布洛芬(205.2、161.2)、双氯芬酸钠( 294.0、250.0、214.0)、吲
11、哚美辛(356.0;312.1、297.1、270.1)。对照品质谱图见图 3。图 3 对照品质谱图3 结论由于中药组分的复杂性，所以有必要采用高选择性的分析手段。本法可快速、准确地对中药制剂中非法添加阿司匹林、氨基比林、布洛芬、双氯芬酸钠、吲哚美辛同时进行检测，专属性强，5 种化学药物可达基线分离。本法同时提供对照品和样品分子离子峰、二级质谱碎片和液相色谱保留时间及 UV 光谱信息，对化学物质达到准确定性、定量检测，先进可行，可作为抗风湿类中药制剂中质量和安全用药的控制。【参考文献】1 刘起中，李慧义，杭太俊.中药制剂中非法掺入化学药物成分的测定J.中国药师，2007，10(8)：735.2 王连水，姜建国，张西如，等. 液相色谱-质谱联用法检测药品非法添加醋酸泼尼松和地西泮J.中国药事，2008，22(4)：326.3 宋 辉，陈为飞.冯了性风湿跌打药酒假药中双氯芬酸钠定性、定量分析J.中国现代应用药学，2002，19(5)：405.4 周 艳，胡 琳，张宏祥，等 .检查天麻胶囊中添加吲哚美辛的方法研究J.中国药事，2006，20(10)：612.5 马春燕，许 啸，冯益明，等.天麻胶囊中非法掺入西药吲哚美辛的检出方法J.中国药品标准，2007，8(2)：66.
