1、云南野生八角茴香中莽草酸含量测定作者：张志信 李洪潮 胡国海 张仕秀 宋建平【摘要】 目的对云南省分布于文山、楚雄地区的野生八角茴香中的莽草酸含量进行分析。方法采用紫外分光光度法，检测波长 213nm，测定野生八角茴香中莽草酸的含量，并与文山富宁的种植八角茴香的莽草酸含量进行对比。结果平均回收率为 102.25%，RSD 为 2.576%。结论富宁的八角是提取莽草酸的优质原料。 【关键词】 八角 莽草酸 紫外分光光度法八角 Illicium verum Hook f.是八角科植物八角茴香的干燥成熟果实，主产于我国的广西和云南等省区和东南亚，是一种重要的辛香料1 。八角果实中含有的莽草酸，具有抗
2、炎、镇痛作用，是抗病毒和抗癌药物中间体，莽草酸的最新应用是用于制造抗禽流感药物“达菲”的重要原料。野生八角茴香主要生长在云贵川等地海拔 400600 m 左右的山区，年产量约 600 t 左右，野生八角有一定的毒性，不能直接食用，但它的莽草酸含量却高达 10%以上，故多用于工业提取莽草酸2 。富宁县是八角之乡，平均年产量为 1 300 t，八角油年产 200 t 以上，栽培面积居全国县级种植面积的第 3 位，产量居第 2 位，质量则居第 1 位。本实验通过测定云南省不同地方的野生八角中莽草酸含量，并与云南省的八角主产区富宁种植八角中的莽草酸含量进行比较，为云南省八角茴香资源的开发提供科学依据。
3、1 仪器与材料1.1 仪器 KQ2200 型超声波仪（昆山市超声仪器有限公司） ；UV2501 紫外分光光度计（日本岛津） ；AEL-40SM 十万分之一天平（日本岛津） ；干燥箱 CS-101-2CS（重庆实验仪器厂） ；R201D型旋转蒸发仪（上海申顺生物科技有限公司） ；DAF6050 真空干燥箱（上海新苗医疗器械制造有限公司） 。1.2 材料与试剂野八角分别于 2007-10 采自西畴、马关、武定，种植八角采自富宁，经云南文山师范高等专科学校生化系沐建华讲师鉴定无误，于 105烘至恒重，粉碎，过 60 目筛备用；莽草酸对照品购于中国药品生物制品检定所；其它试剂均为分析纯。2 方法2.1
4、 超声提取精确称取 2.000 0 g 八角茴香粉末于 50 ml 锥形瓶中， 以水为溶剂，按各种设定条件（时间， 料液比，提取次数）进行超声提取， 提取液减压抽滤，合并滤液于旋转蒸发仪中浓缩至浸膏，浸膏 2 次用醋酸乙酯 20 ml 于 50浸泡数分钟， 倾去上层清液， 残留物次用丙酮 20 ml 回流数分钟， 抽滤， 真空干燥，加甲醇溶解于 50 ml容量瓶中， 于 213 nm 测定吸光度。2.2 莽草酸含量测定2.2.1 标准曲线的绘制3精确称取 10.0 mg 莽草酸对照品于50 ml 容量瓶中，以甲醇溶解，定容至刻度，得 0.2 mg/ml 莽草酸标准溶液。精确吸取 0，0.2，0
5、.4，0.6，0.8，1.0 ml，分别置于 10 ml 容量瓶中，甲醇定容至刻度，于 213nm 处测得的吸光度 A 对莽草酸浓度 C 回归，得回归方程：A=39.294C + 0.004 8，r=0.999 7，在 420 g/ml 的范围内，莽草酸浓度 C 对吸光度 A 有良好的线性关系。2.2.2 样品含量测定取提取物的甲醇溶液于 1 ml，按“2.2.1”项下方法测定样品含量。样品含量的计算公式为：莽草酸含量（mg/g 干重）=50CW式中 C 为提取物甲醇溶液的莽草酸浓度（mg/ml） ；W 为样品质量（g） 。2.3 回收率的测定准确称取武定采收的野八角样品 2 g，共 3 份，
6、分别加入一定量的莽草酸对照品，按“2.2.1”项操作。用紫外分光光度计测定吸光度，得出莽草酸含量，根据回收率公式计算出回收率。回收率（%）=（混合后测得莽草酸含量-样品中莽草酸含量）莽草酸对照品加入量100%2.4 精密度实验精密称取富宁采收的种植八角茴香样品 2 g，共6 份，按“2.1”及“2.2”项下方法测定莽草酸含量。3 结果3.1 超声作用时间对莽草酸提取率的影响为了探讨超声作用时间对莽草酸提取效果的影响，取 2 g 富宁种植八角样品，加入 80 ml 蒸馏水，水浴温度 70，采用不同超声时间提取 3 次，按“2.1”及“2.2”项下测定莽草酸含量。结果见表 1。表 1 超声作用时间
7、对莽草酸提取率的影响（略）由表 1 可以看出，随着超声时间的增加，提取率不断提高，当超声 40 min 时，莽草酸的提取率最高，继续超声则莽草酸的提取率呈现下降趋势，这可能是由于超声时间过长，导致熔剂挥发而造成的。故根据实验结果选择每次超声作用时间为 40 min。3.2 提取温度对莽草酸提取率的影响为了温度对莽草酸提取效果的影响，在其它条件相同的情况下，仅改变超声提取水浴温度，按“2.1”及“2.2”项下测定莽草酸含量。结果见表 2。表 2 提取温度对莽草酸提取率的影响（略）由表 2 可以看出，随着超声提取水浴温度的上升，莽草酸的提取率呈现上升趋势，但当超声提取水浴温度超过 70，熔剂的挥发
8、量急剧加快，导致提取率下降，根据实验结果确定超声提取水浴温度为 70。3.3 液料比对莽草酸提取率的影响为了探讨液料比对莽草酸提取效果的影响，在其它条件相同的情况下，仅改变水和样品的体积质量比。结果见表 3。表 3 液料比对莽草酸提取率的影响（略）由表 3 可以看出，当液料比为（mlg）40 1 时，莽草酸的提取率最高。液料比太小，溶剂不足以溶解足够多的溶质；而液料比太大，会增加超声波破碎细胞的阻力，使细胞破碎程度下降，从而降低莽草酸的提取率。综上所述，根据实验结果，选择液料比为 40 1。3.4 超声提取次数对莽草酸提取率的影响为了探讨超声作用次数对莽草酸提取效果的影响，取 2 g 样品，加
9、入 40 ml 蒸馏水，水浴温度70，每次超声时间 40 min，分别提取 1，2，3 次，按“2.1”及“2.2”项下测定莽草酸含量。结果见表 4。表 4 超声提取次数对莽草酸提取率的影响（略）从表 4 可以看出，随着提取次数的增加，莽草酸的提取率呈现增加趋势，对样品提取 3 次，样品中的莽草酸基本提取完全，本实验选择超声提取 3 次。3.5 八角茴香中莽草酸含量测定分别称取不同产地的八角茴香干粉 3 份，每份 2 g，采用每次超声 40 min，液料比（mlg）为 401，提取水浴温度 70，提取 3 次的工艺进行提取，按“2.1”和“2.2”项下方法进行提取和测定。结果见表 5。表 5
10、不同产地八角茴香中莽草酸的含量测定结果（略）3.6 样品回收率实验以富宁种植八角茴香样品 2 g 进行回收率实验，结果见表 6。由表 6 可以看出本实验的平均回收率为 102.25%，RSD为 2.576%。表 6 回收率实验结果（略）3.7 精密度实验精密度实验结果见表 7。从表 7 可以看出，相对标准偏差为 0.201 1 %，结果显示重现性较好，精密度较高。表 7 精密度实验结果（略）4 结论通过对 3 种产地不同的野生八角茴香中的莽草酸含量进行测定，武定产的野生八角茴香的莽草酸含量最高达 135.05mg/g(干重)，而产于西畴、马关的莽草酸含量稍低一些，分别为 126.32 和 12
11、1.51mg/g（干重)，可以作为提取莽草酸的原料。通过对富宁种植八角茴香中莽草酸含量的测定，其含量为110.46mg/g（干重)，与野生八角相比低一些，但来源可靠，通过利用富宁种植八角茴香作为提取莽草酸的原料，使八角资源进一步得以综合利用，可以增加八角种植户的经济收入。提取测定方法稳定可靠以莽草酸为标准品，测定八角茴香中的莽草酸含量，具有简便、稳定、结果可靠的优点4，5 ，对进一步开发利用八角茴香中莽草酸很有实际价值。【参考文献】1 宋小妹，唐志书.中药化学成分提取分离与制备M.北京：人民卫生出版社，2004：31.2 刘永友，廖晓峰.莽草酸的研究进展J.化工时刊，2007，21（3）：54.3 林海禄，彭雪娇，罗明标，等.八角茴香中莽草酸超声提取工艺研究J.食品科技，2007，4：76.4 王晓强，郭亚健，杨春澍.高效液相法测定八角属部分植物果实中莽草酸的含量J. 中国中药杂志，2001，26（6）：447.5 边清泉，汪 红，罗 英，等.HPLC 测定不同植物中莽草酸的含量J.中国中药杂志，2007，32（14）：1485.
