1、正交设计优选通窍活血巴布剂中红花水提取工艺研究作者：张伟 唐明 张莉 张云丽 白小英 【摘要】目的 实验研究通窍活血巴布剂制备工艺中红花的最佳水提取方法。方法 采用高效液相色谱法，以红花黄色素为评价指标，考察L9(34)正交实验设计对通窍活血巴布剂中水提取工艺参数的影响。结果 提取次数对红花黄色素的提取具有非常显著的影响（P0.01） ，提取时间对提取效果有显著的影响（P0.05） ，浸提温度影响不显著（P0.05） 。结论 每次加水 10 倍红花药材量，60浸提 2 次，每次浸提 40 分钟。 【关键词】通窍活血巴布剂 红花黄色素 高效液相色谱法 提取 正交设计 通窍活血巴布剂制备工艺研究是
2、青岛市中医科研基金项目，是对古方通窍活血汤的剂型改革研究。本实验以红花黄色素为评价指标，L9(34)正交设计实验考察组方药物红花的水提取工艺，优化红花提取液制备方案。为该巴布剂制备工艺研究提供实验依据。 1 仪器、试剂与药材 1.1 仪器 1100 型高效液相色谱系统(美国 Agilent)；JA2003型电子分析天平（上海） ；超声波清洗器：KQ100 型(昆山市超声波仪器厂)；恒温水浴箱。 1.2 试剂与药材 红花黄色素 A，甲醇、乙腈为色谱纯，水为重蒸馏水，其余试剂均为分析纯。实验用药材取自本院中药库，经青岛市药检所中药科鉴定，红花为菊科植物红花的干燥花。 2 实验方法与结果 2.1 红
3、花黄色素含量测定方法 2.1.1 色谱条件 Diamonsil C18 柱(150mm4.6mm，5m)，以甲醇-乙腈-0.7%磷酸（26272）为流动相，流速 1.0mLmin-1，检测波长 403nm，柱温 40，进样量 10L。 2.1.2 线性关系 精密吸取浓度为 0.1012mg/ml 的对照品溶液0.5、1、2、3、4、6、8l（进样量依次为0.0506、0.1012、0.2024、0.3036、0.4048、0.6072、0.8096g） ，按以上色谱条件进样，测得峰面积，以进样量为横坐标，峰面积为纵坐标进行回归，标准曲线方程为：Y=1.243105X-3.681103，r=0.
4、9993。结果表明红花黄色素 A 在 0.05060.8096g 范围内呈良好的线性关系。2.2 正交实验方法 2.2.1 正交实验因素水平的确定 固定每次加水 10 倍红花药材量，选择影响提取效果的三个主要因素: 浸提时间、浸提温度和浸提次数，每个因素各取 3 个水平，按 L9(34)正交表进行试验。试验因素水平见表 1。 表 1 正交设计因素水平 2.2.2 正交实验方法 称取红花粗粉 45.0g，共 9 份，每份与对应的处方比例量赤芍和桃仁的乙醇提取后药渣一起，分别按表 2 设计方案进行实验，分别合并提取液，过滤，定容至 2000.0ml。精密吸取滤液 1.0ml，水浴蒸干，残渣用甲醇溶
5、解并定容至 10.0ml；用微孔滤膜(0.45m)过滤，续滤液即为供试品溶液。分别进样 10L。每项试验平行重复 2 次。测定并计算各样品中红花黄色素 A 含量。 表 2 正交试验设计及结果 2.3 正交实验结果 实验结果表明，各因素对本工艺影响大小顺序为 CAB；考虑到生产周期，确定 A2B2C2 为红花水提取工艺方案，即每次加水 10 倍红花药材量，60浸提 2 次，每次浸提 40 分钟。 3 讨论 3.1 红花黄色素不稳定， 其水溶液中的保留率随温度升高和时间延长而下降1，提示在含红花药材的制剂工艺研制时，要尽量避免长时间浸泡和高温处理2。 3.2 我们曾对加水量进行单因素考查，结果表明，加水量低于 8倍量时，溶剂不易充分浸泡红花药材，提取率较低；加水增至10、12、14 倍量时，提取量明显增加但差距不大。考虑到红花提取液是作为该巴布剂基质材料的溶胀溶媒，容量不宜太大，以减少后续浓缩处理对成分的影响。因此本实验固定加水量为 10 倍红花药材量。 3.3 我们还对该巴布剂组方药物中红花黄色素 A 的含量测定方法进行研究。 参 考 文 献 1金鸣，臧宝霞，李金荣，等.羟基红花黄色素 A 热稳定性的初步研究J.中国中药杂志，2003，28(12):1197-1198. 2周平兰，夏新华.红花黄色素提取工艺的研究.湖南中医学院学报，2004，24（1）：11-12.
