1、正交试验法优化布渣叶总黄酮提取工艺的研究作者：潘天玲，李坤平，贲永光，李掌娣 【摘要】 目的 研究布渣叶总黄酮的超声波提取和溶剂回流提取工艺。方法 以总黄酮得率为指标，利用单因素试验确定提取溶剂，通过正交试验法优化提取工艺参数。结果 以乙醇为溶剂，超声波提取的最佳条件为：70（体积分数）乙醇，固液比 130，30 、超声波（360 W，40 kHz）提取 2 次，每次 20 min，总黄酮得率为 10.214；回流提取的最佳工艺为：固液比 125，90 回流提取 2 次，每次 30 min，总黄酮得率为 9.735。结论 两种提取工艺效果相当。 【关键词】 布渣叶；总黄酮；超声波提取；溶剂回流
2、提取 Abstract:Objective To optimize the extraction procedure of total flavonoids from Microcos paniculata L. Methods Extraction solvents were optimized process by orthogonal test.Results For ultrasonic extraction , the optimal parameters were: 70% ethanol, solidliquid ratio 130, 2 times of extraction
3、at 30 and each 20 min, the total flavonoids yield was 10.214%. For reflux extraction, the optimal parameters were: solidliquid ratio 125, extracting 2 times at 90 and each 30 min, the total flavonoids yield was 9.735%. Conclusion Ultrasonic extraction and reflux extraction have the same effectivenes
4、s. Key words:Microcos paniculata L.; total flavonoids; ultrasonic extraction；solvent reflux extraction 布渣叶为椴树科植物破布叶 Microcos paniculata L.的叶，又名烂布渣、破布叶、火布麻等，其味甘、淡，性微寒，归脾、胃、肝经，广东民间常作茶饮，有清热消滞、利湿退黄的功效。布渣叶主要分布于我国广东、海南等地，尤以广东分布广，产量大，资源丰富，2 。布渣叶提取物主要含黄酮类化合物，罗集鹏等3从布渣叶中分离得到了异鼠李素、山柰黄素、槲皮素、5,6,4 三羟基3 甲氧基黄酮7O 鼠
5、李糖基葡萄糖苷和 5,6,8,4 四羟基黄酮7O 鼠李糖苷等 5 个黄酮类化合物；冯世秀等4也从其中分离出山柰酚3OD 3,6 二( 对羟基桂皮酰) 葡萄糖苷、山柰酚3OD 葡萄糖苷、异鼠李素 3OD 葡萄糖苷、异鼠李素 3OD 芸香糖苷、牡荆苷、佛来心苷、异佛来心苷、异牡荆苷等 8 个黄酮类化合物。但迄今为止，布渣叶主要是作为民间凉茶的原料，鲜见其提取物的研究报道；为了进一步开发布渣叶资源，本文对超声波提取和溶剂回流提取布渣叶总黄酮的工艺进行了研究。 1 材料与方法 1.1 材料 布渣叶购自广州致信中药饮片有限公司（批号：080320） ，由广东药学院药用植物教研室李钟老师鉴定为破布叶 Mi
6、crocos paniculata L.的叶，粉碎，过 20 目筛，石油醚脱脂，晾干，备用。 1.2 仪器与试剂 KH400KDB 数控超声波清洗器（江苏昆山禾创超声仪器有限公司） ，RE52CS 旋转蒸发仪（河南巩义英峪予华仪器厂） ，TU1810 紫外可见分光光度计（北京普析通用仪器有限责任公司） ，AY120 电子分析天平（日本岛津公司） 。 芦丁对照品购自中国药品生物制品检定所（批号：050923） ，氢氧化钠、亚硝酸钠、硝酸铝、油醚、甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯等均为市售分析纯。 1.3 总黄酮含量的测定方法 精密称取 120 干燥至恒重的芦丁对照品 10.2 mg，置 50 mL容量
7、瓶内，用体积分数为 70%的乙醇溶解并稀释至刻度，即得芦丁对照品溶液。精确吸取 0.4、0.8、1.2、1.6、2.0、2.5、3.0 mL 芦丁对照品溶液置 10 mL 量瓶中，分别补加体积分数为 70%的乙醇至 5 mL，顺序加入质量分数 5%的 NaNO2 溶液 0.3 mL（放置 6 min） ，质量分数 10%的 Al(NO3)3 溶液 0.3 mL（放置 6 min） ，质量分数 4%的 NaOH 溶液 4 mL，再加入体积分数 70%的乙醇溶液至刻度，摇匀，静置 15 min 后在 510 nm处测定吸光度值。以吸光度（A）对浓度（C）回归处理得标准曲线方程：A=0.005 68
8、 C0.014 73（r=0.999 6） 。 取各待测样 0.1 mL，按上述标准曲线显色方法显色后在 510 nm处测定吸光度值，根据上述标准曲线方程计算总黄酮的含量和得率。 1.4 正交试验设计与提取工艺优化 参考文献5 ，以总黄酮得率为指标，采用 L9（34）正交试验，对回流提取工艺中乙醇浓度、回流时间、回流温度和固液比等 4 个因素进行优化；采用 L16（45）正交试验，对超声波辅助提取工艺中溶剂浓度、提取时间、提取温度、固液比和超声功率等 5 个因素进行优化。 2 结果与讨论 2.1 提取溶剂的影响 分别考察甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯等不同溶剂的提取效果，见表 1。从表 1 可知，
9、以甲醇作溶剂的提取效果最高，乙醇次之，水居中，丙酮和乙酸乙酯较差。对甲醇和乙醇而言，乙醇毒性更小，更安全，价格便宜，易回收利用，故选择乙醇作为提取溶剂。表 1 不同溶剂对总黄酮得率的影响 2.2 正交试验结果与分析 称取经预处理后的布渣叶粉 5.0 g，分别按表 2 和表 3 设计的因素和水平，采用溶剂回流法和超声波法提取布渣叶中的总黄酮。提取液旋转蒸发器中减压浓缩后均以体积分数 70的乙醇溶解，过滤，定容至100 mL 容量瓶中，即为待测样，按“1.3”项下方法测定总黄酮含量，计算总黄酮得率。表 2 溶剂回流工艺正交试验结果 由表 2 可以看出，各因素影响顺序依次为 BADC，即乙醇浓度对提
10、取结果影响最大，其次是固液比、再次是提取温度，影响最小的是提取时间；由 k 值分析可以得知，最佳提取工艺参数组合为A3B1C3D3，即以 50%（体积分数）乙醇为溶剂，固液比 125，90 提取 30 min。从 B 因素的 k 值分析发现 50%（体积分数）乙醇和 70%（体积分数）乙醇提取能力相当，但 2 者皆与 90%（体积分数）乙醇提取效果差异较大，其原因有待进一步研究。另外，从 C 因素的 k 值分析发现回流提取 60 min 的总黄酮得率均低于 30 min 和 90 min 两个水平，这与一般的提取分离传质规律有些不同，具体原因也需要进一步的探讨与分析。 由表 3 可知，各因素影
11、响顺序依次为 DEBCA，即乙醇浓度对提取结果影响最大，其次是固液比，再次是提取温度和超声功率，影响最小的是提取时间。从各因素的 k 值分析可以得知，超声强化提取的最佳条件为 A4B1C1D3E3，即以体积分数 70%的乙醇为溶剂，固液比 130，360 W、40 kHz 超声波 30 提取 80 min；但从 A 因素的 k 值分析发现提取 20 min 和提取 80 min 效果相当，又因为 A 因素对总黄酮得率影响最小，所以选择提取 20 min 作为优化条件。 23 验证试验 按照优化的工艺参数，对同一药材进行了 4 次连续提取试验，结果回流提取工艺每次的总黄酮得率分别为 7.534、
12、2.201、0.930和0.152；超声波提取工艺每次的总黄酮得率分别为8.318、1.896、0.89和 0.290；据此可以看出 2 种工艺前两次的总黄酮得率分别占 4 次提取的总黄酮总量的 89.997和 89.644，从实际生产考虑，2 种工艺均以提取 2 次较为合适。表 3 超声波辅助提取工艺正交试验结果 3 结 论 以乙醇为溶剂，2 种方法均能较好地提取布渣叶总黄酮，其中，超声波提取工艺的最佳条件为：70（体积分数）乙醇，固液比130，360 W、40 kHz 超声波、30 提取 2 次，每次 20 min，总黄酮得率为 10.214；回流提取工艺的最优参数为：固液比 125，90
13、 回流提取 2 次，每次 30 min，总黄酮得率为 9.735。 【参考文献】 1 中华本草编委会.中华本草：第 14 卷M.上海:上海科学技术出版社,2000：4310-4312. 2 广东省食品药品监督管理局.广东省中药材标准:第 1 册M.广州：广东科技出版社，2004:66-67. 3 罗集鹏，杨世林.布渣叶黄酮类成分的分离与鉴定J.中草药,1993，24（9）：455-456. 4 冯世秀，刘梅芳，林立东，等.布渣叶中三萜和黄酮类成分的研究J.热带亚热带植物学报,2008，16（1）:51-56. 5 李坤平，杨国恩，潘天玲，等.正交试验法优化竹叶总黄酮提取工艺研究J.广东药学院学报,2004，20（2）：102-103.
