1、正交试验优选肿节风的提取工艺作者：伍振峰，何伟，李勇，马建春 【摘要】 目的 优选肿节风最佳提取工艺。方法 以高效液相色谱法测定异嗪皮啶含量，以紫外分光光度法测定总黄酮含量，采用正交试验优选提取工艺条件。结果 优选得到的工艺条件为：50%（体积分数）乙醇，7 倍量，提取 3 次，每次 1.5 h。结论 优选工艺条件提取率高，可为工业化生产提供实验依据。 【关键词】 正交试验；肿节风；提取工艺；异嗪皮啶；总黄酮 Abstract:Objective To optimize the extraction procedure of Sarcandra glabraMethods The conten
2、ts of isofraxidin and total flavonoids were determined by HPLC and UV spectrophotometry, respectively. Extraction procedure was optimized by orthogonal testResults The optimal extraction conditions were as follows：50 of alcohol, 7 of solidtoliquid ratio, three 1.5 h of extraction cycles. Conclusion
3、The method has high extraction efficiency，and could be used for scaleup. Key words:orthogonal test；Sarcandra glabra；extraction procedure；isofraxidin；total flavonoids 肿节风系金粟兰科（Chloranthaceae）草珊瑚属植物草珊瑚Sarcandra glabra (Thumb.) Nakai 的干燥全草，又名九节茶、接骨草、草珊瑚，其味苦、辛，性平，具清热凉血、活血消斑、祛风通络等功效1 ，主要含有异嗪皮啶(isofraxidi
4、n)等香豆素类化合物及落新妇苷(astilbin)等黄酮类成分2 ，主产于广东、广西、江西等地， 中国药典2005 年版一部将其收载为正品药材。本文以高效液相色谱法测定肿节风提取液中异嗪皮啶的含量，以紫外分光光度法测定总黄酮的含量，应用多指标综合评分法对正交试验结果进行分析，为肿节风相关制剂的研究开发提供参考。 1 仪器与材料 1.1 仪器 Dionex ultimate 3000 高效液相色谱仪（光电二极管阵列检测器、Chromeleon 色谱工作站） ；BS224S 型电子分析天平（北京 Sartorius） ；UV1101 型紫外分光光度计(上海天美科学仪器有限公司)。 1.2 材料 芦
5、丁对照品（批号：100080200306 ，含量测定用） 、异嗪皮啶对照品（批号：110837200304 含量测定用） ，均购于中国药品生物制品检定所；肿节风药材：购于广州致信药业有限公司，经鉴定符合中国药典2005 年版一部肿节风项下标准；甲醇、乙腈为色谱纯，其余试剂为分析纯。 2 方法与结果 2.1 正交试验设计 依据预试验结果，以乙醇浓度、乙醇用量、提取时间和提取次数为考察因素，每因素设 3 个水平，采用 L9（34）正交试验表安排试验（见表 1） 。表 1 因素水平表表 2 正交试验结果 2.2 异嗪皮啶含量测定 2.2.1 色谱条件 色谱柱：Kromasil C18（250 mm4
6、.6 mm， 5 m） ；流动相：乙腈0.2% 磷酸溶液（体积比 2080） ；检测波长：344 nm；柱温：30 ；流速：1.0 mL/min；进样量：20 L。 2.2.2 对照品溶液的制备 精密称取异嗪皮啶对照品 0.010 5 g， 用甲醇溶解并定容至 10 mL 量瓶中，精密吸取 2 mL，用甲醇定容至 50 mL，得质量浓度为 0.042 mg/mL 的对照品储备溶液。 2.2.3 供试品溶液的制备 称取肿节风药材 20 g，置 500 mL 的圆底烧瓶中，按表 2 条件提取，滤过，分别定容至 500 mL 量瓶中，作为样品溶液。精密量取样品溶液 25 mL，用提取溶剂分别定容至
7、50 mL，精密吸取 5 mL，置蒸发皿中，水浴蒸干，残渣加甲醇溶解并定容至 10 mL，用 0.45 m 的微孔滤膜滤过，即得。 2.2.4 标准曲线的制备 精密吸取异嗪皮啶对照品储备溶液1、2、3、5、10、15 mL，置 25 mL 量瓶中，加甲醇定容，用 0.45 m的微孔滤膜滤过，精密吸取 20 L 注入液相色谱仪，按上述条件测定异嗪皮啶吸收峰峰面积，以异嗪皮啶微克数为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程 Y948.96X+0.02，r=0.999 9，表明异嗪皮啶进样量在 0.033 60.504 g 范围内与峰面积积分值呈良好的线性关系。 2.2.5 含量测定
8、精密吸取供试品溶液、对照品溶液各 20 L，注入液相色谱仪，测定异嗪皮啶峰面积，计算异嗪皮啶含量。 2.3 总黄酮含量测定3 2.3.1 标准曲线的制备 精密称取芦丁对照品 20.8 mg，置 100 mL量瓶中，加体积分数为 60的乙醇溶解并定容至刻度，分别精密吸取0、2、3、4、5、6、7 mL，置 25 mL 量瓶中，分别加体积分数为 60的乙醇补足至 7 mL，加入质量分数为 5亚硝酸钠 1.0 mL，摇匀，静置 6 min，加入质量分数为 10硝酸铝 1.0 mL，摇匀，静置 6 min，再加入质量分数为 4的氢氧化钠 10.0 mL，用体积分数为 60的乙醇定容至 25 mL，摇匀
9、，静置 10 min 后，用可见紫外分光光度计于 510 nm 处测吸光度。以芦丁对照品的浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程： Y=11.717X-0.006，r=0.999 9 线性范围为 0.016 640.058 24 mg/mL。 2.3.2 供试品溶液的制备 取“2.2.3”项下的溶液 25 mL 定容至50 mL 量瓶中，精密吸取 20 mL，置蒸发皿中，水浴蒸干，残渣用体积分数 60乙醇溶解并定容至 25 mL，滤过，作为供试品溶液。 2.3.3 含量测定 精密吸取供试品溶液 2 mL 置 25 mL 量瓶中，按“2.3.1”项下方法操作，测定吸光度值，计算样
10、品中总黄酮的含量。 2.4 正交试验结果及分析 按异嗪皮啶含量和总黄酮含量各占 50的权重综合评分，对正交试验结果进行极差和方差分析，试验结果见表 2。从结果可知，因素 D 对提取效率有显著性影响（P0.01） ，其他各因素排序为 BAC，优选工艺条件为 A2B3C3D3。由于因素 B、C 对提取效果的影响较小，结合生产成本考虑，进一步对 A2B2C2D3 与 A2B3C3D3 进行比较验证试验。结果异嗪皮啶含量分别为 0.475 5 mg/g 和 0.477 9 mg/g，总黄酮含量分别为0.046 4 g/g 和 0.047 3 g/g，表明两者差异无显著性。确定提取工艺为A2B2C2D3
11、，即 50%(体积分数)乙醇、7 倍量、每次提 1.5 h，提取 3 次。 3 讨 论 3.1 本试验总黄酮的含量测定是参照文献的方法进行，但在实验过程中发现,样品随放置时间延长，吸光度测定值逐渐减小，而且结果相差较大。因此，在试验的过程中应严格控制各个步骤的操作时间，保证各样品在同一条件下测定。 3.2 总黄酮和异嗪皮啶是肿节风药材的有效成分，体外抗肿瘤活性试验表明，异嗪皮啶具有抑制肿瘤细胞生长的作用，总黄酮对小鼠艾氏腹水癌实体型有一定的抑制作用， 。本文采用高效液相色谱法和紫外-可见分光光度法分别测定异嗪皮啶和总黄酮的含量，并选择多指标综合评价方法确定最佳工艺条件，使所选工艺条件更合理可行
12、。 【参考文献】 1 国家药典委员会中华人民共和国药典：2005 年版一部S 北京：化学工业出版社，2005：154 2 WING Yantsui ，GEOFFREY D BCycloeudesmanolides from Sarcandra GlabraJ Phytochemistry，1996，43(4)：819-821 3 王敦清，李先春草珊瑚根茎叶中总黄酮成分的研究J 中草药，1996，27（6）：237-238 4 王菲，袁胜涛，朱丹妮肿节风抗肿瘤活性部位的化学成分J 中国天然药物，2007，5（3）：174-178 5 周金煦，陆丽娟，胥彬，等肿节风抗肿瘤作用的研究J 肿瘤，1988，8（5）：261
